王全忠
- 作品数：5 被引量：8H指数：1
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- 人LIF基因在巴斯德毕赤酵母细胞中的表达
- 王全忠
- 关键词：基因表达毕赤酵母表达系统
- 文献传递
- GST融合蛋白在杆状病毒系统中表达的可溶性研究被引量：6
- 2000年
- 将构建好的可表达GST融合蛋白的重组病毒AcMNPV OCC- GST 6xHis Etp2 8感染Sf9细胞 ,一定时间后取感染了病毒的细胞裂解物上清液进行SDS PAGE分析 ,结果显示 5 3kDa的融合蛋白 (GST 6xHis Etp2 8)呈不溶状态。在原有裂解液的基础上 ,加固体十二烷基肌氨酸钠至终浓度 1.5 % ,并将TritonX 10 0的比例由 1%提高到 2 %。SDS PAGE结果显示至少有 1/ 3的GST 6xHis Etp2 8处于溶解状态 ,可溶性GST 6xHis Etp2 8经亲合层析 ,5
- 杨林李国清黄葆英王全忠龙綮新王珣章
- 关键词：GST融合蛋白杆状病毒表达系统
- 人白血病仰制因子基因在酵母中的融合表达被引量：1
- 2001年
- 用ＰＣＲ突变的方法使人白血病抑制因子基因的终止密码子缺失，并与质粒ｐＰＩＣＺαＡ上的ｍｙｃ表位及６个组氨酸处于同一读码框，构建融合表达载体ｐＰＩＣＺαＡ－ｈＬＩＦＭ．通过氯化理化学转化法使表达载体整合到毕赤巴斯德酵母Ｘ－３３的基因组ＤＮＡ中。转化子经甘油增菌和甲醇诱导，实现了ｈＬＩＦ基因在毕赤酵母表达载体系统中的表达．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测和 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析结果表明在相对分子质量为６１ ０００处有一条人白血病抑制因子特异蛋白带．凝胶薄层扫描分析结果显示表达的目的蛋白占培养液上清总蛋白的 ３３．３％．且该表达产物具有抑制小鼠畸胎瘤细胞Ｆ９克隆形成的活性．
- 王全忠杨林欧阳菁龙綮新王珣章
- 关键词：毕赤酵母生物活性测定
- 人白血病抑制因子(LIF)基因的人工合成被引量：1
- 1999年
- 根据人白血病抑制因子基因的ｃ Ｄ Ｎ Ａ 序列， 通过合理的引物设计、链延伸反应、 Ｐ Ｃ Ｒ 反应以及分子克隆等步骤， 成功地合成出编码成熟 Ｌ Ｉ Ｆ 蛋白的基因片段， 并将其克隆至ｐ Ｕ Ｃ１８ 载体质粒上． 序列分析和酶切鉴定显示 Ｌ Ｉ Ｆ 基因得到了正确合成和克隆， 同时还就基因人工合成的优越性和特殊序列的甲基化问题进行了探讨．
- 杨林王全忠吴无畏龙綮新王珣章
- 关键词：基因
- 人白血病抑制因子基因在巴斯德毕赤酵母中的表达
- 2001年
- 将 575bp的人白血病抑制因子基因克隆到表达载体pPICZαA上 ,构建成重组质粒pPICZαA hLIF。pPICZαA hLIF经SacI酶切使之线性化后转化到巴斯德毕赤酵母细胞X 33中。转化子经Mut表型筛选和PCR分析鉴定后 ,利用甘油增菌和甲醇诱导 ,实现了hLIF基因在毕赤酵母系统中的表达。SDS PAGE检测和Westernblot分析结果表明表达产物的分子量约为58 5kD ,与天然hLIF大小相近 ,并且具有免疫原性。凝胶薄层扫描分析显示 ,重组hLIF约占上清总蛋白的 32 8%。生物活性测定结果表明 。
- 王全忠杨林欧阳菁龙綮新王珣章
- 关键词：巴斯德毕赤酵母基因表达生物活性测定
