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龙进学: 作品数：60 被引量：361H指数：13; 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>; 发文基金：国家科技支撑计划国家科技攻关计划江苏省属高校自然科学基础研究项目更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>

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猪细小病毒4型在试验猪的感染进程及在组织中的分布研究被引量：1: 2012年; 研究猪感染猪细小病毒4型(porcine parvovirus type 4,PPV4)后的症状、血清中病毒DNA拷贝数的变化以及病毒在猪体内的分布,并研究病毒对猪器官组织的嗜性。对试验猪接种PPV4阳性血清,观察PPV4感染猪后的临床症状以及脏器病理变化,利用已建立的PPV4 Taqman荧光定量PCR检测方法,定量检测人工感染试验猪血清和各脏器中PPV4 DNA拷贝数。PPV4感染猪呈现病毒血症,在8d后血清中病毒含量最高,之后逐渐降低。试验猪感染PPV4后前期主要是呼吸道症状,之后好转,无其他症状。试验猪主要的病理变化在于肺脏淤血以及全身淋巴结肿大。PPV4可以侵害试验猪多个器官,前期在肺脏以及扁桃体中PPV4 DNA含量较高,后期在肠道以及泌尿道含量较高。血清富集PPV4病毒电镜观察可见疑似PPV4病毒粒子。试验证明,PPV4具有快速感染性,PPV4对猪并无致死性,主要影响生产性能,对肺脏以及肠道器官组织的嗜性最强。; 黄律龙进学张宏彪袁世山徐大为刘婷婷; 关键词：荧光定量 PCR

我国猪场PCV2a和PCV2b共感染情况的调查与分析: 近年来我国猪场中猪圆环病毒2型的阳性率有所增加,给我国的养猪业带来了巨大的挑战.本研究主要是为了调查和分析我国猪2型圆环病毒两型间的共感染情况.我们采用差异PCR方法对2008年到2009年间采集的经普通PCR鉴定为PC...; 翟少伦龙进学韦祖樟张建武岳城禤雄标袁世山; 关键词：共感染同源重组; 文献传递

用8质粒病毒拯救系统产生冷适应减毒的重组A型人流感病毒的研究: 2008年; 目的利用流感病毒8质粒病毒拯救系统，产生冷适应减毒的重组A型人流感病毒，建立以冷适应流感病毒株为拯救骨架的反向遗传学技术平台。方法以冷适应、温度敏感、减毒的A／Ann Arbor／6／60（H2N2）流感病毒株作为拯救病毒的骨架，人工合成了该病毒株的6个内部基因片段，即PB2、PB1、PA、NP、M和NS，同时引入5个氨基酸突变作为标签。6个基因片段通过与改造后的转录载体pAD3000连接，构建6个基因的拯救载体，经测序获得序列准确的拯救质粒：pMDV-A-PB2、pMDV-A-PB1、pMDV-A-PA、pMDV-A-NP、pMDV-A-M、pMDV-A-NS。结果6质粒与PR8的表面基因HA和NA进行“6＋2”组合的病毒拯救，8个重组质粒共转染COS-1细胞，成功拯救出了具有血凝活性的冷适应减毒的重组A型人流感病毒，命名为rMDV-A。鸡胚尿囊液中重组病毒的血凝（HA）效价为1：2^9～1：2^10。结论构建的A／Ann Arbor／6／60的6个内部基因的病毒骨架拯救系统，为深入研究冷适应减毒人流感病毒的基因功能和新型疫苗研发提供了试验材料。; 杨鹏辉石辛甫颜艳罗德炎张钰邢丽龙进学刘秀梵王希良; 关键词：流感病毒反向遗传学

PCV2a与PCV2b鉴别诊断PCR方法的优化及应用被引量：6: 2010年; 猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)是严重危害养猪业的重要病原之一,根据基因组大小可分为2个基因型:PCV2a和PCV2b。为更好地掌握PCV2a和PCV2b在我国猪场的流行情况,本研究对先前的鉴别PCR诊断方法(涉及到引物、PCR体系及程序)进行优化,并应用优化的鉴别PCR方法对118份PCV2阳性样品进行检测,结果显示PCV2a占30.5%(36/118),PCV2b占37.3%(44/118),共感染占32.2%(38/118),与常规PCR检测结果符合率为100%,此外,对30份临床送检组织和血清样品也有很高的检出率。部分鉴别PCR扩增的目的产物进行测序及序列进化树分析,表明扩增序列为PCV2a与PCV2b的特征序列。经本研究优化后的鉴别PCR方法易操作、特异性强、敏感性好,可广泛用于临床样品中PCV2a和PCV2b的快速检测。; 翟少伦张建武韦祖樟袁世山岳城冉多良龙进学; 关键词：猪圆环病毒2型 PCR

中国部分地区猪细环病毒1型和2型的分子检测被引量：12: 2010年; 细环病毒(TTV)是近年来发现的一种新型人畜共患DNA病毒,广泛存在于包括人类和家畜在内的多种哺乳动物中。目前我国猪群中TTV的流行病学报道较少。为研究猪细环病毒(PTTV)在我国的流行情况,采用聚合酶链反应(PCR)对2009年我国9个省市部分发病猪场中的PTTV1和PTTV2进行检测。结果显示,191份病料中PTTV的总阳性率为77.0%(147/191),其中PTTV1的单一阳性率为68.6%(131/191),PTTV2的单一阳性率为53.9%(103/191),两基因型的共感染率为45.5%(87/191)。进一步分析发现,在不同猪场、不同年龄猪群、不同病料组织中,PTTV的感染情况均不相同。此外,对41份健康猪的血清进行检测,结果显示,PTTV总阳性率、PTTV1单一阳性率、PTTV2单一阳性率及两基因型的共感染率分别为43.9%(18/41)、36.6%(15/41)、24.4%(10/41)和12.2%(5/41)。结果提示,发病猪体内PTTV总阳性率、PTTV1单一阳性率、PTTV2单一阳性率及两基因型的共感染率均显著高于健康猪(P<0.01)。PTTV在临床上是否对猪致病或与其他病原有协同作用,需进一步研究。; 翟少伦龙进学岳城袁世山; 关键词：聚合酶链反应

中国猪群中TTV1和TTV2感染的检测与流行现状研究: 引言/目的:Torque teno virus（TTV）是近年来发现的一种新型人畜共患DNA病毒,广泛存在于人类、家畜、野生动物及一些伴侣动物体内,先前已有多个国家报道其流行情况,相关研究证明其与PCV2共感染可以促进仔...; 翟少伦龙进学岳城袁世山; 关键词：分子检测; 文献传递

选择天然维生素E: 2001年; 龙进学; 关键词：维生素E 饲料添加剂畜禽健康

鹅源新城疫病毒ZJI株基因组cDNA克隆的序列修饰被引量：2: 2005年; 将鹅源新城疫病毒ZJI株全基因组cDNA克隆通过酶切切下包含T7启动子区域和转录载体的片段,将其自身环化后获得约6.5kb的质粒。设计引物,利用基因定点突变技术,在此质粒上T7启动子与NDV Leader序列之间突变插入额外的3个G碱基,将此突变最终引入到原基因组cDNA克隆中。应用RT-PCR技术从尿囊液中扩增NDV基因组F/HN基因区域部分片段,利用限制性内切酶BsmB I将扩增片段连接,最终将原cDNA克隆中相应片段替换下。测序结果表明,原基因组cDNA克隆中特定位置碱基插入突变成功,F/HN基因区域碱基突变均得以纠正。以上cDNA克隆的修饰与替换为该毒株的反向遗传研究打下了基础。; 刘玉良胡顺林张艳梅吴艳涛刘秀梵Rmer-Oberdrfer AngelaWeits JuttaLange Martina黄勇龙进学; 关键词：鹅源新城疫病毒基因定点突变

传染性法氏囊病病毒的分子生物学快速鉴别诊断技术的研究: 首先,研究根据已发表的IBDV各致病型毒株的序列,在病毒结构蛋白VP2编码基因的高变区(VP2 variable domain,vVP2)两端外侧的保守序列内设计合成了2条寡核苷酸引物,对各种不同致病型的12株参考毒株进...; 龙进学; 关键词：NESTED-PCR 病毒分离型特异性引物 RT-PCR技术; 文献传递

神经氨酸酶茎部氨基酸缺失对H5N1亚型禽流感病毒生物学特性的影响被引量：19: 2006年; 近年来H5N1亚型禽流感病毒（AIV）神经氨酸酶（NA）茎部15—20个氨基酸的自发缺失时有报道，突变对于AIV生物学特性的影响还没有得到系统研究。应用反向遗传操作技术，拯救获得5株具有不同NA茎部长度的H5N1／PR8重组AIV。重组病毒的内部基因和血凝素（HA）基因来源相同，NA基因来源不同，并在NA茎部进行20个氨基酸的删除或添加突变。通过研究其生物学特性发现，5株重组病毒在SPF鸡胚中繁殖良好，其EID50、MDT和平均病毒滴度相似；NA茎部长短影响病毒的解凝能力，长茎病毒红细胞解脱能力比短茎病毒强；NA茎部15或20个氨基酸删除突变提高了重组病毒在MDCK细胞上的繁殖能力，短茎病毒释放出的病毒粒子数量是长茎病毒的10。100倍，释放时间提前6．10h，短茎病毒在MDCK细胞上形成的空斑也明显比长茎病毒的空斑大。实验结果揭示了AIVNA茎部氨基酸缺失突变的生物学意义，NA茎部15或20个氨基酸删除突变增强了AIV的细胞适应性，可能与现阶段H5N1亚型AIV宿主范围进一步扩大有关。利用反向遗传技术成功拯救了5株H5N1／PR8重组流感病毒，为流感病毒基因功能研究和重组疫苗研究建立了技术平台。通过对AIVNA茎部氨基酸的删除突变提高了病毒在MDCK细胞上的繁殖产量，为流感病毒细胞苗的生产提供了新的思路。; 王曲直龙进学胡顺林吴艳涛刘秀梵; 关键词：H5N1亚型禽流感病毒反向遗传操作技术

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