蔡雪飞
- 作品数：48 被引量：41H指数：4
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金重庆市教育委员会科学技术研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 一种体外合成HBV cccDNA的方法及其应用
- 本发明属于生物化学技术领域，具体公开了一种体外合成HBV cccDNA的方法及其应用。所述方法包括：采用HBV DNA的长片段和短片段，通过体外自组装反应无缝环化组装形成1倍体的HBV cccDNA，所述长片段为L1，所...
- 蔡雪飞张津
- 通过自诱导方法对乙型肝炎病毒聚合酶TP区进行可溶性表达及鉴定被引量：5
- 2017年
- 目的构建包含乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)聚合酶TP区段的重组原核表达质粒,转化表达型大肠埃希菌,以自诱导培养方法获得可溶性表达,并对其进行鉴定。方法分析HBV(A型)聚合酶N-末端1-192 AA区域的DNA序列,通过网络工具(http://www.jcat.de/)在线优化,并在5′和3′端分别添加NdeⅠ和XhoⅠ限制性内切酶位点后,送英潍捷基(上海)贸易有限公司进行人工合成;将人工合成的TP-DNA双酶切后,插入pET32a(+)原核表达载体,构建重组原核表达质粒,转化大肠埃希菌BL21(DE3)pLysS进行自诱导表达。结果重组原核表达质粒pET32a(+)/POL-TP-Opt经双酶切及测序证明构建正确;在表达菌的破菌上清中有特异性表达的蛋白,相对分子质量约20 000,经SDS-PAGE和Western blot鉴定,为可溶性的重组TP蛋白。结论通过自诱导培养方法,直接成功获得可溶性的重组TP蛋白,改变了长期以来依靠包涵体复性对TP蛋白相关功能进行研究的状况。
- 陈可代娟甘春扬刘亚罗英英胡接力蔡雪飞
- 关键词：乙型肝炎病毒聚合酶原核细胞基因表达
- 磷酸依托泊甙(VP16)促进PLC5细胞中eEF1A乙酰化
- 目的:翻译延伸因子(eEF1A)是蛋白质合成延伸阶段中的一种重要因子。研究显示,eEF1A功能受到翻译后修饰调节,如磷酸化-去磷酸化。迄今,除了磷酸化-去磷酸化以外,关于eEF1A是否受到其他翻译后修饰尚少有研究。本文研...
- 胡接力许舸张文露胡源黄爱龙蔡雪飞
- 文献传递
- HBV DNA环化结构在体外的复制表达水平优于HBV线性结构的表达质粒
- 2013年
- 为了研究乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)DNA环化结构与HBV线性结构的表达质粒在体外复制表达水平的差异,采用3种含有HBV全长DNA的表达质粒与自连环化的HBV DNA分别转染Huh7细胞.5 d后收集转染处理过的Huh7细胞和细胞上清,从感染细胞中抽提纯化HBV复制中间体进行Southern印迹分析,并将细胞培养上清进行ELISA分析.结果显示,HBV DNA通过环化后转染Huh7细胞,可高效地进行转录和复制表达,且优于质粒转染的效果.证明在细胞中,HBV DNA环状结构的复制表达能力优于HBV线性结构的表达质粒.
- 马其欢杜茜龚旭阳胡接力黄爱龙蔡雪飞
- 关键词：乙型肝炎病毒
- 尼克酰胺作为有效成分在制备乙型肝炎治疗药物中的用途
- 本发明涉及药物研发领域，具体公开了尼克酰胺作为有效成分在制备乙型肝炎治疗药物中的用途。本发明经试验首次揭示了尼克酰胺能够抑制乙型肝炎病毒(HBV)的表达水平，包括抑制HBV复制中间体形成，抑制前基因组RNA表达，抑制核心...
- 陈娟黄爱龙汤华蔡雪飞
- 抗CP4-EPSPS单克隆抗体的制备和生物学特性的鉴定被引量：8
- 2007年
- 目的制备可用于胶体金快速检测试条的抗CP4-EPSPS(5-enolpyruvlshimimate-3-phosphate synthase)单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性。方法以重组蛋白CP4-EPSPS免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗CP4-EPSPS的mAb,以间接ELISA法和Western blot进行mAb特异性鉴定;同时采用间接ELISA法鉴定mAb的Ig亚类,检测mAb的效价及相对亲和力,并进行mAb结合表位分析。结果获得2株可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞(Ⅲ5A3,Ⅲ13A2)。其抗体亚类均为IgG1;腹水效价分别为1∶106和1∶108;相对亲和力Ⅲ5A3在105以上,Ⅲ13A2在106以上。ELISA相加实验结果显示2株mAb识别相同或相近的抗原表位。结论成功地制备出抗CP4-EPSPS的2株mAb,为建立快速特异检测转基因植物(GMO)的实验方法提供了有力的工具。
- 敬凌霞蔡雪飞慕生枝刘湘张君唐霓郑建黄爱龙
- 关键词：单克隆抗体生物学特性GMO
- 一种病毒核酸提取试剂盒及利用该试剂盒提取完整病毒颗粒核酸的方法
- 本发明涉及一种病毒核酸提取试剂盒及利用该试剂盒提取完整病毒颗粒核酸的方法，属于核酸提取技术领域。本发明提供了一种病毒核酸提取试剂盒，包括病毒颗粒俘获液、病毒颗粒洗液、病毒颗粒裂解液、洗涤液1、洗涤液2、核酸洗脱液和磁珠溶...
- 汪德强马园艳伍晓莉刘俊叶毛胜蓝李亚兰蔡雪飞黄爱龙王雯沈仕梅汪云悠
- 多聚嘧啶序列结合蛋白的表达、纯化及其与HBV转录后调节元件RNA结合的分析
- 2008年
- 目的在大肠埃希菌中表达并纯化多聚嘧啶序列结合蛋白(polypyrimidine tract binding protein,PTB)-His融合蛋白,并鉴定PTB与HBV转录后调节元件(HBV posttranscriptional regulatory element,HPRE)RNA的体外结合。方法构建PTB-His融合蛋白的原核表达载体,经IPTG诱导表达后,用亲和层析的方法进行纯化。用磁珠结合与Western印迹的方法,验证PTB与HPRE RNA在体外的特异性结合。结果成功构建了PTB-His融合蛋白的原核表达载体,并在体外大量表达后用亲和层析的方法得到了高纯度的PTB-His融合蛋白。磁珠结合沉淀与Western印迹实验证明PTB与HPRE RNA在体外能特异性的结合。结论体外表达的PTB融合蛋白能与HPRE RNA特异性的结合。
- 程丽英李毅蔡雪飞刘湘黄爱龙汤华
- 关键词：原核表达载体
- HBV前S2蛋白单克隆抗体的制备和生物学特性的鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的克隆表达HBV前S2蛋白,用纯化的重组蛋白GST-S2免疫BALB/C小鼠,通过杂交瘤技术制备抗HBV前S2蛋白的单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性。方法利用含双拷贝乙肝病毒adw2亚型基因全序列的质粒pEcob6,经PCR方法扩增出HBV前S2片段,在GST表达系统中表达,表达产物用谷胱甘肽亲和层析纯化后,用于免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗前S2蛋白的mAb,采用间接ELISA方法和Western blot进行mAb特异性鉴定;同时采用间接ELISA方法鉴定mAb相对亲和力。结果获得一株可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞7A6;相对亲和力均在107以上。Western blot显示该株mAb能特异识别重组前S2蛋白。结论成功地制备出抗HBV前S2蛋白的一株mAb。
- 赖梅梅王雪梅张君蔡雪飞郑健黄爱龙
- 关键词：乙肝病毒前S2蛋白单克隆抗体生物学特性
- 丙型肝炎病毒P7蛋白体外原核表达状况的研究被引量：1
- 2011年
- 目的:扩增丙型肝炎病毒(Hepatitis Cvirus,HCV)P7蛋白基因,克隆到多个原核表达系统,观察P7蛋白在体外表达的情况,获取具有生物学活性的HCVP7重组蛋白。方法:设计扩增全长HCVP7基因片段的特异引物,以H/FL质粒DNA(含HCV1acDNA全长序列)为模板,通过PCR扩增全长HCV P7基因,定向克隆到pQE30、pGEX 4T-2、pET32a(+)3种不同类型的原核表达载体中。将重组后包含HCVP7基因的原核表达载体转化表达型大肠杆菌BL21(DE3)pLysS或SG13009(PREP4),并做异丙基硫化-β-D-半乳糖苷(Isopropyl-beta-D-thiogalactoside,IPTG)诱导表达,通过SDS-PAGE和Western blot鉴定HCV P7蛋白原核表达的情况。结论:获得可溶性的重组蛋白GST-HCVP7和Trx-HCVP7,为进一步研究P7蛋白的生物学功能奠定基础。
- 陈可胡接力胡源张文露王增产汤华黄爱龙蔡雪飞
- 关键词：丙型肝炎病毒原核表达
