陈应理
- 作品数：84 被引量：78H指数：5
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金中国农业科学院院长基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学化学工程更多>>
- A型口蹄疫病毒衣壳蛋白主要抗原表位区的原核表达及免疫效果分析被引量：2
- 2019年
- 为了探索更有效的A型口蹄疫(FMD)表位疫苗,根据已鉴定的A型口蹄疫病毒(FMDV)主要抗原位点,结合基因序列比对分析,选择了A型FMDV流行毒株的主要抗原位点区进行表位蛋白分子的设计表达。所用表位序列包括A/QH/CHA/2013的VP2 70~81位、118~140位,VP1 G-H环131~157位、C末端188~212位,A/WH/CHA/09 VP1 43~48位、VP3 55~72位,以及非结构蛋白3A中的T细胞表位和通用性T细胞表位,构建免疫原蛋白分子命名为ANX2和ANX3,其中ANX2采用了表位序列反向串联的方式进行设计,用大肠杆菌表达免疫原基因,纯化表位蛋白免疫小鼠和猪,分析特异性体液免疫和细胞免疫应答水平,并对免疫猪进行了攻毒保护试验,评价表位疫苗的保护效果。结果显示,ANX2、ANX3重组蛋白以包涵体表达为主,蛋白大小约为41 ku和39 ku,均能与A型FMDV阳性血清发生特异性反应;免疫小鼠和猪后都能产生抗A型FMDV特异性抗体;用表位蛋白刺激免疫小鼠脾淋巴细胞,细胞因子IFN-γ和IL-4均有明显的升高;攻毒后对猪有一定的保护作用,ANX2的免疫效果略优于ANX3,证明表位序列反向串联更有利于抗原表位的展示,从而增强其免疫效果。本研究为A型FMDV表位疫苗的研究积累了经验。
- 汪肖肖孙普贾怀杰李冬付元芳陈应理曹轶梅景志忠白兴文卢曾军刘在新
- 关键词：A型口蹄疫病毒表位疫苗体液免疫
- 一种过表达HS3ST5基因的试剂在促进病毒感染中的应用及重组CHO-K1细胞系
- 本发明提供了一种过表达HS3ST5基因的试剂在促进病毒感染中的应用及其构建的重组CHO‑K1细胞系，属于基因工程技术领域。本发明提供通过将HS3ST5片段克隆到慢病毒载体中构建出重组慢病毒质粒，再经病毒拯救包装出的慢病毒...
- 白兴文卢曾军袁红黄磊宫晓华刘在新包慧芳李平花孙普李冬马雪青陈应理曹轶梅付元芳张婧邓欣雨焦云娟王利豪杨宇轩
- 一种A型口蹄疫标记疫苗及其构建方法
- 本发明公开了一种A型口蹄疫标记疫苗及其构建方法，所公开的标记疫苗的种毒为具有SEQ ID NO：3基因片段的A/rV-2病毒，该基因片段编码的氨基酸序列为序列表SEQ ID NO：4，其缺失口蹄疫病毒3A蛋白的104-1...
- 李平花刘在新孙普袁红白兴文卢曾军李冬陈应理包慧芳付元芳曹轶梅
- 口蹄疫病毒O/CHN/Mya98/33-P株前导蛋白对病毒感染性的影响被引量：1
- 2014年
- 【目的】研究口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)前导蛋白对于病毒感染性的影响。【方法】利用反向遗传操作技术,以O/CHN/93现用疫苗株的感染性克隆为骨架,分别构建了含口蹄疫病毒中国分离株O/CHN/Mya98/33-P和O/CHN/Mya98/HN1前导蛋白的两株嵌合全长cDNA感染性克隆,采用实时荧光定量PCR检测两株不同的嵌合病毒感染猪肾原代细胞后细胞内IFNβ和OAS mRNA的转录情况。【结果】嵌合病毒rOHN1Lab增殖能力较弱,其对应诱导产生的IFNβ和OAS mRNA含量较高,而嵌合毒rO33Lab相对于rOHN1Lab增殖能力较强,他们诱导产生的IFNβ和OAS mRNA含量较低。【结论】研究表明口蹄疫病毒中国分离株O/CHN/Mya98/33-P前导蛋白具有更强的抗IFNβmRNA转录的能力,该研究能够为进一步鉴定FMDV前导蛋白抗宿主先天性免疫的关键性位点奠定基础。
- 张萌白兴文李平花范朋举包慧芳孙普卢曾军曹轶梅陈应理刘在新
- 关键词：口蹄疫病毒嵌合病毒转录
- 猪C型凝集素受体8A骆驼单域抗体酵母展示文库的构建被引量：1
- 2018年
- 为构建猪C型凝集素受体8A（C-type lectin domain family 8，member A，CLEC8A）的单域抗体酵母展示文库，本文首先克隆出了猪CLEC8A基因编码区序列。通过SMART软件分析，鉴定出该受体胞外区基因序列，并插入原核表达载体pET28a（＋），在大肠杆菌BL21（DE3）中成功表达出了猪CLEC8A胞外区蛋白。表达的蛋白经201佐剂乳化后免疫双峰驼，间接ELISA监测抗体滴度，于六免后15d分离骆驼外周血淋巴细胞。提取总RNA，反转录成cDNA后经巢式PCR扩增获得骆驼WfH基因。纯化的VHH片段与线性化的pCTCON2载体混合后共转入酿酒酵母感受态细胞（EBY100），经细胞内同源重组，成功制备了针对猪CLEC8A受体的骆驼单域抗体酵母展示文库。经菌落计数及测序鉴定结果表明，文库大小约为1．6×10 7，文库重组率达90％，文库多样性丰富。流式细胞术初步鉴定酵母细胞表面成功展示出抗猪CLE8A的单域抗体，为后续文库筛选奠定基础。
- 魏国燕李坤卢曾军刘在新孙普白兴文李冬陈应理包慧芳李平花付元芳张婧马雪青曹轶梅
- 关键词：流式细胞术
- 同源重组法制备口蹄疫病毒多基因重组腺病毒被引量：3
- 2004年
- 通过细菌内同源重组的方法成功构建了含有O型口蹄疫病毒P1-2A和3C蛋白酶基因和3D基因的重组腺病毒表达载体.首先将P1-2A、3C和3D基因亚克隆连接到穿梭质粒pShuttle-CMV上,再将重组穿梭质粒用PmeI线性化后电转化携带有腺病毒骨架载体pAdeasy-1的大肠杆菌BJ5183感受态菌,经细菌内同源重组产生pAdcmv-p12x3c和pAdcmv-p12x3cd重组腺病毒质粒,经序列测定证实目的基因已正确的插入到腺病毒骨架载体中.重组腺病毒质粒经PacI线性化后转染HEK293细胞,转染1w内细胞出现典型病变.取转染细胞裂解液上清连续传代至第4代时,细胞于24~48h内即病变完全,收取接毒后24h细胞进行PCR和RT-PCR检测,表明目的基因已整合到腺病毒基因组内,且在mRNA水平上有表达.取第4、6、8和10代病毒,用蛋白酶K处理后可扩增出目的基因,证明此重组病毒可稳定存在.本研究为FMDV腺病毒活载体疫苗的研究奠定了基础.
- 卢曾军曹轶梅包惠芳刘在新赵启祖陈应理常惠芸谢庆阁
- 关键词：同源重组口蹄疫病毒腺病毒疫苗免疫
- 猪O型口蹄疫基因工程疫苗候选株的构建及其免疫原性分析被引量：3
- 2011年
- 近年来,O型口蹄疫病毒已演化出多种谱系。目前应用的疫苗已不能有效保护多谱系口蹄疫的流行,这给我国猪口蹄疫的防控带来了极大的困难。为了进一步发展免疫原性好、抗原谱广的猪O型口蹄疫疫苗候选株,本研究以O/HN/93现用疫苗毒株的感染性克隆为骨架,构建了含VP3(58位)和VP1(43、48、137、139、140、141和142位)氨基酸改造的全长克隆。线性化的全长cDNA和T7RNA聚合酶质粒共转染BHK细胞后获得拯救病毒。RT-PCR和乳鼠致病性试验表明拯救病毒遗传稳定,具有与亲本病毒相似的致病性。用拯救的基因工程病毒灭活疫苗免疫猪28d后分别用中国谱系、泛亚谱系和缅甸98谱系猪源毒的流行毒攻击,结果均获得了完全保护(16/16)。O/HN/93灭活疫苗免疫猪能完全保护泛亚谱系和缅甸98谱系猪源病毒的攻击(16/16),但不能完全保护(12/16)中国谱系猪源病毒的攻击。结果表明基因工程病毒制备的灭活疫苗提高了对中国型猪源谱系病毒的免疫保护,拓展了抗原谱,是具有良好开发前景的疫苗候选株。
- 李平花白兴文孙普李冬卢曾军包慧芳曹轶梅付元芳陈应理谢宝霞殷宏刘在新
- 关键词：猪口蹄疫免疫原性分析
- 一种O型口蹄疫病毒突变株及其制备方法和应用
- 本发明提供了一种O型口蹄疫病毒突变株及其制备方法和应用，属于疫苗候选株技术领域。O型口蹄疫病毒突变株以rHN病毒株作为母本病毒株，将VP3蛋白的G–H环中以下氨基酸发生突变：第173位天冬氨酸突变为天冬酰胺，第174位缬...
- 白兴文刘在新卢曾军包慧芳李平花李冬孙普付元芳陈应理曹轶梅马雪青李坤张婧陈冬冬宫晓华
- 文献传递
- 一种牛趋化因子介导的O型口蹄疫靶向性复合表位蛋白及疫苗
- 本发明提供一种牛趋化因子介导的O型口蹄疫靶向性复合表位蛋白，所述靶向性复合表位蛋白的氨基酸序列为序列表中SEQ ID No.2。本发明还提供含有上述牛趋化因子介导的O型口蹄疫靶向性复合表位蛋白的疫苗。应用本发明的疫苗免疫...
- 卢曾军曹轶梅刘在新李坤李冬魏国燕付元芳陈应理包慧芳李平花白兴文孙普马雪青张婧
- 文献传递
- 检测口蹄疫病毒非结构蛋白抗体的单克隆抗体阻断ELISA试剂盒及方法
- 本发明公开了检测口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白(NSP)抗体的单克隆抗体阻断ELISA试剂盒及方法(FMD NSP B-ELISA)，包括酶标反应板、血清稀释液、25倍浓缩洗涤液、底物溶液、100×浓缩酶标检测抗体、终...
- 卢曾军刘在新曹轶梅付元芳孙普李冬包慧芳李平花白兴文陈应理谢宝霞厍大亮
- 文献传递
