俞梅敏
- 作品数：35 被引量：272H指数：9
- 供职机构：北京大学生命科学学院蛋白质工程及植物基因工程国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划“九五”国家科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 苜蓿高含硫氨基酸蛋白转基因植株再生被引量：86
- 2000年
- 通过农杆菌介导法将高含硫氨基酸蛋白基因转入苜蓿，成功地诱导转基因植株再生。转化植株生长和发育良好。苜蓿子叶外植体是较理想的转化受体。冷凉湿润的环境条件是苜蓿移栽成活率高所必需的。
- 吕德扬范云六俞梅敏唐顺学侯宁汪清
- 关键词：苜蓿基因转化植株再生子叶外植体
- 一种同时兼有溶栓—抗栓功能分子的研究
- 近年来随着心脑血管发病率的提高,这使得有关血栓病药物的研究成为热门.纤溶酶原激活剂(PA)如组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)或尿酶型纤溶酶原激活剂(μ-AP)等已广泛用于急性心肌梗塞的临床治疗或观察,但目前所有使用的溶栓...
- 俞梅敏焦建伟茹炳根
- 文献传递
- 人小肠三叶因子(hITF)在蓝细菌Anabaena strain sp. PCC 7120中的表达
- 罗娜宁叶周先宛俞梅敏茹炳根施定基
- 关键词：蓝细菌胃溃疡病
- 一个玉米21kD富硫蛋白的cDNA分离和特性分析
- 邹竹荣俞梅敏
- 关键词：单抗
- 小鼠金属硫蛋白-I在鱼腥藻7120中的融合表达及其纯化(英文)被引量：5
- 2003年
- 为了提高小鼠金属硫蛋白-I(mMT-I)在鱼腥藻7120(Anabaena sp.PCC 7120)中的表达量、便于表达产物的分离纯化,构建了新的穿梭融合表达载体pKG-MT。通过pKG-MT,mMT-I cDNA在tac启动子的调控下,以与谷胱甘肽转硫酶(GST)C-末端相融合(GST-MT)的形式在鱼藻中表达。SDS-PAGE结果显示在异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导下GST-MT在鱼腥藻中表达。经谷胱甘肽亲合层析,从转基因藻中分离、纯化得到GST-MT,利用GSTC-末端的凝血酶酶切位点,用凝血酶对GST-MT进行柱上酶切,经Sephadex G50除去凝血酶得到mMT-I。SDS-PAGE表明纯化得到所要的目标产物;ELISA测定结果显示从每克转基因藻(鲜重)中可纯化得到0.9 mg mMT-I;原子吸收测定表明纯化得到的mMT-I的镉离子结合能力接近于天然MT。
- 周杰郝福英施定基俞梅敏茹炳根
- 关键词：小鼠鱼腥藻7120纯化
- 用同源重组法将人肝金属硫蛋白突变体ββ基因整合在集胞藻6803中表达被引量：18
- 2001年
- 将集胞藻 (Synechocystissp .)PCC 6 80 3上psbB的一段序列 (从 # 6 93bp到 # 2 5 6 3bp)插入pBluescriptKS的多克隆位点 ,构建带有整合平台的载体pKSB。再将人工合成的 ββ基因插入中间载体pRL_439上启动子PpsbA的下游 ,并将pRL_ββ上PpsbA和 ββ基因插入pKSB构建成整合表达载体pKSB_ββ。利用自然转化将整合表达载体导入集胞藻 6 80 3,并通过单交换同源重组使 ββ基因整合到集胞藻 6 80 3基因组DNA上。逐步提高氨苄青霉素浓度 ,筛选得到遗传性状稳定的转基因集胞藻 6 80 3。PCR检测转基因集胞藻 6 80 3,结果证实 ββ基因已整合到集胞藻 6 80 3的染色体上 ;Westernblotting结果表明 ,ββ基因在转基因集胞藻 6 80 3细胞中得到表达 ,ELISA测定表明在 5 0 μmol/L的Zn2 +诱导下 ββ在新鲜集胞藻 6 80 3中的蛋白表达量为 0 .739mg/g ;重金属耐受性实验表明 ,得到能耐受Cu2 +的转基因集胞藻 6 80 3。经原子吸收光谱法测定 ,转基因集胞藻 6 80 3在含低浓度Cu2 +(10 μmol/L)的培养液中对Cu2 +的去除率可达到 82 %
- 宋凌云施定基宁叶罗娜邵宁俞梅敏茹炳根
- 关键词：集胞藻6803同源重组蓝藻基因工程
- 抗栓肽和尿激酶原(B链)嵌合体的构建与表达
- 2004年
- 通过基因工程重组技术 ,将抗栓肽 (decorsin)基因与尿激酶的B链即scu PA(B)基因用柔性Linker((Gly4Ser) 3 )融合在一起 ,构建新的嵌合体基因dscuPA(B) ,在大肠杆菌Rosetta(DE3)plysS中通过IPTG诱导表达 ,并考察了重组质粒在Rosetta(DE3)plysS在传代中的分离稳定性。该融合蛋白在大肠杆菌中是以包涵体的形式存在 ,对包涵体进行变性及复性后 ,并通过Zn2 + 螯合柱和SP阳离子交换柱进行纯化。质谱分析表明分子量为 33 735kD ,与理论值相符。目的蛋白质的纯度可达90 %。纤维蛋白平板法测得嵌合分子的比活为 90 0 0 0IU mg ,与scuPA 32k的比活相近。体外血小板聚集实验表明融合蛋白有较强的抑制血小板聚集的功能 ,抑制常数IC5 0为 0 31 μmol L。以上这些结果表明 ,该融合蛋白不但具有较强的溶栓功能 ,而且具有抗栓功能 。
- 张磊亮管胜昔姜靓靓俞梅敏茹炳根
- 关键词：尿激酶原质粒稳定性血小板聚集
- 一种新的纤溶酶原激活反应动力学研究方法被引量：5
- 2001年
- 在溶栓研究中 ,纤溶酶原激活剂 (plasminogen activator,PA)激活纤溶酶原 (plasminogen,Plg)反应的动力学常数的测定占有重要地位 .在前人的研究中 ,虽然进行了这项实验 ,但是并未给出一个方便、快捷的测定方法 .所以建立一种更准确 ,更适合一般的实验室条件的 PA分子激活 Plg反应动力学常数的测定方法是必要的 .在对该反应进行数学分析的基础上 ,得到由可测量表示的纤溶酶 (plasmin,Plm)生成速度 (v(Plm) )的计算公式 ,由 v(Plm)及相应已知量可进一步推导出 Km、kcat的表达式 ,最终测得相应动力学常数 .用这种方法测定的由甲醇酵母 (pichia pastoris)表达的人单链尿激酶型纤溶酶原激活剂 (human single chain urokinase- PA,scu- PA)激活 Plg的反应的 Km=0 .648μmol·L-1,kcat=0 .0 62 6s-1,与文献报导相符 (Km=0 .4～ 1 .1 μmol· L-1,kcat=0 .0 2～ 0 .0 93) s-1,说明此方法是可靠的 .又因该法只需相应底物及酶标仪且为连续测定 ,所以十分简便 .
- 党昕纪建国茹强杨晶鑫俞梅敏茹炳根
- 关键词：纤溶酶原动力学常数纯化
- 基因重组小肠三叶因子预防和治疗大鼠胃溃疡的研究被引量：4
- 2000年
- 实验制备重组人小肠三叶因子 (rhITF) ,用乙醇诱发大鼠胃溃疡模型研究该蛋白在体内的预防和治疗效果。先用 90 %的乙醇 1ml诱发溃疡 ,然后分不同的时间和不同的剂量尾静脉注射rhITF ,以牛血清白蛋白作对照。结果发现在胃溃疡发生 1h前注射 0 2～ 1mg的rhITF有明显的预防保护作用 ;而溃疡发生后 0 5～5h ,静脉注射 0 2～
- 苏云鹏李令媛俞梅敏茹炳根
- 关键词：胃溃疡基因重组
- 外源报告基因EGFP在盐藻中实现瞬时表达被引量：33
- 2003年
- 探索杜氏盐藻 (Dunaliellasalina)的转基因方法和筛选方法 .利用烟草花叶病毒启动子 (CaMV35S)、衣藻叶绿体atpA启动子与来源于水母的加强型绿色荧光蛋白报告基因 (EGFP)构建表达载体pART7GFP和pUCGFP ,转化盐藻 .EGFP在CaMV 35S启动下表达出绿色荧光蛋白 ,在荧光显微镜下看到发绿色荧光的转基因盐藻 .根据荧光数目进行统计 ,转化效率高于 5 % .衣藻来源的启动子atpA在盐藻中未能启动EGFP的表达 .用直径 1μm的金粉颗粒和 0 6 μm的金粉进行基因枪法转化 ,1μm的金粉颗粒成功将外源基因导入盐藻 ,用 0 6 μm的金粉配合多种技术参数也没有将外源基因导入盐藻 .EGFP可以用作盐藻遗传转化的报告基因使单细胞真核生物盐藻可以利用流式细胞术 (FACS)等技术进行筛选 ,从而避开平板筛选转基因盐藻的限制 。
- 李杰任宏伟黄洁虹俞梅敏茹炳根
- 关键词：盐藻
