韩峰
- 作品数：10 被引量：57H指数：4
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人乳头瘤病毒6b型H增强子样序列在大肠杆菌中增强基因转录和β-干扰素表达被引量：2
- 1998年
- 将人乳头瘤病毒６ｂ型（ＨＰＶ６ｂ）基因组上游调控区（ＵＲＲ）５４０ｂｐ的Ｓａｕ３Ａ－ＮａｒＩ片段（Ｈ序列），正反向插入β－干扰素表达载体Ｔｒｐ启动子上游，使β－ＩＦＮ表达明显增强，可使基因表达水平提高３．６倍（正向）和２．１倍（反向）。Ｈ序列正反向插入增强子检测载体不仅使β－半乳糖苷酶表达活性增加５－１０倍，还能使半乳糖苷酶ｍＲＮＡ量明显增高，证明Ｈ序列对被调控基因的增强作用是发生在转录水平。
- 李同据吴淑华韩峰薛水星王金涛刘哲伟杨佩英侯云德
- 关键词：干扰素基因转录人乳头瘤病毒
- 表达流感病毒神经氨酸酶基因的重组腺病毒的构建被引量：8
- 2003年
- 通过RT-PCR方法扩增流感病毒神经氨酸酶基因,将其克隆到腺病毒穿梭载体pTrackCMV,此重组质粒与腺病毒DNA共转化大肠杆菌BJ5183,通过细菌内同源重组获得重组腺病毒DNA,将其转染293细胞获得重组腺病毒。经PCR证实目的基因已整合至腺病毒基因组中,western blot检测到神经氨酸酶的表达。重组病毒经滴鼻和灌胃两种途径免疫小鼠,结果表明2次免疫后滴鼻组和灌胃组均产生明显的免疫应答反应,滴鼻组的免疫效果优于灌胃组。
- 赵小东韩峰王艳杨贵宾应革林勇平王璇吴淑华
- 关键词：流感病毒神经氨酸酶基因重组腺病毒疫苗
- 流感病毒NA—C3d融合基因在非复制型重组腺病毒中的表达及其免疫效果的研究
- 2013年
- 目的构建表达融合基因NA—C3d的非复制型重组腺病毒并研究其免疫效果。方法将NA-C3d融合基因克隆到穿梭载体pAdTrack—CMV，与腺病毒DNA共转化E.coliBJ5183，经同源重组获得重组腺病毒DNA，将其转染293细胞获得重组腺病毒并检测其免疫效果。结果NA-C3d经PCR证实整合至腺病毒基因组中；重组病毒感染293细胞中经WsternBot检测到融合蛋白；重组病毒经滴鼻途径免疫小鼠，2次免疫后产生明显的免疫应答，血清IgG抗体滴度分别为1：1000和1：100000；经小剂量攻毒实验显示重组腺病毒保护率为100％。结论成功构建表达NA—C3d的非复制型重组腺病毒，该病毒可诱导较好的免疫效果。
- 韩峰王璇王艳赵小东吴淑华
- 关键词：流感病毒A型神经氨酸酶佐剂腺病毒科
- 中国人促红细胞生成素基因组的克隆及其在COS-7细胞中的表达被引量：3
- 1994年
- 本文利用PCR技术,从正常人胎肝染色体DNA库中分离克隆了长度分别为506bp,465bp的中国人促红细胞生成素(EPO)基因组片段。506bp基因片段包括外显子2(信号肽),内含子2和外显子3;465bp片段包括外显子4,内含子4和外显子5。通过在引物中设置的酶切位点将两个克隆片段进行了正确的拼接,从而得到了约1.0kb的EPO次全基因组片段,它包括除信号肽中第2,3,4位氨基酸外的所有编码区及两个内含子序列。 所克隆的次全EPO基因组插入表达载体pSV2-dhfr中的不同克隆位点,构建了3种不同的转移载体质粒,分别转染导入COS-7细胞后,3种转移载体质粒转染的细胞上清液都有明显的EPO活性。本工作证明仅含有内含子2,4序列,去除负调控区和氧敏感区序列的人次全EPO基因组可以在COS-7细胞中获得表达。
- 黄利文韩峰郑秋君马学军陈广南李玉英蒋盘宏吴淑华侯云德
- 关键词：聚合酶链反应EPO
- 表达流行性感冒病毒HA基因非复制型重组腺病毒的构建及免疫效果的研究被引量：8
- 2005年
- 通过RT PCR扩增流行性感冒(流感)病毒HA基因,克隆至腺病毒穿梭载体pAdTrack CMV,该重组质粒与腺病毒DNA共转化E.coliBJ5183,通过细菌内同源重组获得重组腺病毒DNA,将其转染293细胞获得重组腺病毒。PCR证实HA基因已整合至腺病毒基因组中,Westernblot结果检测到重组病毒感染293细胞中HA的表达。重组病毒经滴鼻和灌胃两种途径免疫小鼠,结果2次免疫后滴鼻组和灌胃组均产生明显的免疫应答,血清IgG抗体滴度分别为1∶10000和1∶1000。除血清IgG外,还在肺灌洗液中检测到分泌型IgA。滴鼻组的免疫效果强于灌胃组。经小剂量攻毒实验显示,重组腺病毒保护率为100%。该文成功构建了表达流感病毒HA基因的非复制型重组腺病毒,重组病毒免疫小鼠可产生较好的免疫效果。
- 赵小东韩峰应革王璇王艳吴淑华
- 关键词：流行性感冒病毒血凝素重组腺病毒HA基因
- 痘苗病毒VV1原核增强子样序列的克隆及其功能和应用研究
- 2015年
- 目的 从痘苗病毒基因组中克隆原核增强子样序列VV1,并对其结构、功能和应用进行研究.方法 采用氯霉素乙酰转移酶基因（CAT）作为报告基因,从痘苗病毒基因组中筛选具有原核增强子样活性的序列,采用末端定向缺失试验对原核增强子样序列进行结构与功能研究,用携带增强子样序列表达载体表达干扰素基因.结果 从痘苗病毒天坛株DNA基因组中筛选到原核增强子样序列VV1,正反向分别可使lacZ基因活性提高10.9倍和3.8倍,末端定向缺失试验证实,5＆#39;末端20 bp的核苷酸序列和3＆#39;末端20 bp的核苷酸序列对于VV1的活性具有重要作用,因为缺失任意一个都会导致增强活性的大幅度下降.而5＆#39;末端30-50 bp的核苷酸序列对于保持VV1片段的基本活性非常重要,缺失它时VV1的活性完全消失.用携带VV1的表达载体表达的IFN-α2b型干扰素比原表达载体活性提高2.6倍.结论 从痘苗病毒天坛株DNA基因组中筛选到原核增强子样序列VV1,末端定向缺失试验证实VV1功能区,携带痘苗病毒增强子样序列VV1的表达载体可提高干扰素基因的表达水平.
- 韩峰曹茹王艳秘晓林
- 关键词：痘苗病毒
- 原核增强子样序列的筛选及其应用研究被引量：2
- 2010年
- 目的 从大肠埃希菌C600株染色体基因组中筛选原核增强子样序列,构建携带原核增强子样序列的表达载体,探讨其对干扰素基因表达的影响.方法 采用氯霉素乙酰转移酶基因（CAT）作为报告基因,从大肠埃希菌C600株染色体基因组中筛选具有原核增强子样活性的序列,构建携带增强子样序列的表达载体,表达干扰素基因和检测干扰素活性.结果 从大肠埃希菌C600株染色体基因组中筛选到一个原核增强子样序列3A,其正、反向增强活性分别能提高β-半乳糖苷酶活性7.11和2.93倍.证实它的增强活性体现在转录水平;用原核增强子样序列3A的功能区3P3构建的表达载体,其表达的IFN-α2b型干扰素比原表达载体活性高3.7倍.结论 从大肠埃希菌C600株染色体基因组中筛选到一个原核增强子样序列3A,携带有原核增强子样序列的表达载体可提高干扰素基因的表达水平.
- 韩峰何建新廖小慧王艳吴淑华
- 关键词：原核增强子样序列
- 痘苗病毒增强子样序列的筛选及应用研究被引量：2
- 2007年
- 目的从痘苗病毒基因组中筛选原核增强子样序列,构建携带原核增强子样序列的表达载体,探讨其对干扰素基因表达的影响。方法采用氯霉素乙酰转移酶基因(cat)作为报告基因,从痘苗病毒基因组中筛选具有原核增强子样活性的序列,构建携带增强子样序列VV1的表达载体,表达干扰素基因和检测干扰素活性。结果从痘苗病毒天坛株DNA基因组中筛选出18个在大肠埃希菌中具有增强活性的序列,从中筛选到两个原核增强子样序列VV1和VV16,VV1正反向分别可使lacZ基因活性提高10.9倍和3.8倍,VV16正反向分别可使lacZ基因活性提高9.0倍和4.1倍;证实它们的增强活性体现在转录水平;用痘苗病毒增强子样序列VV1构建的表达载体,其表达的IFN-α2b型干扰素比原表达载体活性高2.6倍。结论从痘苗病毒天坛株DNA基因组中筛选到2个原核增强子样序列-携带有痘苗病毒增强子样序列的表达载体可提高干扰素基因的表达水平。
- 韩峰秘晓林曹茹王艳吴淑华
- 关键词：痘苗病毒原核增强子样序列
- 基于颜色判定的环介导逆转录等温扩增技术检测人甲型H1N1流感病毒基因被引量：25
- 2010年
- 建立了一种基于颜色判定的简单、快速和灵敏的检测方法,即环介导逆转录等温核酸扩增技术(RT-LAMP)应用于人甲型H1N1流感病毒基因检测。该技术使用对应于人甲型H1N1流感病毒HA序列中8个基因区段的6条特异引物,在等温条件下(65℃)进行核酸扩增反应1.5h,在扩增前加入染料HNB(羟基萘酚蓝)作为反应指示剂,以HNB的颜色变化做为结果判定标准并经琼脂糖凝胶电泳验证。文中利用这种技术对不同来源及亚型的流感病毒进行了特异性分析,对体外转录的人甲型H1N1流感病毒HA基因RNA的系列稀释物进行了灵敏度分析,成功检测美国CDC提供的人甲型H1N1流感病毒标准品,利用RT-LAMP和RT-PCR同时检测了30份人甲型H1N1和26份季节性流感咽拭子标本。结果显示RT-LAMP方法特异性高,灵敏度可达到60个拷贝RNA分子水平,对临床标本的检出率与常规RT-PCR法相当,利用650nm的比色分析通过标准曲线可以实现对样品的定量。因此,基于颜色判定的环介导逆转录等温扩增方法可用于人甲型H1N1流感病毒感染的快速筛选,具有在基层疾病预防控制中心流感监测网络实验室和哨点医院推广和应用的潜力。
- 聂凯王大燕秦萌高荣保王淼邹淑梅韩峰赵翔李希妍舒跃龙马学军
- 同时检测新甲型H1N1及人季节性H1N1和H3N2流感病毒的单管多重荧光定量PCR方法被引量：9
- 2010年
- 本研究设计的一种4重荧光定量RT-PCR检测方法,以A型流感病毒各亚型的血凝素基因(HA)为检测靶标,实现了同时检测新甲型H1N1流感病毒、人季节性H1N1流感病毒和人季节性H3N2流感病毒。本法使用人细胞RNA酶P基因作为内参,以判断标本来源和实施质量控制。利用不同来源和亚型的流感病毒验证了该方法的特异性;利用连续稀释的新甲型H1N1流感病毒HA全基因体外转录物进行灵敏度分析。结果表明该方法灵敏度高,可检测低至20个拷贝的RNA;特异性强,每对引物只检测出对应的病毒,无交叉反应;并且成功地验证性检验了34份新甲型H1N1流感病毒阳性临床标本和20份人季节性H1N1和H3N2流感病毒及人乙型(HB)流感病毒阳性临床标本。因此,该多重荧光定量RT-PCR法是一种可同时检测2009年新甲型流感病毒及季节性流感病毒的有效方法。
- 秦萌王大燕黄芳聂凯曲梅王淼韩峰赵翔成艳辉舒跃龙马学军
- 关键词：实时定量PCR
