刘建生
- 作品数：11 被引量：17H指数：2
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- 成骨诱导后的脐血间充质干细胞与β-磷酸三钙复合植骨材料对兔颅骨缺损的修复作用被引量：6
- 2011年
- 目的探讨成骨诱导后的人脐血间充质干细胞(UCB-MSCs)与β-磷酸三钙(TCP)构成的人工植骨材料修复兔颅骨缺损的作用。方法在无菌条件下用密度梯度离心和贴壁培养法分离培养人UCB-MSCs;取传3代细胞应用条件培养基进行成骨诱导2周后,绘制细胞生长曲线并检测碱性磷酸酶(AKP)、骨钙素(OCN)和钙离子的含量;成骨诱导后UCB-MSCs与β-TCP复合培养后形成人工植骨材料,用扫描电镜观察成骨诱导后的UCB-MSCs在β-TCP表面的生长状况;按人工植骨材料的形状制作兔颅骨全层缺损模型,术后4周行颅骨X线摄片,分析人工材料对骨缺损的修复作用。结果采用Percoll(1.073 g/mL)密度梯度离心和贴壁培养得到的UCB-MSCs大小较为均匀、梭形或星形的成纤维细胞样细胞。成骨诱导前后细胞的生长曲线测定无明显变化;UCB-MSCs内AKP、培养基中的OCN含量和细胞内钙离子的含量与对照组相比均明显增高(P<0.01);成骨诱导的细胞在β-TCP表面生长良好,在细胞周围有白色的钙盐沉积。人工植骨材料植入骨缺损4周后,发现复合材料与颅骨缺损中间大部分被高密度影所充填。结论成骨诱导后的UCB-MSCs呈现成骨细胞特性,在β-TCP表面生长状态良好;与β-TCP构成人工植骨材料具有促进骨缺损修复的作用。
- 郑德宇刘建生杨依勇秦书俭包翠芬姚素艳
- 关键词：成骨诱导脐血间充质干细胞Β-磷酸三钙骨缺损修复
- HLA-A2小干扰RNA的设计及沉默效果检测被引量：1
- 2014年
- 背景:人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)是人的主要组织相容性复合物,在移植排斥反应中起关键作用。降低HLA的表达,可以延长移植物的存活时间。目的:设计HLA-A2小干扰RNA,检测其对HLA-A2表达沉默的作用。方法:设计4种HLA-A2 siRNA靶点序列构建其慢病毒表达体系,体外感染HLA-A过表达的293T细胞,观察4种靶点的敲减效率并筛选出有效靶点序列。体外培养人胚肺成纤维细胞,并用携带目的干扰序列的慢病毒感染人胚肺成纤维细胞,荧光显微镜下观察感染效率,应用Western blot检测在人胚肺成纤维细胞中对HLA-A2表达沉默的作用。结果与结论:根据Genbank中HLA-A2的mRNA序列,设计合成了3个小干扰RNA,在体外能有效的沉默HLA-A2在293细胞中的表达,将基因序列亚克隆入干扰载体后感染人胚肺成纤维细胞,也能有效的沉默HLA-A2的表达,效率达80%左右。
- 刘建生赵刚裴丹郑德宇
- 关键词：HLA抗原基因沉默成纤维细胞人胚肺成纤维细胞
- 骨髓基质细胞联合葛根素对脑缺血大鼠的治疗作用
- 本研究用骨髓基质细胞(BMSCs)联合葛根素治疗脑缺血大鼠,探讨其促进血管新生的协同作用,及葛根素在体内对BMSCs的促进作用和可能机制。制备局灶性脑缺血(MCAO)模型,分为模型组(不予治疗)、BMSCs组、葛根素组及...
- 李文慧席焕久刘建生王盼刘芳芳
- 深低温冻存羟基磷灰石/骨髓间充质干细胞修复兔桡骨缺损被引量：1
- 2013年
- 背景:以往研究表明羟基磷灰石复合骨髓间充质干细胞具有良好的骨缺损修复效果,但这种复合材料在冻存后是否具有骨缺损修复效果还不清楚。目的:观察深低温冻存羟基磷灰石/骨髓间充质干细胞复合修复骨缺损的效果。方法:制备27只日本大耳白兔桡骨10mm缺损模型,随机分为冻存复合材料组、新鲜复合材料组与羟基磷灰石组,3组分别于骨缺损处植入-80℃保存3个月的羟基磷灰石/同种异体骨髓间充质干细胞复合物、新鲜制备的羟基磷灰石/同种异体骨髓间充质干细胞复合物及单纯羟基磷灰石,植入后8,12周行大体观察、X射线观察及苏木精-伊红染色等组织学观察,并于12周行生物力学检测。结果与结论:术后12周,冻存复合材料组、新鲜复合材料组骨缺损大部分愈合,有成熟骨小梁通过,有的可见髓腔通畅,塑形较好;羟基磷灰石组骨痂生成少,骨缺损部分愈合,塑形欠佳,新骨生成少于冻存复合材料组、新鲜复合材料组(P<0.05)。冻存复合材料组、新鲜复合材料组最大载荷明显大于羟基磷灰石组(P<0.05)。表明低温冻存羟基磷灰石/骨髓间充质干细胞复合植骨材料的骨缺损修复能力与新鲜制作的复合材料几乎一致,未因冻存受到影响。
- 邢志远张继波孔令菊刘建生郑德宇
- 关键词：骨组织构建羟基磷灰石低温冻存桡骨缺损
- 胰岛素产生细胞的诱导分化及微囊对其分泌能力的影响被引量：2
- 2013年
- 目的探讨微囊对胰岛素产生细胞(insulin-producing cells,IPCs)分泌能力的影响。方法分离培养小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)并传代纯化,应用大鼠胰腺提取物(rat pancreatic extract,RPE)对其进行诱导分化,诱导后的细胞随机分为微囊化组和未微囊化组。分别在1、2、3、4、5周等不同时间点,通过葡萄糖刺激实验,检测细胞的胰岛素与C肽释放情况。结果葡萄糖刺激实验结果显示,1周时微囊化IPCs与未微囊化的IPCs均能释放胰岛素,其量没有显著的差别;培养2周后未微囊化的IPCs胰岛素和C肽释放量开始下降,而微囊化IPCs胰岛素与C肽释放量在培养4周后才开始逐渐下降。结论微囊可延长IPCs的作用时间,有利于IPCs作用的发挥。
- 王雅光田鹤刘建生穆长征
- 关键词：微囊胰岛素产生细胞骨髓间充质干细胞诱导分化
- 左旋多巴治疗前后帕金森大鼠脑内γ-氨基丁酸A受体的变化被引量：4
- 2015年
- 目的探讨帕金森病治疗前后脑内皮质、黑质、纹状体部位γ-氨基丁酸A受体(gamma aminobutyric acid A receptor,GABAAR)的分布变化规律。方法首先制备PD大鼠模型,经检测成模后,随机分为对照组和治疗组,分别给予生理盐水和左旋多巴甲酯+苄丝肼治疗4周,治疗后经行为学检测,选择成功的治疗后的PD大鼠,于治疗后4、8、12周分别留取大鼠脑皮质、黑质和纹状体部位的标本,进行免疫组化检测,对比PD大鼠治疗前后脑内上述部位GABAAR的分布、表达情况变化。结果治疗后4、8、12周的免疫组化检测结果经统计学分析,脑内黑质和皮质部位的GABAAR阳性表达的细胞治疗后比治疗前减少。而纹状体部位的GABA_AR阳性表达的细胞数量无明显变化。结论 (1)左旋多巴甲酯+苄丝肼治疗PD大鼠,可以使症状改善。(2)PD大鼠治疗前后脑内不同部位GABAAR的变化不同。
- 王晓巍崔宏福姚素艳刘建生郑德宇
- 关键词：Γ-氨基丁酸Γ-氨基丁酸A受体
- 老年帕金森病大鼠模型皮质中γ-氨基丁酸A受体β亚基含量的变化被引量：1
- 2014年
- 目的探讨在帕金森病(PD)状态下皮质中γ-氨基丁酸(GABA)A受体各个β亚基表达水平的变化。方法分离6-羟基多巴(6-OHDA)制作成功的PD动物模型的皮质,应用高效液相(HPLC)法测定皮质中GABA的含量,应用qRT-PCR的方法检测GABA A受体中β1、β2、β3亚基的mRNA表达水平,应用Western印迹的方法检测GABA A受体中β1、β2、β3亚基的蛋白质表达水平。结果 PD模型大鼠注射侧的皮质中GABA的浓度较对照侧及正常对照的双侧均有不同程度的升高(P<0.05)。皮质中,β1、β2、β3亚基的mRNA表达均有所降低,β2和β3亚基降低更明显(P<0.01);各个亚基的蛋白水平的变化趋势与mRNA的变化一致。结论 GABA A受体的β1、β2、β3亚基在皮质中均有表达,且与GABA在PD动物脑组织中含量相适应,β1、β2、β3亚基均有受体下调的情况。
- 姚素艳刘建生金涛郑德宇
- 关键词：帕金森病Γ-氨基丁酸受体Β亚基
- 重组大鼠谷氨酸脱羧酶载体的构建和功能分析(英文)
- 2011年
- 目的谷氨酸脱羧酶2 (glutamic acid decarboxylase 2,GAD65) 是γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyric acid, GABA)的合成酶。本研究拟构建重组大鼠GAD65基因的慢病毒载体(recombinant lentivirus-rGAD65,rLV-rGAD65),并在体内外分析其功能。方法用RT-PCR法克隆大鼠GAD65基因的cDNA 并亚克隆至慢病毒载体上,形成重组慢病毒质粒(rLV-GFP-rGAD65)。在包装质粒的帮助下,获得重组慢病毒颗粒(rLV-rGAD65)并检测其滴度。用rLV-rGAD65感染原代培养的大鼠肺成纤维细胞,并用免疫细胞化学和蛋白印迹法检测rGAD65在成纤维细胞中的表达,用高效液相法(high-performance liquid chromatograph, HPLC)检测培养上清中GABA的含量。在体内, rLV-rGAD65 定点注射到Sprague-Dawley大鼠的丘脑底核(subthalamic nucleus,STN)。用免疫组织化学和蛋白印迹法检测GAD65基因在STN中的表达水平,HPLC检测黑质网状部(substantia nigra pars reticulata,SNr) 中GABA的含量。结果 rGAD65 的序列与GenBank几乎一致,没有碱基的突变。rLV-rGAD65的滴度达6.8 × 108/mL。在体外,rLV-rGAD65对成纤维细胞的感染效率可达80%,而对照组中几乎没有GAD65蛋白的表达。在上清液中,GABA的含量达到了(48.14 ± 9.35) nmol/L。在体内, rGAD65与绿色荧光蛋白共表达于注射侧的STN区,GAD65蛋白的含量明显高于对照组和注射的对侧。GABA在SNr 中的含量也从(5.95 ± 1.09) 升高到(12.44 ± 3.79) nmol/g。结论重组GAD65载体构建成功。在体外,重组慢病毒颗粒可以感染原代培养的成纤维细胞,并能催化GABA的合成。在体内,重组慢病毒颗粒可以感染STN的神经元并能使SNr中GABA的含量增加。
- 刘建生王倩张继波孔令菊姚素艳郑德宇徐群渊
- 关键词：慢病毒载体基因克隆帕金森病
- 苍白球内侧部注射siRNA基因沉默GAD治疗PD大鼠的实验研究
- 目的：应用立体定位技术将谷氨酸脱羧酶(glutamic acid decarboxylase 2,GAD 65)高效特异的siRNA 注射到帕金森病(parkinson＇s disease,PD)大鼠苍白球内侧部(int...
- 郑德宇孔令菊刘建生
- 关键词：苍白球内侧部基因治疗谷氨酸脱羧酶RNA干扰
- 去透明带方法的选择对小鼠早期胚胎体外培养的影响
- 2012年
- 目的探讨去透明带方法的选择对小鼠早期胚胎体外培养的影响。方法用孕马血清促性腺激素(PMSG)与人绒毛促性腺激素(hCG)对小鼠进行超数排卵后,取单细胞阶段受精卵,将其分为酸性台式液去透明带组(台式液组)、0.5%链霉蛋白酶去透明带组(链霉蛋白酶组)以及未去透明带组。体外培养,分别观察三组单细胞受精卵分裂为2-细胞受精卵的卵裂率。结果台式液组、链霉蛋白酶组与未去透明带组的第一次卵裂率分别为65.1%、66.7%、66.1%,三组之间比较差异无统计学意义(0.950>P>0.900)。结论在体外培养条件下,用酸性台式液去透明带与0.5%链霉蛋白酶去透明带后受精卵均能进行正常分裂,此两种处理方法对受精卵早期发育均没有影响。
- 高源秦书俭郑德宇刘建生马刚
- 关键词：透明带小鼠早期胚胎卵裂率
