翁益云
- 作品数：27 被引量：37H指数：4
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- 骨髓间充质干细胞治疗实验性自身免疫性重症肌无力的作用机制探讨被引量：1
- 2016年
- 目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)治疗实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)的作用机制。方法将Lewis大鼠随机分为移植组、模型组和正常对照组,每组各10只。移植组、模型组大鼠腹腔注射单克隆抗体35(m Ab35)建立EAMG模型,正常对照组大鼠腹腔注射等量0.9%氯化钠溶液。分离培养BMSCs并作鉴定后,调整密度至1.5x106/600μl PBS,移植组尾静脉注射细胞悬液600μl,模型组和正常对照组均予600μl PBS。采用双盲法、免疫荧光检测、ELISA和real-time RT-PCR分别测定3组大鼠Lennon临床评分、腓肠肌乙酰胆碱受体(AChR)数量变化、血清乙酰胆碱受体抗体(AChR-Ab)含量和腓肠肌AChR、基质金属蛋白酶9(MMP-9)m RNA表达。结果移植组Lennon临床评分、血清AChR-Ab含量、腓肠肌AChR m RNA表达均低于模型组(P<0.05)。正常对照组大鼠神经肌肉接头处可见明显红色荧光,移植组可见断断续续、较为微弱的荧光,模型组未见红色荧光。模型组大鼠腓肠肌MMP-9 mRNA表达量明显高于移植组(P<0.05)。结论 BMSCs能缓解EAMG大鼠的临床症状,抑制MMP-9 mRNA表达可能是其作用机制。
- 翁益云滕银燕杨德壕李佳张旭
- 关键词：实验性自身免疫性重症肌无力骨髓间充质干细胞基质金属蛋白酶9
- 重组人髓鞘少突胶质细胞糖蛋白的表达、纯化及免疫原性被引量：3
- 2011年
- 目的:建立人少突胶质细胞糖蛋白细胞外Ig样结构域(MOGIgd)的硫氧还蛋白(TrxA)融合表达系统,探讨表达产物MOGIgd-TrxA融合蛋白的免疫原性。方法:(1)应用RT-PCR方法,以人脑组织的总RNA为模板扩增出编码MOGIgd的cDNA序列,将MOGIgd cDNA克隆到TrxA融合表达载体pET32a(+)中,重组质粒pET32a-MOGIgd经表型筛选、酶切鉴定及测序鉴定后,转化至BL21(DEB)trxB-宿主菌中经异丙硫代钠-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,并通过金属鳌合亲和层析柱进行纯化。(2)C57BL/6小鼠分为MOGIgd-TrxA组(MOG组)、硫氧还蛋白组(TrxA组)及正常对照组(NC组),12只/组,各组以相应抗原乳剂免疫小鼠制作实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型后观察其临床神经功能和组织病理学改变(HE染色和髓鞘Luxol fast blue染色)评价模型质量。结果:(1)成功获取高产量32 kD MOGIgd-TrxA融合蛋白,以包涵体形式表达,纯化后纯度达95%左右。(2)MOG组小鼠75%(9/12)发病,于免疫后第(12.14±2.04)d发病,呈慢性非缓解型病程;发病动物组织切片HE染色和髓鞘染色显示不同程度炎性细胞浸润和髓鞘脱失。结论:成功建立人MOGIgd的TrxA融合表达系统,表达产物MOGIgd-TrxA融合蛋白可作为免疫原诱导EAE动物模型。
- 夏君慧翁益云李佳张旭
- 关键词：多发性硬化
- 重症肌无力患者外周血CD4+CD25+Treg细胞数量及功能研究
- 目的:重症肌无力(MG)是影响神经-肌肉接头处的自身免疫性疾病,以疲劳性骨骼肌乏力为特征,免疫攻击的靶是突触后膜的乙酰胆碱受体。CD4CD25调节性T(CD4CD25T reg)细胞与多种自身免疫性疾病发生发展有关。Fo...
- 张旭夏君慧翁益云
- 文献传递
- C57BL／6小鼠EAE模型的建立及Foxp3、CD4＋CD25＋调节性T细胞检测
- 2010年
- 目的以髓鞘少突胶质细胞糖蛋白细胞外免疫球蛋白样结构域（MOG驯）为抗原免疫C57BL／6小鼠，建立实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）模型，并检测CIM＋CD25＋T细胞、Foxp3mRNA等指标的表达。方法采用分子克隆技术诱导表达MOGlgd-TrxA融合蛋白，纯化后以此融合蛋白为抗原于侧腹壁皮下多点注射免疫C57BL／6小鼠作为实验组（MOG组）；同时以硫氧还蛋白（TrxA）、豚鼠脊髓匀浆（GPSCH）、生理盐水免疫小鼠分别作为阴性、阳性及正常对照组。双盲法连续早晚观察30d，通过评估动物的临床神经功能、组织病理（HE染色和Kltiver．Barrera法髓鞘染色、免疫组化法）情况，评价模型的质量。流式细胞仪（FACS）检测小鼠脾脏中CD4＋CD25＋调节性T细胞；real—timePCR检测Foxp3mRNA的相对表达水平，并分析两者相关性。结果MOG组及GPSCH组小鼠均呈慢性非缓解型病程，两组在发病时问、达峰时间、临床神经功能评分等方面差异均无统计学意义（P〉0．05）。TrxA组及正常对照组无一动物发病。模型组（包括MOG组和GPSCH组）动物HE染色可见血管周围炎性细胞浸润，胶质结节形成，髓鞘染色可见斑片状髓鞘脱失，大脑、小脑、脑干和脊髓均有不同程度受累。免疫组化定性和半定量分析显示MOG组和GPSCH组病灶周围炎症浸润处AQP-4表达与TrxA组相比明显增高（P〈0．05）；MOG组CIM＋CD25＋T细胞占CIM＋T细胞比例为（4．71±1．61）％，GPSCH组为（1．44±0．65）％，均明显低于TrxA组和正常对照组（P〈0．01），且MOG组和GPSCH组之间的差异亦具有统计学意义（P〈0．01）。MOG组标准化Foxp3mRNA的表达量为2．26±1．97，GPSCH组为1．44±1．20，均低于TrxA组的8．58±3．34（P〈0．01）；但MOG组和GPSCH组间的差异无统计学意义（P〉0．05）。相关性分析显示，模型组小鼠CIM＋CD25＋调节性T细胞与roxp3mRNA表达水平
- 翁益云夏君慧鲍剑虹张国勇张旭
- 关键词：髓鞘少突胶质细胞糖蛋白水通道蛋白-4FOXP3CD4+CD25+调节性T细胞
- MMP-9在骨髓间充质干细胞治疗实验性自身免疫性重症肌无力中的作用机制探讨
- 目的:探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)的治疗作用及MMP-9(matrix metalloproteinase 9)在其机制中的可能作用。方法:Lewis大鼠30只分为移植组(n...
- 翁益云滕银燕杨德壕李佳张旭
- MMP-9在骨髓间充质干细胞治疗实验性自身免疫性重症肌无力中的作用机制探讨
- <正>目的:探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)的治疗作用及MMP-9(matrix metalloproteinase 9)在其机制中的可能作用。方法:Lewis大鼠30只分为移植...
- 翁益云滕银燕杨德壕李佳张旭
- 文献传递
- 实验性变态反应性脑脊髓炎AQP-4、CD4^+CD25^+调节性T细胞研究
- 2010年
- 目的:以髓鞘少突胶质细胞糖蛋白细胞外免疫球蛋白样结构域(MOGIgd)为抗原免疫C57BL/6小鼠,建立EAE模型,并检测AQP-4、CD4+CD25+T细胞的表达水平。方法:①采用分子克隆技术诱导表达MOGIgd-TrxA融合蛋白,纯化后以此融合蛋白为抗原于侧腹壁皮下多点注射免疫C57BL/6小鼠作为实验组(MOG组);同时以硫氧还蛋白(TrxA)、豚鼠脊髓匀浆(GPSCH)免疫小鼠分别作为阴性、阳性组。评估动物的临床神经功能、组织病理情况,评价模型的质量。②免疫组化法、荧光定量PCR技术测定AQP-4表达水平;经流式细胞仪(FACS)检测小鼠脾脏中CD4+CD25+调节性T细胞。结果:①MOG组及GP-SCH组小鼠均呈慢性非缓解型病程,两组在发病时间、达峰时间、临床神经功能评分等方面差异无统计学意义(P>0.05)。TrxA组无一动物发病。模型组(包括MOG组和GPSCH组)动物HE染色可见血管周围炎性细胞浸润,胶质结节形成,髓鞘染色可见斑片状髓鞘脱失,大脑、小脑、脑干和脊髓均有不同程度受累。免疫组化定性和半定量分析显示MOG组和GPSCH组病灶周围炎症浸润处AQP-4表达与TrxA组相比明显增高(P<0.05);②MOG组CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞比例为(4.71±1.61)%,GPSCH组为(1.44±0.65)%,均明显低于TrxA组(P<0.01),且MOG组和GPSCH组之间的差异亦具有统计学意义(P<0.01)。结论:用MOGIgd免疫C57BL/6小鼠诱导EAE模型稳定,发病率高,为今后进一步研究MS的免疫发病机制和采取有效治疗措施打下基础。EAE模型动物AQP-4的表达量与炎症浸润的严重程度相关。
- 翁益云夏君慧叶好好张国勇张旭
- 关键词：实验性变态反应性脑脊髓炎MOGAQP-4CD4+CD25+调节性T细胞
- 重症肌无力患者血清MuSK抗体水平检测及其临床意义
- 目的探讨肌肉特异性酪氨酸激酶抗体(muscle specific tyrosine kinase antibody,MuSKAb)与血清抗体阴性重症肌无力(seronegative myasthenia gravis,S...
- 叶好好王玲翁益云李佳厉向夏君慧张旭
- 文献传递
- 实验性变态反应性脑脊髓炎AQP-4、CD4+CD25+调节性T细胞研究
- 目的 以髓鞘少突胶质细胞糖蛋白细胞外免疫球蛋白样结构域(MOGIgd)为抗原免疫C57BL/6小鼠,建立EAE模型,并检测AQP-4、CD4+CD25+T细胞的表达水平；方法 ①采用分子克隆技术诱导表达MOGIgd-Tr...
- 翁益云张国勇夏君慧叶好好张旭
- TE671对实验性重症肌无力鼠治疗作用的研究
- 目的探讨乙酰胆碱受体对对实验性重症肌无力（EAMG）耐受的临床表现及免疫指标的变化,并探讨粘附分子及趋化因子在EAMG免疫致病耐受机制中的作用。方法将经纯化的电鳐乙酰胆碱受体（AChR）免疫的Lewis大鼠建立EAMG模...
- 杨德豪翁益云张旭
- 文献传递
