代丽娟
- 作品数：14 被引量：30H指数：3
- 供职机构：东北林业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”“十二五”国家科技计划农村领域更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 白桦开花抑制因子BpFLC与BpSVP蛋白互作的结构域筛选与互作验证
- 2015年
- 为深入研究白桦开花抑制因子FLC与SVP的相互作用的分子机理。从重组质粒pGBKT7-BpFLC、pGBKT7-BpSVP分别克隆出6个BpFLC截短体（BpFLC1～6）和6个BpSVP截短体（BpSVP1～6），分别编码MI、MIK、K、IKC、KC和C域。在酵母Y2HGold菌中，分别共转诱饵质粒pGBKT7-BpFLC1～6×pGADT7-BpSVP及pGBKT7-BpFLC×pGADT7-BpSVP1～6。酵母转化子Y2HGold[pGBKT7-BpFLC2～5×pGADT7-BpSVP]，可在选择性固体培养基TDO、QTO／A上生长，并在QDO／A／X上长出蓝色菌落，表明BpSVP能与截短体蛋白BpFLC2～5异源结合。此外酵母Y2HGold[pGBKT7-BpFLC×pGADT7-BpSVP2～5]也能同时激活报告基因AUR1-C、HIS3、ADE2、MEL1。进一步研究发现：Y2HGold[pGBKT7-BpFLC3×pGADT7-BpSVP3]存在相互作用，表明BpFLC的K域与BpSVP的K域能够异源结合，是介导BpFLC与BpVP蛋白互作的关键结构域。
- 臧丽娜郑唐春代丽娟刘彩霞曲冠证
- 关键词：白桦酵母双杂交
- 拟南芥CYCD3;1基因植物表达载体的构建及在烟草中的遗传转化分析被引量：3
- 2016年
- 为了分析植物D型细胞周期蛋白在细胞周期中的作用,采用PCR方法从拟南芥花序中克隆出At CYCD3;1基因的全长c DNA序列。该基因的开放读码框为1131 bp,预测编码376个氨基酸,蛋白质的分子量为42701.6 Da,蛋白质的等电点为4.89。构建植物表达载体p ROKII-At CYCD3;1,并利用农杆菌介导的叶盘法将外源基因导入野生型烟草中。通过PCR及q RT-PCR检测显示,At CYCD3;1成功插入烟草基因组并在转录水平表达。表型观察显示转基因株系与野生型株系相比主要表现为花冠宽度变大,花瓣和萼片长度变长,果实变大,茎干弯曲,叶片卷曲,根尖细胞变小。综上,拟南芥At CYCD3;1基因的过量表达影响了植物的生长发育。
- 代丽娟郑唐春刘彩霞刘轶由香玲曲冠证
- 关键词：周期蛋白烟草
- 小黑杨Poptr;CYCD1;1与拟南芥CYCD1;1、CYCD2;1、CYCD3;1基因在烟草中的遗传转化
- 细胞分裂是生物的基本特征之一，在植物生长发育的过程中，发挥着极其重要的作用，细胞周期和生长调控均离不开一类重要的细胞分裂调控因子——细胞周期蛋白(Cyclin)。D类细胞周期蛋白(CYCD)基因作为调控因子，对调节细胞周...
- 代丽娟
- 关键词：烟草生物学功能
- 烟草化学诱导表达系统的建立被引量：4
- 2016年
- 化学诱导表达系统对植物功能基因的研究及植物基因工程应用有重要意义。XVE是以雌激素为基础的用于诱导转基因植物中目的基因表达的一种系统,能够在可调控方式下诱导基因的表达。目前,以烟草为遗传转化材料进行XVE系统研究的详细报道还未见发表。本文以烟草作为研究对象,利用PCR技术从本实验保存的质粒pROKII-GFP中扩增出GFP基因。构建雌激素诱导型植物表达载体(p ER8-GFP)并利用农杆菌介导的叶盘法将外源基因导入野生型烟草中;经潮霉素抗性筛选出转化植株后,用PCR鉴定出阳性转化植株,将阳性转化植株利用不同浓度和不同时间的雌激素进行处理,并结合定量PCR和Night SHADE植物活体成像系统对转基因植株的表达水平进行检测。结果表明诱导p ER8-GFP载体在烟草中表达的最适雌激素浓度为25μmol·L^(-1),最适时间为48 h;同时在烟草胚轴与根尖细胞中检测到荧光信号,表明XVE化学诱导系统在烟草中也可以高效、严格的依赖雌激素的诱导来控制目的基因表达。本研究将为烟草相关的化学诱导表达研究提供技术支持与解决方案。
- 代丽娟郑唐春刘彩霞刘轶由香玲曲冠证
- 关键词：雌激素诱导基因表达烟草
- 拟南芥AtPI基因植物表达载体的构建及其在烟草中的遗传转化被引量：5
- 2016年
- 花是被子植物主要的繁殖器官,在繁育后代的过程中,发挥着极其重要的作用,PISTILLATA（PI）基因作为控制花器官发育的B类功能基因中的一员,在花器官发育中起到重要的作用。为探究PI基因在花瓣和雄蕊发育中的功能,本文以拟南芥（Arabidopsis thaliana）中的PI基因作为研究对象,利用PCR技术从拟南芥花序c DNA扩增出At PI基因,构建植物表达载体（p ROKⅡ-At PI）并进行烟草（Nicotiana tobacum）转化。转基因植株的PCR检测结果表明,At PI基因已经整合到了烟草基因组中。在T2代植株中,通过实时定量荧光PCR检测显示,At PI在m RNA水平也均有表达。过量表达PI的转基因烟草在花器官中存在明显表型,与野生型相比主要表现为转基因植株花冠变小,雄蕊缩短,果实畸形且子房基部比野生型长5～10 mm,上述结果表明At PI基因是特异性参与雄蕊和花瓣的发育并起着至关重要的作用。
- 刘彩霞郑唐春代丽娟刘轶曲冠证
- 关键词：拟南芥烟草雄蕊子房
- 白桦开花抑制因子BpFLC与BpSVP蛋白同源互作域筛选与分析
- 2015年
- 开花是植物由营养生长向生殖生长的转换点,该过程受内源基因与环境信号共同调控。FLC（Flowering locus C）和SVP（Short vegetative phase）是开花途径中关键的抑制开花因子。本文利用酵母双杂交技术深入研究白桦开花抑制因子FLC与SVP的自身聚合作用的分子机理。从重组质粒p GBKT7-BpFLC、p GBKT7-Bp SVP分别克隆出6个BpFLC截短体[BpFLC1（aa1～73）、BpFLC2（aa1～173）、BpFLC3（aa74～173）、BpFLC4（aa60～208）、BpFLC5（aa74～208）和BpFLC6（aa174～208）]和6个BpSVP截短体[BpSVP1（aa1～68）、Bp SVP2（aa1～172）、Bp SVP3（aa69～172）、BpSVP4（aa60～225）、BpSVP5（aa69～225）和Bp SVP6（aa173～225）],分别编码MADS型蛋白的MI、MIK、K、IKC、KC和C域。在酵母Y2HGold菌中,分别共转质粒pGBKT7-BpFLC1～6×pGADT7-BpFLC及p GBKT7-BpSVP×pGADT7-BpSVP1～6。酵母转化子Y2HGold[p GBKT7-BpFLC×p GADT7-BpFLC]、Y2HGold[pGBKT7-BpFLC2～5×pGADT7-BpFLC],可在选择性固体培养基TDO（SD/-Leu/-Trp/-His）、QTO/A（SD/-Leu/-Trp/-His/-Ade/Ab A）上生长,并在QDO/A/X（SD/-Leu/-Trp/-His/-Ade/AbA/X-α-gal）上长出蓝色菌落,表明BpFLC能与自身及截短体蛋白BpFLC2～5同源结合。此外酵母Y2HGold[pGBKT7-BpSVP×pGADT7-Bp SVP]、Y2HGold[pGBKT7-Bp SVP×p GADT7-BpSVP2～5]也能同时激活报告基因AUR1-C、HIS3、ADE2、MEL1,说明BpSVP能与自身及截短体蛋白BpSVP2～5同源结合。对保守区的序列结构进一步分析发现：BpFLC与BpSVP的K域是它们能够同源结合,介导BpFLC与BpSVP自身形成同源二聚体的关键。
- 郑唐春臧丽娜代丽娟杨传平曲冠证
- 关键词：白桦酵母双杂交
- 拟南芥AtPAP1基因植物表达载体构建及在烟草中遗传转化分析被引量：11
- 2017年
- 为探究花青素调控基因AtPAP1的生物学功能,采用PCR方法从拟南芥花序中克隆出拟南芥MYB家族AtPAP1基因。构建植物表达载体pROKⅡ-AtPAP1,并通过农杆菌介导的叶盘法将外源基因转入野生型烟草。检测结果表明,AtPAP1已成功整合入烟草基因组中,并在mRNA水平表达。形态观察显示AtPAP1基因异源过量表达能显著增强转基因烟草植株花青素的积累,致使转基因烟草的叶片、茎段和花器官等颜色发生变化,呈现出不同程度的紫红色。
- 刘轶郑唐春代丽娟刘彩霞王庆娜曲冠证
- 关键词：拟南芥花青素烟草
- 小黑杨Poptr;CYCD1;1与拟南芥CYCD1;1、CYCD2;1、CTCD3;1基因在烟草中的遣传转化
- 细胞分裂是生物的基本特征之一,在植物生长发育的过程中,发挥着极其重要的作用,细胞周期和生长调控均离不开一类重要的细胞分裂调控因子一细胞周期蛋白(Cyclin)。 D类细胞周期蛋白(CYCD)基因作为调控因子,对调节细胞周...
- 代丽娟
- 关键词：小黑杨RNAI烟草
- 文献传递
- 小黑杨PsnAP1-1及PsnAP1-2基因的克隆及原核表达分析被引量：3
- 2014年
- 植物由营养生长向生殖生长的过程中,APETALA1(AP1)基因在其中起重要作用。我们采用RT-PCR方法克隆了2个杨树AP1同源基因全长cDNA,暂时命名为PsnAP1-1(GenBank No.KC866354)和PsnAP1-2(GenBank No.KC866355)。PsnAP1-1编码241个氨基酸,开放阅读框长度为726 bp,蛋白质分子量为28.1 kD,等电点为8.19;PsnAP1-2编码249个氨基酸,开放阅读框长度为750 bp,蛋白质分子量为28.7 kD,等电点为9.07。同源性分析表明,PsnAP1-1的核苷酸序列与拟南芥AP1同源基因的一致性为71%,而PsnAP1-2的同源性为67%。半定量RT-PCR分析表明,杨树PsnAP1-1和PsnAP1-2基因在根、茎、叶中均不表达,仅仅在花芽组织中表达。分别构建了原核表达质粒pET-PsnAP1-1和pET-PsnAP1-2,并转化大肠杆菌BL21,以IPTG诱导该融合蛋白体外表达,结合SDS-PAGE分析,证实这2个基因均表达了约35 kD的蛋白,该结果为深入研究AP1与其他MADS-box蛋白的互作机制及花分生组织的分子调控奠定了基础。
- 李爽郑唐春代丽娟臧丽娜曲冠证
- 关键词：原核表达
- 拟南芥CYCD2;1基因植物表达载体的构建及在烟草中的遗传转化分析被引量：2
- 2016年
- 细胞分裂是生物的基本特征之一,在植物生长发育的过程中,发挥着极其重要的作用,细胞周期蛋白CYCD2;1基因作为一个调控因子,对调节细胞周期具有重要作用。本文以拟南芥细胞周期蛋白(At CYCD2;1基因)作为研究对象,利用PCR技术从拟南芥花序c DNA扩增出At CYCD2;1基因,构建植物表达载体(pROKIIAt CYCD2;1)并利用农杆菌介导的叶盘法转化野生型烟草。转基因植株的PCR检测结果表明,At CYCD2;1基因已经整合到了烟草基因组中。在T2代植株中,通过实时定量荧光PCR检测显示,At CYCD2;1在mRNA水平也均有表达。过量表达CYCD2;1的转基因烟草在花器官中存在明显表型,与野生型相比主要表现为转基因植株花冠宽度变大,花瓣和萼片长度变长,果实变大,上述结果表明At CYCD2;1基因影响花的发育。
- 代丽娟郑唐春刘彩霞李开隆曲冠证
- 关键词：周期蛋白烟草
