汪德强
- 作品数：47 被引量：35H指数：4
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金重庆市教育委员会科学技术研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学电子电信更多>>
- 绿脓杆菌RNase E活性调节蛋白A（RraA）的初步晶体学研究
- ＜正＞RNA降解体（RNA degradosome）是广泛存在于病原微生物体内,通过对mRNA降解而调控蛋白质表达的复合体,主要由RNA酶E（RNase E）、核苷酸磷酸化酶（PNPase）、RNA酶螺旋酶B（Rh1B）...
- 罗淼牛司强汪德强
- 文献传递
- 人NGAL克隆表达及抗体的制备与鉴定被引量：2
- 2019年
- 目的:高效表达人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)重组蛋白并制备其多克隆及单克隆抗体。方法:人工合成经密码子优化的 NGAL 基因,构建原核表达重组质粒 pW28-NGAL,IPTG 诱导表达后分离纯化并分析在溶液中的聚集状态;获得的 rhNGAL 抗原免疫兔子制备多克隆抗体,免疫小鼠筛选高效价的特异性单克隆抗体并鉴定抗体亚型;Protein G 亲合柱纯化,等温滴定量热法及非竞争 ELISA 法检测抗体的亲和力,SDS-PAGE 分析纯度;最后运用 Western blot、免疫荧光和免疫组化对抗体进行鉴定。结果:高效获得高纯度 NGAL 重组蛋白,主要以单体形式存在;成功制备兔多抗,同时筛选获得 6 株高效价单克隆抗体;其中,25 号单抗为 IgG1 亚型,余者均属 IgG2a 亚型,且 19、35 号单抗的亲和常数分别为 3.06×10^9、2.14×10^9。SDS-PAGE 分析表明纯度均大于 90%。进一步的鉴定结果表明制备的抗体皆具有良好免疫反应性及特异性,且单抗的特异性明显高于多抗。结论:本研究利用密码子优化技术高效表达制备了 NGAL 重组蛋白,获得了其高效价多克隆抗体和高特异性单克隆抗体,为 NGAL 的病理生理作用等功能研究提供了良好的实验材料,为NGAL临床免疫检测诊断试剂的国产化奠定了有力的基础。
- 王石磊靳鑫魏杰张祥阳媛牛司强汪德强
- 关键词：密码子优化中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白多克隆抗体单克隆抗体
- 分化抑制因子1重组腺病毒的构建及其动物模型的建立被引量：1
- 2018年
- 目的:构建分化抑制因子-1(inhibitor 1 of differentiation,Id1)重组腺病毒(recombinant adenovirus,Rad),并建立Id1过表达的小鼠动物模型。方法:在HEK293细胞中将腺病毒重组质粒Ad Easy-Id1进行包装以获得Id1重组腺病毒(RAd-Id1);通过绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记法测定腺病毒滴度;通过q RT-PCR和Western blot验证RAd-Id1感染的Hep G2细胞中的Id1过表达效果,用MTS比色法检测RAd-Id1对Hep G2细胞增殖的影响;通过尾静脉注射RAd-Id1的感染方式建立肝组织中过表达Id1的小鼠动物模型,病毒载量梯度实验分PBS空白组、RAd-GFP对照组及RAd-Id1实验组(n=5/组)以测定RAd-Id1感染小鼠的适合载量;病毒感染时间梯度实验每5 d检测1次为1组,共7组(n=5/组)以测定感染小鼠的适合时间;通过Western blot检测小鼠肝组织中Id1的过表达效果及甲胎蛋白(alpha fetal protein,AFP)和癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)的表达水平,再采用ELISA检测小鼠血清中Id1的免疫原性及AFP和CEA的表达情况。结果:成功包装获得RAdId1,测得其滴度为1.5×1011 GFU/m L;RAd-Id1感染Hep G2细胞48 h和72 h后,Id1的转录和蛋白水平均明显升高(P<0.01);96 h时RAd-Id1实验组的MTS检测值较PBS空白组和RAd-GFP对照组(2.00±0.06 vs.1.18±0.05,2.00±0.06 vs.1.10±0.07;F=51.350,P=0.000)明显升高;Western blot结果显示:在RAd-Id1感染的小鼠肝组织中,Id1、AFP和CEA蛋白水平较PBS空白组和RAd-GFP对照组升高;ELISA实验结果表明:血清中AFP和CEA蛋白水平与RAd-Id1的载量呈正相关(rs AFP=0.903,PAFP=0.014;rs CEA=0.964,PCEA=0.002),不同载量RAd-Id1感染小鼠的血清中Id1抗体滴度无显著差异(P>0.05)。结论:成功构建了RAdId1及其介导的小鼠动物模型;RAd-Id1可作为细胞水平上研究Id1对肝癌影响的载体工具;AFP和CEA的升高提示Id1可能参与诱导AFP和CEA的表达。
- 魏杰张祥王石磊靳鑫阳媛师悦嫄牛司强汪德强
- 关键词：重组腺病毒分化抑制因子1肝癌动物模型
- 2019-nCoV入胞机制及其抑制剂的研究进展被引量：1
- 2020年
- 新型冠状病毒(2019 novel coronavirus,2019-nCoV)与急性呼吸综合征冠状病毒(severe acute respiratory syndromes coronavirus,SARS-Co V)的核酸和编码的病毒蛋白高度同源,预示其生物学功能也可能非常相似。2019-nCoV利用其刺突蛋白(spike protein,S)的S1亚基与宿主细胞表面的血管紧张素转换酶2(angiotensin converting enzyme 2,ACE2)受体结合,同时利用宿主蛋白酶切割S蛋白促进发生膜融合,进而内吞入胞。阻断2019-nCoV入胞过程的抑制剂主要可分为中和抗体/受体抑制剂、蛋白酶抑制剂和内吞调节因子抑制剂。目前,对2019-nCoV的认识仍然非常有限。相信随着研究的不断推进,能够更加深刻地认识病毒的致病机制,开发出更高效的抗病毒药物。
- 师悦嫄汪德强
- 关键词：新型冠状病毒
- GRP78调控抗乙型肝炎病毒颗粒分泌的抑制剂
- 本发明提供一种基于GRP78的抗乙型肝炎病毒抑制剂。本发明以GRP78蛋白为靶点，通过抑制/阻断乙肝病毒颗粒分泌实现抗乙型肝炎病毒功能。本发明通过质谱鉴定发现GRP78可以与乙肝病毒包膜的preS1相互作用，并证实GRP...
- 汪德强刘俊叶师悦嫄靳鑫吴爽张宏鹏黄爱龙蔡雪飞魏杰阳媛张祥伍晓莉毛胜蓝王雯沈仕梅马园艳
- 一种组织型纤溶酶原激活剂的构建、表达纯化及功能鉴定
- 一种重组组织型纤溶酶原激活剂，即r-tPA，重组质粒的构建及其原核上清表达及纯化方法，它涉及组织型纤溶酶原激活剂重组质粒的构建、原核表达及纯化技术；本发明在含有人tPA全长基因质粒基础上在N端引入能去除载体上标签的3C序...
- 汪德强周建中龙小滨够怡然白垒黄爱龙张宏鹏杨可陈检
- 文献传递
- 一种组织型纤溶酶原激活剂的构建、表达纯化及功能鉴定
- 一种重组组织型纤溶酶原激活剂，即r‑tPA，重组质粒的构建及其原核上清表达及纯化方法，它涉及组织型纤溶酶原激活剂重组质粒的构建、原核表达及纯化技术；本发明在含有人tPA全长基因质粒基础上在N端引入能去除载体上标签的3C序...
- 汪德强周建中龙小滨够怡然白垒黄爱龙张宏鹏杨可陈检
- 文献传递
- HBV血清学标志物研究进展被引量：5
- 2022年
- 疫苗的接种、人类卫生意识的提高、抗病毒药物的逐渐开发降低了乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)的感染,但HBV的消除仍是一大难题,因此HBV的精准检出率极为重要。传统的血清标志物HBV DNA和乙肝表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)在准确反映共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)转录活性与用药检测方面存在一定的局限性。为此,研究者陆续开发出新型HBV血清标志物,如HBV表面抗原、HBV RNA、HBV核心相关抗原、HBV大表面蛋白。基于不同标志物在疾病诊断中的不同参考价值,本文简要对这些标志物的临床应用及面临挑战进行小结,旨在为HBV的高效、准确检出及临床预后提供参考。
- 刘俊叶周华伍晓莉汪德强
- 关键词：乙型肝炎病毒血清学标志物
- RGD-重组葡激酶-人α微球蛋白融合蛋白及其制备与应用
- 本发明提供了一种RGD-重组葡激酶-人α微球蛋白融合蛋白及其制备与应用。本发明所述RGD-重组葡激酶-人α微球蛋白融合蛋白的氨基酸序列如SEQID NO.12所示。本发明的融合蛋白通过以下制备方法获得：采用重叠延伸PCR...
- 周建中汪德强苟冶然龙小滨陈检杨可白垒雷寒黄爱龙何泉张宏鹏
- 文献传递
- 金黄色葡萄球菌表面蛋白SdrE的表达、纯化及晶体生长
- 2014年
- 目的:对金黄色葡萄球菌表面蛋白质(serine-aspartate repeat,SdrE)进行克隆表达纯化及晶体培养,以期解析其三维结构,进而深入分析金黄色葡萄球菌感染的分子机制,为研发新的抗菌药物提供基础。方法:利用PCR技术扩增SdrE基因,构建重组质粒pW28-SdrE,并在大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)B834中表达,用Ni2+-NTA亲和层析柱和DEAE阴离子交换层析柱纯化SdrE蛋白质,再用Hiload Superdex 200凝胶层析柱分析其在溶液中的聚集状态,用Hampton试剂盒初筛晶体及棋盘法优化晶体。结果:(1)构建了重组质粒pW28-SdrE,并在E.coli B834中可溶性表达。(2)获得了纯度较高(85%)的SdrE蛋白质,该蛋白质在溶液中以单体形式存在。(3)培养出晶形较好、衍射能力较强的SdrE蛋白质单晶。结论:利用经典的蛋白质纯化技术和晶体培养技术,可以获得衍射能力较强的SdrE单晶,为其三维结构的解析和基于结构的新型特异性抗菌药物的研发提供了重要的基础。
- 张绍城郭珍张宏鹏苟冶然龙小滨汪德强
- 关键词：金黄色葡萄球菌抗菌药物
