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孟国良

作品数：13 被引量：180H指数：8
供职机构：北京大学生命科学学院更多>>
发文基金：国家自然科学基金更多>>
相关领域：生物学更多>>

合作作者

文献类型

  • 10篇期刊文章
  • 2篇学位论文

领域

  • 12篇生物学

主题

  • 7篇胚胎
  • 6篇鼠胚
  • 6篇鼠胚胎
  • 6篇胚胎干细胞
  • 6篇小鼠胚胎
  • 6篇干细胞
  • 5篇小鼠胚胎干细...
  • 5篇ES细胞
  • 4篇小鼠
  • 4篇ES细胞系
  • 3篇蛋白
  • 3篇荧光
  • 3篇荧光蛋白
  • 3篇胚胎干细胞系
  • 3篇小鼠ES细胞
  • 3篇小鼠胚胎干细...
  • 3篇绿色荧光
  • 3篇绿色荧光蛋白
  • 3篇分化
  • 3篇干细胞系

机构

  • 12篇北京大学

作者

  • 12篇孟国良
  • 9篇尚克刚
  • 6篇薛友纺
  • 4篇汤富酬
  • 3篇滕路
  • 1篇童英
  • 1篇丁明孝
  • 1篇邹冀中
  • 1篇杨红波
  • 1篇赵文宁
  • 1篇李成建
  • 1篇胡新立
  • 1篇张博

传媒

  • 5篇Journa...
  • 2篇生物工程学报
  • 1篇生物技术
  • 1篇北京大学学报...
  • 1篇遗传

年份

  • 3篇2003
  • 4篇2002
  • 2篇2001
  • 1篇1997
  • 1篇1994
  • 1篇1993
共 13 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
高效建立129/ter、C57BL/6J小鼠胚胎干细胞系的方法学探讨被引量：21
2002年
A new method for establishing ES cell lines from 129/ter、C57BL/6J mice was set up which was characterized by the murine embryonic fibroblast cell(MEF) feeder, the medium of rat heart cell-conditioned medium(RH-CM)for ES cells, and the consecutive digestion by the digestion liquid containing 1% serum. Every group of improved experiments was done with a control of routine method. The results showed that, compared with routine method, the improved way increased the ratio of ES cell lines of 129/ter mice from 11.8% to 33.3%, and of C57BL/6J from 3.7% to 13.3%. The difference is distinct. The passage culture of ES cells showed that, compared with medium added LIF, RH-CM not only inhibited the differentiation of murine ES cells, maintained its dipoild karyotype, but also promote its adherence growth. This kind of culture condition not only maintained the ES cells in an undifferentiated state and their normal dipoild karyotype, but also a series of other characteristics of totipotent embryonic stem cells during extended culture period.
孟国良汤富酬尚克刚薛友纺
关键词：C57BL/6J小鼠胚胎干细胞系建系
5个品系小鼠胚胎干细胞系建立的方法学比较(英文)被引量：17
2003年
以 70 %的大鼠心脏细胞条件培养基 (RH CM)为培养液 ,以小鼠胚胎成纤维细胞 (PMEF)为饲养层 ,采用添加 1%鸡血清的消化液和“连续离散法”作为小鼠ES细胞建系的改进方法 ,比较了 5个品系小鼠ES细胞系建立的特点。与常规方法相比 ,3个近交系小鼠 12 9 ter、C5 7BL 6J、BALB c的ES细胞建系率分别由 11 8%、3 7%和 2 9%提高到 33 3%、13 3%和 19 4 % ,差异十分显著 ;直接采用改进的方法建立KM和ICR小鼠ES细胞系 ,建系率分别达 12 %和 4 2 1%。讨论了ICM增殖的时间 ,即离散时机对ES集落形成及建系率的影响 ,结果显示 :12 9 ter、C5 7BL 6J、BALB c、KM和ICR小鼠品系ICM适宜的离散时机分别为增殖 4～ 6d、3～ 3 5d、4d、4～ 5d和 4～ 5d ;同时 ,讨论了不同ES细胞建系所需最适宜的消化液浓度 ,其中BALB c小鼠的ES细胞对高浓度的消化液十分敏感 ,0 0 5 %Trypsin 0 0 0 8%EDTA是其比较理想的离散浓度。设计了两种离散方法 ,即“一次离散法”和“连续离散法” ,用来离散增殖的ICM和ICM离散后出现的ES集落 ,结果表明 :后者在建系过程中的作用明显优于前者。RH CM与添加LIF的常规ES细胞培养基相比 ,不但具有显著抑制小鼠ES细胞分化、维持其二倍体核型的作用 ,而且明显促进ES细胞的贴壁生长。
孟国良汤富酬尚克刚薛友纺
关键词：小鼠品系ES细胞系条件培养基
大鼠心脏细胞条件培养基对小鼠ES细胞特性的维持被引量：21
2001年
以C1 9- 2和MESPU - 1 3为供试细胞 ,用克隆测试、传代培养等方法对 1 7种细胞的条件培养基进行了筛选 ,结果表明 ,大鼠心脏细胞的条件培养基 (RH -CM)具有显著抑制小鼠ES细胞分化、维持其二倍体核型、促进ES细胞贴壁生长的作用。经RH -CM培养 1 0代和 2 0代的小鼠ES细胞在体内外分化能力上仍保留了原ES细胞的多方向分化潜能和特征 ;RH -CM也可作为小鼠ES细胞培养基的添加物 ,用含 70 %RH -CM的ES细胞培养基和小鼠胚胎原代成纤维细胞饲养层 (PMEF)培养ES细胞 ,可长期有效地维持其未分化状态和二倍体核型。RT
孟国良滕路邹冀中薛友纺尚克刚
关键词：ES细胞系LIF嵌合鼠RT-PCR未分化
BALB/c小鼠胚胎干细胞系建立的方法学探讨被引量：28
2002年
以小鼠胚胎成纤维细胞 (ME)为饲养层 ,以大鼠心脏细胞条件培养基 (RH CM)为ES细胞培养基 ,全面、详尽地对BALB c小鼠ES细胞的建系和培养方法进行了探讨 ,成功地建立了一套建立和培养BALB c小鼠ES细胞系的新方法。这一培养条件不但有效地维持了ES细胞的未分化状态和正常二倍体核型 ,而且维持了其作为多能性胚胎干细胞的一系列特征 ;实验设计了两种离散方法和两种浓度的消化液 ,用来离散增殖的ICM和ICM离散后出现的ES集落。两种离散方法即“一次离散法” ,和“多次离散法” ,两种浓度的消化液即 0 .2 5 %Trypsin 0 .0 4 %EDTA和0 .0 5 %Trypsin 0 .0 0 8%EDTA ;同时对ICM离散时机、RH CM在BALB c小鼠ES细胞建系和培养中作用进行了探讨。结果表明 :在低浓度消化液作用下 ,采用“多次离散法”离散增殖 4天的ICM和ES集落的方法建立BALB c小鼠的ES细胞系是理想的 ;从细胞形态、集落形态、增殖生长能力、核型检测、碱性磷酸酶测定以及体内外分化能力表明 ,所建立的 9个BALB c小鼠ES细胞系符合小鼠胚胎干细胞的一系列特征。
孟国良滕路薛友纺尚克刚
关键词：BALB/C小鼠胚胎干细胞内细胞团ICM
大鼠心肌条件培养基维持小鼠ES细胞特性的研究
孟国良
人胚胎干细胞建系的研究现状与存在的问题被引量：8
2002年
人胚胎干细胞系的建立 ,对人类胚胎发生和人类发育生物学研究、人类新基因的发现和功能研究以及基因治疗、细胞和组织的移植治疗等领域的突破性进展具有重大意义 ;回顾了人胚胎干细胞建系研究的历程 ,就建系的几种方案、路线、意义和可行性进行了探讨 ;详细系统地说明了迄今为止建立人胚胎干细胞系所需要的饲养层类型、培养基组成、添加细胞因子种类及其作用 ;分析了建立和维持人胚胎干细胞系所需消化酶的种类及其作用以及目前常用的几种传代方法 ;从若干方面总结了人胚胎干细胞系的鉴定方法 ,并对建立和维持人胚胎干细胞系中存在的若干问题进行了剖析 。
孟国良尚克刚丁明孝
关键词：人胚胎干细胞人胚胎生殖细胞多能性端粒酶
COS-7细胞中小发卡RNA介导的RNA干涉被引量：5
2003年
利用U6启动子转录小发卡RNA介导的RNA干涉是最近发展起来的在哺乳动物细胞中特异性抑制指定基因表达的新技术 ,已有实验证明它在小鼠畸胎瘤P19等细胞系中具有强烈的抑制基因表达的作用。本文对COS 7细胞系中U6启动子转录GFP基因的小发卡RNA介导的RNA干涉现象进行了研究 ,结果表明 :U6启动子转录的小发卡RNA具有RNA干涉作用 ,即可以在COS 7细胞中特异性地抑制含有对应序列的基因GFP的表达 ,这一结果为今后在COS 7细胞系中利用RNA干涉技术研究目的基因的功能奠定了基础。
汤富酬杨红波孟国良李成建尚克刚张博薛友纺
关键词：RNA干涉COS-7绿色荧光蛋白
小鼠胚胎原代细胞制作方法的改进被引量：7
1997年
室温下采用短时重复消化及双因子终止等步骤制作小鼠胚胎原代细胞．结果表明：该法制作简单可靠，细胞收获量大、接种成活率高、贴壁生长形态好。
孟国良尚克刚
关键词：细胞培养胚胎原代细胞制作方法
3个不同品系小鼠ES细胞的绿色荧光蛋白标记(英文)被引量：2
2003年
用电穿孔法将线性化的质粒pEGFP N3分别导入来自 12 9/ter、C5 7BL/ 6J和BALB/c 3个品系的小鼠胚胎干细胞MESPU 13、MESPU 35和MESPU 6 2中 ,经G4 18筛选、荧光显微镜镜检、阳性克隆扩增、流式细胞仪分选、再扩增以及核型分析等过程 ,分别得到核型大于 85 %的被EGFP稳定标记的细胞株 5个 (12 9/ter 2个、C5 7BL/ 6J 1个、BALB/c 2个 ) ,分别命名为MESPU 13/G1和MESPU 13/G2、MESPU 35 /G1、MESPU 6 2 /G1和MESPU 6 2 /G2。从不同品系中各选一个增殖生长快、形态典型的标记细胞株 ,进行碱性磷酸酶染色、oct4基因产物的表达检测、类胚形成和体内分化鉴定 ,结果表明所得到的核型正常的、稳定标记的ES细胞系具有原ES细胞的典型特征。
赵文宁孟国良薛友纺
关键词：小鼠胚胎干细胞绿色荧光蛋白电穿孔体内分化
小鼠胚胎干细胞(ES细胞)建系和维持过程中的问题及对策被引量：39
2001年
总结了十多年来我们从事ES细胞建系和培养工作的经验和教训 ,提出了研究工作中存在的问题以及解决这些问题的方法和对策 ,并对一些常规性的操作步骤进行了改进。同时 ,对某些尚不明确的问题进行了讨论 ,提出了我们的看法和建议。研究工作表明 ,我们采取的对策和方法是可行。
孟国良汤富酬滕路尚克刚
关键词：ES细胞内细胞团建系
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