李冬
- 作品数：149 被引量：185H指数：7
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学化学工程更多>>
- 口蹄疫灭活疫苗的生产工艺概述被引量：6
- 2011年
- 灭活疫苗仍然是当前防控口蹄疫使用的主要疫苗,因此研究灭活疫苗生产工艺具有非常重要的现实意义。详细论述了口蹄疫灭活疫苗生产过程,并对近年来生产工艺方面的一些研究进展做了简要介绍。
- 厍大亮李冬
- 关键词：口蹄疫灭活疫苗生产工艺
- 猪C型凝集素受体8A骆驼单域抗体酵母展示文库的构建被引量：1
- 2018年
- 为构建猪C型凝集素受体8A（C-type lectin domain family 8，member A，CLEC8A）的单域抗体酵母展示文库，本文首先克隆出了猪CLEC8A基因编码区序列。通过SMART软件分析，鉴定出该受体胞外区基因序列，并插入原核表达载体pET28a（＋），在大肠杆菌BL21（DE3）中成功表达出了猪CLEC8A胞外区蛋白。表达的蛋白经201佐剂乳化后免疫双峰驼，间接ELISA监测抗体滴度，于六免后15d分离骆驼外周血淋巴细胞。提取总RNA，反转录成cDNA后经巢式PCR扩增获得骆驼WfH基因。纯化的VHH片段与线性化的pCTCON2载体混合后共转入酿酒酵母感受态细胞（EBY100），经细胞内同源重组，成功制备了针对猪CLEC8A受体的骆驼单域抗体酵母展示文库。经菌落计数及测序鉴定结果表明，文库大小约为1．6×10 7，文库重组率达90％，文库多样性丰富。流式细胞术初步鉴定酵母细胞表面成功展示出抗猪CLE8A的单域抗体，为后续文库筛选奠定基础。
- 魏国燕李坤卢曾军刘在新孙普白兴文李冬陈应理包慧芳李平花付元芳张婧马雪青曹轶梅
- 关键词：流式细胞术
- 猪源IFN-λ3在CHO-S细胞中的表达及其抗口蹄疫病毒活性分析
- 2022年
- 为了探究猪源IFN-λ3蛋白能否在CHO-S悬浮细胞中表达以及表达蛋白的抗口蹄疫病毒(FMDV)活性,根据NCBI上的猪源IFN-λ3序列,构建真核表达载体pcDNA3.4-IFNλ3-His,将其转染至CHO-K1贴壁细胞中,用间接免疫荧光试验和Western-blot验证重组质粒是否表达IFN-λ3蛋白。将pcDNA3.4-IFNλ3-His转染至CHO-S悬浮细胞中大量制备IFN-λ3蛋白,用AKTA蛋白纯化系统纯化蛋白,用SDS-PAGE和Western-blot方法鉴定纯化出的蛋白,用细胞毒性试验分析纯化蛋白是否具有细胞毒性,用实时荧光定量PCR、Western-blot和空斑试验三种方法研究纯化蛋白的抗FMDV活性。结果显示,重组质粒pcDNA3.4-IFNλ3-His在CHO-K1细胞中瞬时表达IFN-λ3,在CHO-S细胞中以分泌形式表达IFN-λ3;用AKTA系统能够纯化出纯度较高的IFN-λ3蛋白;纯化出的IFN-λ3对PK-15细胞无明显毒性,能够抑制FMDV RNA的复制、减弱病毒蛋白翻译活动以及降低子代病毒的生成。本研究为发展新型FMDV防控策略提供了新方向。
- 袁红白兴文李坤李平花孙普宋雅丽焦云娟刘在新卢曾军李冬包慧芳
- 关键词：口蹄疫病毒抗病毒活性
- 猪O型口蹄疫基因工程疫苗候选株的构建及其免疫原性分析被引量：3
- 2011年
- 近年来,O型口蹄疫病毒已演化出多种谱系。目前应用的疫苗已不能有效保护多谱系口蹄疫的流行,这给我国猪口蹄疫的防控带来了极大的困难。为了进一步发展免疫原性好、抗原谱广的猪O型口蹄疫疫苗候选株,本研究以O/HN/93现用疫苗毒株的感染性克隆为骨架,构建了含VP3(58位)和VP1(43、48、137、139、140、141和142位)氨基酸改造的全长克隆。线性化的全长cDNA和T7RNA聚合酶质粒共转染BHK细胞后获得拯救病毒。RT-PCR和乳鼠致病性试验表明拯救病毒遗传稳定,具有与亲本病毒相似的致病性。用拯救的基因工程病毒灭活疫苗免疫猪28d后分别用中国谱系、泛亚谱系和缅甸98谱系猪源毒的流行毒攻击,结果均获得了完全保护(16/16)。O/HN/93灭活疫苗免疫猪能完全保护泛亚谱系和缅甸98谱系猪源病毒的攻击(16/16),但不能完全保护(12/16)中国谱系猪源病毒的攻击。结果表明基因工程病毒制备的灭活疫苗提高了对中国型猪源谱系病毒的免疫保护,拓展了抗原谱,是具有良好开发前景的疫苗候选株。
- 李平花白兴文孙普李冬卢曾军包慧芳曹轶梅付元芳陈应理谢宝霞殷宏刘在新
- 关键词：猪口蹄疫免疫原性分析
- 一种O型口蹄疫病毒突变株及其制备方法和应用
- 本发明提供了一种O型口蹄疫病毒突变株及其制备方法和应用，属于疫苗候选株技术领域。O型口蹄疫病毒突变株以rHN病毒株作为母本病毒株，将VP3蛋白的G–H环中以下氨基酸发生突变：第173位天冬氨酸突变为天冬酰胺，第174位缬...
- 白兴文刘在新卢曾军包慧芳李平花李冬孙普付元芳陈应理曹轶梅马雪青李坤张婧陈冬冬宫晓华
- 文献传递
- 一种O型口蹄疫疫苗候选株及其构建方法和应用
- 本发明公开了一种O型口蹄疫疫苗候选株及其构建方法和应用，属于生物制品技术领域。本发明利用口蹄疫病毒的反向遗传操作技术，以嵌合口蹄疫当前流行毒株O/XJ/CHA/2017L+P1基因感染性克隆为骨架，进一步用口蹄疫病毒O/...
- 李平花孙普查晶晶卢曾军袁红李冬包慧芳曹轶梅白兴文付元芳马雪青李坤赵志荀刘在新
- 一种口蹄疫O型PanAsia-2谱系储备疫苗毒株及其构建方法和应用
- 本发明提供了一种口蹄疫O型PanAsia‑2谱系储备疫苗毒株及其构建方法和应用，属于兽药生物制品技术领域。口蹄疫重组病毒rHN/TUR09/VP1以O/HN/CHA/93病毒株为骨架，嵌合O/TUR/5/2009的VP1...
- 李平花刘在新卢曾军黄书伦孙普查晶晶李冬白兴文曹轶梅马雪青李坤袁红付元芳
- 双峰驼诱导排卵因子活性肽的分离被引量：13
- 1995年
- 从双峰驼精清内分离出一种新的活性多肽。这种多肽是将公驼的精清经ＤＥＡＥ—纤维素和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ—２００柱层析加以初步分离。在试验动物上测试，找到可以诱发母兔排卵的活性多肽。用十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ—ＰＡＧＥ）和等电聚焦电泳（ＩＥＦ）测定了这种多肽的分子量和等电点。
- 刘湘涛潘光武李冬陈志田薛景山赵启祖刘石常慧云谢庆阁李三胜杨金田
- 关键词：双峰驼精清活性多肽
- 一种牛趋化因子介导的O型口蹄疫靶向性复合表位蛋白及疫苗
- 本发明提供一种牛趋化因子介导的O型口蹄疫靶向性复合表位蛋白，所述靶向性复合表位蛋白的氨基酸序列为序列表中SEQ ID No.2。本发明还提供含有上述牛趋化因子介导的O型口蹄疫靶向性复合表位蛋白的疫苗。应用本发明的疫苗免疫...
- 卢曾军曹轶梅刘在新李坤李冬魏国燕付元芳陈应理包慧芳李平花白兴文孙普马雪青张婧
- 文献传递
- 检测口蹄疫病毒非结构蛋白抗体的单克隆抗体阻断ELISA试剂盒及方法
- 本发明公开了检测口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白(NSP)抗体的单克隆抗体阻断ELISA试剂盒及方法(FMD NSP B-ELISA)，包括酶标反应板、血清稀释液、25倍浓缩洗涤液、底物溶液、100×浓缩酶标检测抗体、终...
- 卢曾军刘在新曹轶梅付元芳孙普李冬包慧芳李平花白兴文陈应理谢宝霞厍大亮
- 文献传递
