焦建伟
- 作品数：13 被引量：59H指数：4
- 供职机构：北京大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家重点实验室开放基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 抗栓肽(Decorsin)在大肠杆菌中的克隆及表达被引量：6
- 2001年
- 将人工合成的寡核苷酸片段进行体外连接 ,得到编码抗栓肽 (decorsin)的cDNA .将此cDNA克隆到表达载体pMAL p2x中 ,经核苷酸序列测定结果正确 .在大肠杆菌TB1中通过IPTG进行诱导表达 ,融合蛋白的表达量为 8%左右 .融合蛋白通过亲和柱一步纯化 ,SDS PAGE显示为一条主要蛋白质电泳条带 .血小板聚集实验表明 ,融合蛋白具有较强的抑制血小板聚集的功能 ,抑制常数IC50为 3 70nmol L .
- 焦建伟张磊亮俞梅敏茹炳根
- 关键词：血小板聚集CDNA基因克隆
- 溶栓与抗栓双功能尿激酶原突变体的模拟、构建与表达被引量：4
- 2004年
- 将抗栓肽 ( Decorsin)嫁接到低分子量尿激酶原 ( scu PA-3 2 k)上 ,可以期望获得既具有抗血小板聚集活性 ,又具有溶栓活性的新型基因工程蛋白质分子 .利用计算机辅助分子设计手段模拟了该融合蛋白的分子结构 ,证明其活性区可以正常发挥功能 .根据大肠杆菌偏好密码子合成 Decorsin的基因 ,与 scu PA-3 2 k基因融合在一起 ,构建新的嵌合体基因 dscu PA,并在大肠杆菌中通过 IPTG进行诱导表达 ,该重组蛋白在大肠杆菌中以包涵体的形式存在 .对包涵体进行变性和复性并通过层析纯化得到目的蛋白质 .用纤维蛋白平板法测得重组蛋白的比活为 92 0 0 0 IU/mg.激活纤溶酶原的酶促动力学性质与天然低分子量尿激酶相似 ,且有较强的抑制血小板聚集的功能 .重组蛋白 dscu PA不但具有较强的溶栓功能 ,而且具有抗栓功能 .
- 张磊亮焦建伟邵开峰俞梅敏茹炳根
- 关键词：血小板聚集
- 纤维蛋白肽与低分子量尿激酶原融合蛋白的构建及性质被引量：3
- 2001年
- 将人工合成的寡核苷酸片段进行定向连接后 ,得到编码纤维蛋白 β链N端 (β 15～ 42 )多肽的基因片段及连接区片段 (linker) ,再与低分子量尿激酶原 (scuPA 32k)cDNA分子进一步连接后 ,得到了Fβ (15～ 42 ) /scuPA 32k的融合基因 .在大肠杆菌中经过IPTG诱导表达 ,经过变性及复性 ,Zn2 + 螯合层析及SephacrylS2 0 0凝胶层析后 ,目的蛋白被纯化 .SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)显示为一条蛋白质纯化条带 ,分子质量为35ku .经纤维蛋白平板法测定比活为 870 0 0U/mg.经纤溶酶活化后的融合蛋白与低分子量尿激酶相比 ,对显色底物S2 44 4酶促动力学性质相似 .同时Fβ (15～ 42 ) /scuPA
- 焦建伟刘宁俞梅敏茹炳根
- 关键词：纤维蛋白肽融合蛋白
- 一种同时兼有溶栓—抗栓功能分子的研究
- 近年来随着心脑血管发病率的提高,这使得有关血栓病药物的研究成为热门.纤溶酶原激活剂(PA)如组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)或尿酶型纤溶酶原激活剂(μ-AP)等已广泛用于急性心肌梗塞的临床治疗或观察,但目前所有使用的溶栓...
- 俞梅敏焦建伟茹炳根
- 文献传递
- 镉诱导牡蛎金属硫蛋白的初步研究被引量：9
- 2002年
- 以CdCl_2作为诱导剂,用不同浓度的CdCl_2对牡蛎进行诱导培养。对MT提取液进行紫外吸收和原子吸收测定,结果表明牡蛎金属硫蛋白的合成随着CdCl_2浓度的升高而增大,至0.005mmol·L^(-1)达到最大值,每克湿组织能获得10μgMT,诱导效果显著。
- 任育红吴江涛杨加华焦建伟茹炳根
- 关键词：金属硫蛋白牡蛎氯化镉紫外吸收原子吸收
- RGD-尿激酶原嵌合分子的构建及表达
- 心血管疾病是一种当代社会的常见病、多发病,常用的治疗方法是溶栓疗法,在血栓疾病的药物治疗中,纤溶酶原激活剂(UK,tPA等)是目前应用较为广泛的溶栓药物,但此类药物都具有不同程度的缺陷即血栓再栓塞和颅内出血等,构建新的安...
- 焦建伟茹炳根
- 文献传递
- GHRP-scu-PA-32K突变体的构建、表达及纯化产物的部分性质研究被引量：1
- 2000年
- 在ｓｃｕＰＡ３２Ｋ 的ｃＤＮＡ分子基础上经定点突变，在Ｎ 端紧接Ｌｅｕ１ 之前引入编码ＧＨＲＰ四肽的寡核苷酸序列（ＧＧＴＣＡＴＡＧＧＣＣＴ） ，构建了ＧＨＲＰｓｃｕＰＡ３２Ｋ 的突变体ｃＤＮＡ。将它克隆到表达载体ｐＣＭβｎｅｏ 中，与ｐＣＭβｄｈｆｒ 共转染ＣＨＯ／ＤＨＦＲ－ 细胞。筛选到的稳定表达株在无血清培养基的表达量为５８０ＩＵ／（１０６ 细胞·２４ ｈ） 。经锌离子螯合亲和柱纯化的产物，ＳＤＳＰＡＧＥ显示为单一蛋白条带，分子量为３３ ｋＤ，质谱法测定分子量也为３３ ｋＤ。经血纤维蛋白平板法测定比活为１５０ ０００ ＩＵ／ｍｇ 蛋白。对血纤维蛋白的亲和性，突变体为ｓｃｕＰＡ３２Ｋ 的４－５ 倍。
- 焦建伟徐长法
- 关键词：定点突变溶栓药物突变体
- GHRP-scu-PA-32K重组体的构建、表达、纯化及性质研究
- 单链尿激酶型纤溶酶原激活剂(scu-PA)也称尿激酶原(pro-UK),是比较理想的溶栓剂之一.研究表明血纤蛋白原Bβ链15-18位的Gln-His-Arg-Pro(GHRP)是影响血纤蛋白单体聚 合成多聚体的位点之一,...
- 焦建伟
- 关键词：CHO细胞定点突变蛋白质工程
- 文献传递
- RGD多肽与尿激酶原嵌合分子的构建及性质研究被引量：1
- 2001年
- 利用定点突变及DNA重组技术 ,将编码RGD多肽 (GPRGDWRMLG)的双链DNA片段 ,定向插入到相对于编码尿激酶原的Gly118 Leu119的cDNA分子中 ,构建了尿激酶原的嵌合体基因 ,并在甲醇酵母表达系统中进行了分泌表达。经过Zn2 + 螯合柱及SP阳离子柱两步层析后 ,目的蛋白质被纯化。经纤维蛋白平板测活 ,嵌合分子的比活为 6 5 0 0 0IU mg。嵌合分子与尿激酶相比 ,对显色底物S2 44 4作用的催化效率偏低 ,但具有较强的抑制血小板聚集的功能 ,抑制常数IC5 0为 2 1μmol L。以上结果表明嵌合分子不但具有较强的溶栓功能 ,而且具有抗栓功能 ,很可能是一种具有发展前景的双功能溶栓
- 焦建伟茹强俞梅敏茹炳根
- 关键词：尿激酶原RGD多肽溶栓抗血小板聚集嵌合分子
- 真核低分子量尿激酶原突变体基因在大肠杆菌中的高效表达被引量：4
- 2001年
- 通过一种融合抗栓肽的低分子量尿激酶原的突变体 (DscuPA 32K)在大肠杆菌中表达的研究 ,进行了一系列不同条件下的实验 .DscuPA 32K在菌株BL2 1中的表达很低 ,表达量仅为 3% ;为提高其表达量 ,引进一种整合稀有tRNA基因的菌株BL2 1 CodonPlusTM RIL ,增加大肠杆菌中识别稀有密码子的tRNA的数量 ,DscuPA 32K的表达水平确实有了很大提高 ,最大表达量约占 2 0 % .结果表明 ,富含稀有密码子的DscuPA 32K在大肠杆菌中表达受限制的因素 ,完全可以由增加稀有tRNA的数量来克服 .免疫印迹分析DscuPA 32K具有良好的抗原性 .此表达菌株可能有利于含大肠杆菌稀有密码子的真核基因在大肠杆菌中的表达 .
- 焦建伟俞梅敏茹炳根
- 关键词：突变体稀有密码子大肠杆菌
