闫文娟
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
- 供职机构：重庆医科大学检验医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 肺炎链球菌ClpE相互作用蛋白的筛选鉴定
- 目的
HSP100/ClpATPase是一类高度保守而且广泛存在的热休克蛋白(heat shockprotein, HSP)，属于AAA+(ATPase associated with diverse cellul...
- 闫文娟
- 关键词：肺炎链球菌热休克蛋白细胞分裂多克隆抗体免疫共沉淀
- 肺炎链球菌热休克蛋白ClpE多克隆抗体的制备及其亚细胞定位
- 2014年
- 目的制备肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)热休克蛋白(heat shock protein,HSP)ClpE多克隆抗体,并确定ClpE在S.pn表面的亚细胞定位。方法应用PCR法从S.pn D39中扩增clpE基因全长片段,克隆入原核表达载体pET28a,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,经亲和层析纯化重组蛋白。用纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,间接ELISA法测定抗体效价,Western blot法鉴定抗体的特异性。ELISA法分析ClpE在S.pn表面的亚细胞定位。结果重组表达质粒经PCR、双酶切和测序证实构建正确;表达的重组ClpE蛋白相对分子质量约83 000,表达量约占全菌总蛋白的60%,主要以可溶性上清形式存在;纯化的重组蛋白纯度达90%;制备的ClpE多克隆抗体效价达1∶4 096 000,可与S.pn D39全菌发生特异性反应,S.pn D39在正常生长时可表达ClpE蛋白;ClpE在S.pn表面有表达。结论成功制备了高效价和特异性的ClpE多克隆抗体,ClpE在S.pn表面可正常表达,为表面蛋白。
- 蔡莺莺闫文娟张群王虹胥文春何於娟尹一兵张雪梅
- 关键词：肺炎链球菌热休克蛋白亚细胞定位
- 肺炎链球菌假想转录因子LytR的表达、纯化、晶体生长及优化被引量：2
- 2013年
- 本研究通过大量表达、纯化肺炎链球菌(S.pn)假想转录因子LytR,以用于晶体生长、优化及三维结构解析。以S.pn D39血清型LytR基因为DNA模板、pET-32a(+)为表达质粒、E.coli BL 21(DE 3)为表达菌株,经成功克隆、表达及纯化后,获得大量、上清表达,且纯度>90%的LytR重组蛋白(含His标签);经悬滴气相扩散法行蛋白晶体培养、初筛及优化,获得体形较大、外观规则的棒状晶体,该晶体X射线衍射能力达4.0A。本研究为假想转录因子LytR三维结构的解析及其生物学研究奠定基础。
- 闵迅钟文赵沙沙董杰董珊珊周爱娥闫文娟汪德强
- 关键词：肺炎链球菌蛋白质纯化
- 热灭活疫苗HID39免疫小鼠可抵抗肺炎链球菌感染
- 2011年
- 目的研制一种安全、有效且易于生产的肺炎链球菌疫苗,探讨其在BALB/c小鼠中的有效性。方法通过热灭活肺炎链球菌标准菌株D39,得到无毒的、失去感染致病的能力的HID39,用HID39作为疫苗对随机分为阴性对照组(NC)、皮下免疫组(SC)和鼻内免疫组(IN)的小鼠进行免疫,ELISA法检测各组小鼠血清和唾液中的抗体及抗体亚型,并用不同菌株攻毒来评价HID39疫苗的效果。结果 HID39免疫小鼠后,SC组血清中IgG效价高达(12 800±8744),IN组的效价为(4032±1652),而SC组唾液中未检测到IgA,IN组却有(400±197)。抗体亚型以IgG1,IgG2a,IgG2b为主,未检测到IgG3。TIGR4在小鼠鼻内、肺和脑的定植显著下降,其中鼻内免疫的定植量最少。HID39鼻内免疫和皮下免疫都可显著提高致死剂量肺炎链球菌D39、血清型3和6B型感染小鼠的生存率,其中鼻内免疫的小鼠生存率均可达50%,抗血清的被动保护的生存率在50%以上。结论 HID39是一种较成功的肺炎链球菌疫苗,用它免疫小鼠可抵抗肺炎链球菌的感染。
- 姚润姜学美闫文娟王虹张雪梅
- 关键词：肺炎链球菌疫苗小鼠
