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青蒿转杜松烯合成酶基因发根系的培养被引量：23: 1998年; 将已克隆的棉花杜松烯合成酶的ｃＤＮＡ（ｃａｄＣ１４）插入到植物表达载体ｐＢＩ１２１中，构建含ＣａＭＶ３５Ｓ启动子驱动下的杜松烯合成酶基因的植物表达载体ｐＢＩＣ１４。用含ｐＢＩＣ１４质粒的发根农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ）１５８３４感染青蒿（ＡｒｔｅｍｉｓｉａａｎｎｕａＬ．）叶片并诱导发根，共建立１２１个生长迅速的发根系。经浓度为２０ｍｇ／Ｌ的Ｋａｎ筛选，获得１２个抗Ｋａｎ阳性根系。ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ分析表明，外源杜松烯合成酶基因已整合到青蒿基因组中，其转基因频率为３％。ＲＴＰＣＲ分析表明，外源杜松烯合成酶基因在Ｃ３７根系中，在转录水平上已有表达。; 陈大华孟玉玲叶和春李国凤李国凤; 关键词：青蒿

绿色荧光蛋白基因在青蒿转基因芽中的表达被引量：22: 1999年; 将改良的绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）基因，插入到植物表达载体中，构建双ＣａＭＶ３５Ｓ启动子驱动下的植物表达载体ｐＢＩＧＦＰ，在Ｋａｎ浓度为２０ｍｇ／Ｌ的筛选培养基上，用含有ｐＢＩＧＦＰ质粒的根癌农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ（ＳｍｉｔｈｅｔＴｏｗｎｓｅｎｄ）Ｃｏｎｎ）ＬＢＡ４４０４感染青蒿（ＡｒｔｅｍｉｓｉａａｎｎｕａＬ．）叶片，获得５个抗Ｋａｎ阳性丛生芽系。Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ分析表明，外源ＧＦＰ基因已整合到青蒿转基因芽Ｇ１系的基因组中。在ＯＬＹＭＰＵＳ＿ＢＨ２型荧光显微镜下，观察到转基因芽中有较强的绿色荧光。表明绿色荧光蛋白基因在青蒿转基因芽中业已表达。从而建立以绿色荧光蛋白基因为报告基因的、根癌农杆菌介导的青蒿转基因系统。; 陈大华叶和春李国凤刘本叶; 关键词：青蒿绿色荧光蛋白

植物类异戊二烯代谢途径的分子生物学研究进展被引量：104: 2000年; New advances in molecular biology of plant secondary metabolic pathway were summarized. The biosynthesis of artemisinin was used as an example, combined with the research work in the authors’ laboratory. Some new ways for producing plant secondary metabolites were proposed.; 陈大华叶和春李国凤刘彦; 关键词：次生代谢分子调控 HMGR

优系青蒿法呢基焦磷酸合酶基因的克隆和酶学分析被引量：12: 2003年; 从青蒿(Artemisia annua L)高产株系025的cDNA文库中克隆到了一个编码青蒿法呢基焦磷酸合酶(AaFPSl)的cDNA(afl).序列分析表明,这一cDNA编码一个含343个氧基酸残基的蛋白质,分子量为39kD.推导出的氯基酸序列与来自其他植物、哺乳动物及酵母的FPS相似,也包含异戊烯基转移酶和聚异戊烯基合酶所共有的5个保守域.此cDNA在大肠杆菌中的表达产物表现出明显的FPS酶学活性.通过离子交换层析纯化后,进一步测定了其酶学动力学.上述结果将进一步推动青蒿素生物合成分子调控的研究.; 赵玉军叶和春叶和春李国风陈大华; 关键词：热病抗疟药物酶学分析

马铃薯HMGR基因的克隆、序列分析及其表达特征被引量：16: 2000年; 采用RT_PCR技术 ,从马铃薯 (SolanumtuberosumL .)幼叶中克隆了一个约 1.0kb的cDNA片段 ,序列分析结果表明 ,该cDNA与已报道的马铃薯HMGR基因家族的三种类型基因具有较高核酸序列同源性 ,与HMGRⅠ基因同源性为 77.0 % ,HMGRⅡ基因为 93.2 % ,HMGRⅢ基因为 77.1%。其中 3′端非翻译区序列与HMGRⅠ、HMGRⅡ、HMGRⅢ三种基因同源性分别为 5 0 .2 %、80 .3%和 5 0 .7% ,因此推测该cDNA片段为HMGR基因家族中HMGRⅡ亚基因家族新发现的成员之一 ,命名为HMGR_c2。以特异探针进行的Southern杂交结果初步证明 ,HMGR_c2基因至少以两个以上拷贝形式存在于马铃薯基因组中 ;Northern杂交分析表明 ,HMGR_c2基因的全长mRNA约为 2 .0kb。定量RT_PCR分析表明 ,HMGR_c2基因在根、茎、叶等组织中均有表达 ,且在叶片表达量最高 ,约为根、茎的两倍。; 陈大华叶和春李国凤刘彦; 关键词：马铃薯

青蒿发根生长及青蒿素生物合成动态的研究被引量：21: 1998年; 从７４７条发根农杆菌ＡＴＣＣ１５８３４转化的青蒿株系０２５发根中，筛选出７个生长较快的发根系，这７个系在生长速度和青蒿素含量上均有显著差异，其中发根系ＨＲ９青蒿素产率最高，达到每月３３２５ｍｇ／Ｌ。青蒿发根的生长量和青蒿素含量极显著高于未转化根和愈伤组织。青蒿发根在分批培养中没有明显的迟滞期，接种后第７天进入指数生长期，第１１天生长最快，第２０天进入稳定期。青蒿发根中青蒿素含量呈明显的“与生长相关”特性，在指数生长期，青蒿素含量缓慢下降，生长速度减缓后，青蒿素含量上升，发根生长停止后，继续延长培养时间，青蒿素含量也不再提高。在分批培养中，青蒿发根适宜的培养时间为２１ｄ。; 刘本叶叶和春李国凤陈大华耿飒张艳萍陈建林; 关键词：青蒿发根发根农杆菌青蒿素生物合成

青蒿异源基因的遗传转化及青蒿素生物合成相关基因的克隆: 该论文由三部分内容组成,一、药用青蒿的遗传转化,即根癌农杆菌和发根农杆菌介导的转化系统的建立及其影响参数的研究.二、青蒿素生物合成的分子调控.三、倍半萜生物合成相关基因的克隆.; 陈大华; 关键词：青蒿青蒿素分子调控关键酶; 文献传递

大规模细胞培养生产青蒿素: 叶和春李国凤王红刘本叶逯春明陈大华刘彦耿飒王玉春陈建林张龙; 该课题研究了不同基因型青蒿中青蒿素的含量，旨在客服遗传不稳定问题。获得转异源FPS基因和Cad基因的高产发根系；获得转异源FPS基因的青蒿F-73高产株系；建立了转基因植株丛生芽克隆和规模化生产技术系统；研制了新型发根生...; 关键词：; 关键词：青蒿素青蒿细胞培养

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陈大华