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顺铂联合exosomes抗小鼠肝癌效应的实验研究被引量：5: 2009年; 目的:评价顺铂(DDP)与exosomes联用的抗肿瘤效果,研究其可能机制。方法:采用MTT法检测顺铂对小鼠肝癌H22细胞增殖的影响,用H22源exosomes瘤苗免疫小鼠,3H-TdR释放法检测exosomes诱导产生的CTL活性及顺铂对CTL杀伤的增敏作用,RT-PCR检测顺铂作用后H22细胞中Fas及exosomes免疫后脾淋巴细胞FasL的mRNA表达水平,Western blot检测顺铂对H22细胞Fas的蛋白表达水平的影响。以小鼠肝癌H22细胞接种BALB/c小鼠建立动物模型,观察顺铂联合exosomes治疗对小鼠生存期的影响。结果:顺铂抑制H22细胞生长呈量效关系;exosomes免疫小鼠可诱导产生针对H22细胞的CTL反应,经2.5mg/L顺铂预处理24h的H22细胞对CTL杀伤的敏感性增强(P<0.05)。顺铂在mRNA和蛋白水平,显著增强H22Fas的表达;exosomes免疫小鼠后,脾淋巴细胞FasL表达增加。顺铂联合exosomes组小鼠生存期较单独治疗组及对照组明显延长(P<0.05)。结论:顺铂与exosomes联合治疗有协同抑制肿瘤的作用,产生协同作用的机制与增强CTL活性有关。; 汪少华沈宜李静向自武范维珂陈黎; 关键词：顺铂 EXOSOMES 肿瘤疫苗

热休克小鼠肝癌细胞(H22)源Exosomes的体内抗肝癌作用研究: 2010年; 目的:在荷瘤BALB/c小鼠观察热休克小鼠肝癌细胞(H_(22))源Exosomes(HS-Exo)激发宿主抗肝癌免疫应答的效应。方法:用自行分离纯化的小鼠肝癌细胞H_(22)源Exosomes及HS-Exo免疫小鼠,然后给小鼠皮下接种H_(22)肿瘤细胞,观察肿瘤的生长状况。用MTT法检测小鼠脾细胞增殖情况和细胞毒活性;用免疫组织化学法检测肿瘤组织中CD_4^+、CD_8^+T淋巴细胞浸润情况。BALB/c小鼠皮下接种H_(22)细胞,肿瘤长至可触及大小后,分别注射Exosomes及HS-Exo进行治疗,观察各组肿瘤大小及其小鼠存活期。结果:与对照组Exosomes相比,HS-Exo能使肿瘤出现时间延迟,肿瘤生长缓慢(P<0.05);更能促进脾淋巴细胞增殖并增强其细胞毒活性(P<0.05),能更有效的诱导CD_4^+和CD_8^+T细胞活化(P<0.05);更为显著的抑制了小鼠的肿瘤生长(P<0.05)。结论:HS-Exo具有更强的免疫活性,能更好的诱导小鼠抗H22肝癌作用,有针对亲本细胞的免疫保护作用,并且具有更为显著的肿瘤治疗作用。; 杨麟沈宜汪少华李静汤为学郑维萍; 关键词：EXOSOMES 热休克肿瘤疫苗

CTRP3调控AMPK减轻脑出血继发性损伤的作用及机制研究: 背景：脑出血患者神经系统逐步恶化的同时伴有大量神经元的减少和血管的损害。血管再生可以预防脑出血后继发性神经元损伤，对脑出血患者而言，血管再生将是一个有效的目标靶点。C1q/肿瘤坏死因子（TNF）相关蛋白-3（C1q/tu...; 汪少华; 关键词：脑出血血脑屏障破坏神经保护

放化疗联合肿瘤疫苗协同抗肿瘤作用研究: 2008年; 汪少华沈宜; 关键词：化学治疗肿瘤疫苗抗肿瘤免疫

UO-126对HeLa细胞增殖及对FBW7表达的影响被引量：6: 2010年; 目的:观察UO-126对人类宫颈癌细胞株HeLa细胞增殖及对F-盒和含蛋白7的WD重复结构域FBW7表达的影响。方法:采用MTT法观察不同浓度的UO-126对HeLa细胞增殖的影响;免疫荧光法检测FBW7在HeLa细胞中的定位和表达;RT-PCR、Western blot检测FBW7 mRNA及蛋白在UO-126阻断丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein ki-nases,MAPK)信号通路前后的表达情况。结果:MTT结果显示各浓度UO-126具有抑制HeLa细胞增殖的作用,且具有剂量依赖性和时间依赖性(P<0.05)。免疫荧光检测显示UO-126处理HeLa细胞后FBW7阳性表达增强。RT-PCR及West-ern blot结果显示,UO-126作用后HeLa细胞FBW7 mRNA及蛋白表达水平较未处理HeLa细胞明显增高(P<0.05)。结论:MAPK信号通路阻断剂UO-126抑制HeLa细胞增殖,FBW7位于MAPK信号通路的下游。; 孙迪沈宜汪少华向自武谢莹珊姜歆; 关键词：MAPK

热应激小鼠肝癌细胞(H_(22))源Exosomes的抗肿瘤免疫机制被引量：1: 2009年; 目的制备小鼠肝癌细胞(H22)源Exosomes及热应激小鼠肝癌细胞(H22)源HS-Exo(heat stressedExosomes,HS-Exo),研究其对小鼠可能的抗肿瘤免疫机制。方法用超速分级离心和蔗糖密度梯度离心纯化获得Exosomes及HS-Exo,透射电镜观察其形态。以Exosomes为对照,观察HS-Exo的蛋白组分、产量及其激发宿主抗肝癌免疫应答效应,用Western blot方法检测两者所含有的相关蛋白情况。用MTT法检测免疫小鼠脾细胞增殖和脾淋巴细胞的细胞毒活性。用免疫组化法检测经两者免疫后小鼠肿瘤组织中CD4+、CD8+淋巴细胞浸润情况。结果HS-Exo与Exosomes形态相似,HS-Exo所含的重要免疫蛋白表达增加(P<0.05),用HS-Exo免疫小鼠后比用Exosomes免疫小鼠能更有效地抑制肿瘤生长,更好地诱导淋巴细胞增殖,更显著增强小鼠脾淋巴细胞的细胞毒活性以及更明显的肿瘤治疗作用(P<0.05)。结论热应激制备HS-Exo的方法具有可行性,HS-Exo比Exosomes具有更强的免疫活性和肿瘤治疗作用。; 孙迪杨麟沈宜汪少华向自武; 关键词：EXOSOMES 肿瘤免疫

三氧化二砷诱导小鼠肝癌细胞H_(22)外泌exosome及相关机制研究被引量：1: 2009年; 目的探讨三氧化二砷在小鼠肝癌细胞H22外泌exosome中的影响。方法MTT法筛选三氧化二砷的合适药物浓度;密度梯度离心和超速离心法提纯exosome,Bradford法对exosome总蛋白进行定量分析;Western blot检测影响小囊泡vesicle分泌的复合体SNARE的重要组成及调节蛋白Syntaxin的表达;结合钙荧光探针Fura-2、荧光倒置定量显微镜测定细胞内游离钙的相对浓度。结果维持小鼠肝癌细胞H2290%存活48h的药物浓度为1.25μmmol/L;药物作用前后,细胞数为5×104ml-1的H22细胞常规培养48h所得细胞悬液200ml,经密度梯度离心和超速离心所得exosome的总蛋白浓度分别为(0.85±0.13)、(0.96±0.10)mg/ml,差异具有统计学意义(P<0.05);三氧化二砷作用前后,H22细胞均有Syntaxin蛋白表达,三氧化二砷处理后,其表达明显增加(P<0.05)。结论SNARE复合体假说也适用于小鼠肝癌细胞H22的exosome外泌过程,三氧化二砷在exosome的外泌过程中有一定的促进作用。; 向自武沈宜汪少华范维珂陈黎; 关键词：三氧化二砷 EXOSOME 胞吐作用 SYNTAXIN

顺铂联合exosomes瘤苗抗肿瘤作用的实验研究: 目的：顺铂是目前国内外应用最为广泛的抗癌药物之一，大剂量顺铂化疗对癌细胞杀伤快而强，但对机体造成的副作用大。肿瘤疫苗作为机体内在的一种新的治疗手段，主要依赖于激活机体自身的力量去杀伤瘤细胞，这种杀伤力是有限的，并且缓慢。...; 汪少华; 关键词：顺铂 EXOSOMES 肿瘤疫苗抗肿瘤作用; 文献传递

Ras信号通路阻断剂FTI-277抑制HeLa细胞增殖及对cyclin E表达的影响被引量：3: 2010年; 目的:观察Ras信号通路阻断剂(FTI-277)在人类宫颈癌细胞株HeLa细胞中对细胞周期素E(cyclin E)表达及对HeLa增殖、凋亡的影响情况。方法:采用MTT法观察不同浓度的FTI-277对HeLa细胞的生长抑制作用;流式细胞术(FCM)观察Hela细胞的细胞周期变化;RT-PCR、Western blot法检测FTI-277阻断Ras信号通路前后HeLa细胞cyclin E mRNA及蛋白表达。结果:各浓度范围FTI-277均能抑制HeLa细胞的增殖,且具有剂量依赖性和时间依赖性。流式细胞术分析显示,FTI-277作用后的HeLa细胞明显滞留于G1/S期,且具有时间依赖性。RT-PCR及Western blot结果显示,FTI-277作用前后HeLa细胞cyclin E mRNA表达无明显变化,而蛋白表达水平明显降低。结论:FTI-277可以抑制细胞增殖,Ras信号转导通路可能是通过影响HeLa细胞cyclin E转录后的翻译环节减少其表达。; 孙迪沈宜汪少华向自武谢莹珊姜歆; 关键词：CYCLINE RAS

H_(22)源exosomes瘤苗在小鼠体内的抗肿瘤及免疫调节作用被引量：4: 2009年; 目的:探讨exosomes瘤苗对小鼠免疫功能及肝癌移植瘤生长的影响。方法:从培养的小鼠肝癌H22细胞上清中分离exosomes瘤苗,以H22细胞接种BALB/c小鼠建立动物模型,随机分为exosomes瘤苗接种组及PBS对照组。15d后处死小鼠,测量移植瘤体重量,计算抑瘤率;分别称取脾重、胸腺重,检测荷瘤小鼠脾脏指数和胸腺指数;用MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖情况和细胞毒活性;酶连免疫吸附试验(Enzyme-linked immunoabsorbent assay,ELISA)检测脾淋巴细胞产生IL-2、INF-γ的能力。结果:接种exosomes瘤苗能显著抑制肿瘤生长,抑瘤率达42.26%;与对照组比较,实验组荷瘤鼠胸腺指数、脾指数显著提高(P<0.05);exosomes促进脾淋巴细胞增殖并增强其细胞毒活性,同时脾淋巴细胞培养上清中IL-2、INF-γ的水平升高。结论:exosomes瘤苗可能通过增强小鼠的免疫功能抑制小鼠肝癌移植瘤生长。; 汪少华沈宜李静向自武范维珂孙迪; 关键词：EXOSOMES 抗肿瘤免疫肿瘤疫苗

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汪少华

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