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短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)DX01转座突变株的构建及转化体系的优化被引量：5: 2011年; Tn5转座子及其衍生载体被广泛应用于革兰氏阴性菌的基因功能研究,但尚未见有利用Tn5转座子导入革兰氏阳性菌短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)DX01菌株的报道。本研究通过构建Tn5转座载体,对短小芽孢杆菌DX01菌株进行了Tn5转座插入诱变,获得了大量的突变株。同时,考察了感受态细胞培养浓度、电击电压、电击缓冲液及复苏培养基的选择等对DX01电转化效果的影响,建立了实验条件下的最佳电转条件。从1 109个转化子中随机抽取20个继代培养15代后,进行了稳定性分析;对转化子的PCR及Southern blot分析证实Tn5已随机插入到DX01基因组中。; 胡晓璐沈新迁傅科鹤顾振芳陈云鹏; 关键词：短小芽孢杆菌突变电击转化

短小芽胞杆菌DX01菌株Tn5转座突变株的抑菌活性筛选体系的建立被引量：5: 2012年; 为建立短小芽胞杆菌Bacillus pumilus DX01菌株的Tn5转座突变株抑菌活性的高效筛选体系,采用发酵液平板抑菌法研究了各突变株发酵液对稻瘟病菌Magnaporthe grisea生长的影响,并测定了目标突变株的几丁质酶和蛋白酶活性及发酵液对稻瘟病菌分生孢子萌发的抑制率。从2 633个突变株中筛选出6个抑菌活性较对照菌株DX01显著变化的突变株。对照DX01发酵液对真菌孢子萌发的抑制率为36%,而突变株Tn5-901和Tn5-194则分别为96%和3%,抑菌活性与对照的差异达到极显著水平。其余4个突变株的几丁质酶、蛋白酶活性多重比较结果与发酵液平板抑菌结果并不完全一致,但发酵液平板抑菌法简单、高效,适用于短小芽胞杆菌突变株的抑菌活性初筛。; 胡晓璐陈云鹏沈新迁刘通顾振芳; 关键词：抑菌活性

短小芽孢杆菌转座突变株的GFP标记及在水稻上的定殖被引量：8: 2012年; 【目的】研究GFP标记的短小芽孢杆菌在水稻植株上的定殖规律,为其生物防治应用提供科学依据。【方法】从短小芽孢杆菌GFP标记的转座突变株库中筛选强表达GFP且遗传稳定的突变株,用作水稻植株的定殖示踪。【结果】采用荧光酶标仪、流式细胞术检测及荧光显微镜观察等手段,对1 467株Tn5-egfp随机插入突变株的GFP表达作了定量和定性分析,最终获得8株荧光表达较强的突变株,并对突变株作了T-DNA插入拷贝数鉴定。在开放和封闭系统中,标记菌在水稻幼苗根际土壤中均可以存活15 d以上,且前者标记菌的数量下降相对更慢。【结论】短小芽孢杆菌在根毛区及侧根分生处的数量最多,并在根表面形成菌膜。该菌可通过水稻幼苗根部的伤口或幼嫩根毛等部位侵入根系,主要分布在皮层细胞及其间隙,在植物的维管束内亦可观察到荧光标记菌。研究结果表明该菌在水稻幼苗根际土壤中有着良好的定殖能力。; 沈新迁刘通胡晓璐顾振芳陈云鹏; 关键词：水稻短小芽孢杆菌绿色荧光蛋白定殖

里氏木霉高吸附铜突变体构建及其功能的初步研究: @@在玉米生产过程中拮抗木霉菌经常要遇到各种理化逆境因子，从而影响生物防治效果，其中重金属污染就是其中之一。因此研究木霉菌耐受和吸附重金属机理，对于今后创制耐受逆境或兼具修复土壤的生防菌剂，或研究木霉菌剂与含重金属的化学...; 傅科鹤范莉莉胡晓璐刘力行陈捷; 关键词：生物修复

GFP标记的短小芽胞杆菌(Bacillus pumilus)转座突变株的构建初探被引量：5: 2012年; 以水稻叶面附生菌短小芽孢杆菌(B.pumilus)为研究对象,通过构建pMOD-egfp-Tetr转座复合体,采用电击转化法对短小芽孢杆菌DX01菌株进行了Tn5转座插入诱变,获得了大量的转化子。对转化子进行了遗传稳定性分析和分子鉴定,并且在荧光显微镜下观察到了强烈的绿色荧光,研究结果表明外源DNA已经成功整合进细菌的基因组中,gfp基因在短小芽孢杆菌中实现了组成型表达。; 沈新迁胡晓璐刘通孙文良陈云鹏; 关键词：电击转化绿色荧光蛋白

根癌农杆菌介导的深绿木霉菌T23遗传转化研究被引量：8: 2009年; 采用根癌农杆菌介导的方法,成功地建立了丝状生防真菌深绿木霉(Trichoderma atroviride)菌株T23的遗传转化体系。并且,通过提高筛选培养基中潮霉素B的浓度和调整农杆菌的培养时间,对转化体系作了进一步的优化。转化效率约为50个突变体/107个分生孢子。所有转化子经继代培养5代,潮霉素B抗性筛选后,共得到118个遗传稳定的转化子。随机抽取部分转化子,进行PCR和Southern blot分子鉴定,结果证实外源的T-DNA已经随机整合到T23的基因组中。通过形态学观察,筛选出3个在产孢量和菌丝体生长速度方面显著不同于野生型菌株T23的转化子。农杆菌介导的遗传转化方法在深绿木霉菌株T23上的成功运用,将为研究该菌的功能基因组提供强有力的工具。; 孙文良胡晓璐吴萌章陈捷刘鹏陈云鹏; 关键词：根癌农杆菌深绿木霉转化子

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胡晓璐