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C-myc通过调控BubR1影响食管鳞癌细胞对紫杉醇的敏感性被引量：2: 2013年; 探讨C-Myc与有丝分裂期检查点蛋白BubR1的表达关系和对紫杉醇药物作用的可能影响。用免疫组化方法检测23例食管鳞癌组织标本中C-Myc和BubR1的表达水平,并通过免疫印迹的方法比较3株食管鳞癌细胞株ECA-109,KYSE150和KYSE180中C-Myc和BubR1的表达高低,分析相关性;将人BUB1b基因启动子上游约2000bp片段插入pSEAP2分泌型碱性磷酸酶报告质粒中构建为pSEAP2-BubR1-P2000,分别转染至3株鳞癌细胞内,检测启动子激活效果;在ECA-109细胞内过表达C-Myc后再转染pSEAP2-BubR1-P2000后,检测启动子的激活效果;免疫印迹方法检测C-Myc抑制剂10058-F4对BubR1蛋白表达的影响;通过MTT检测10058-F4干扰C-Myc后ECA-109细胞在梯度紫杉醇浓度下的生存率变化;最后通过DAPI染色观察单用C-Myc抑制剂,单用低浓度紫杉醇(100nM)或联用10058-F4和紫杉醇组的凋亡比例。结果发现在临床食管鳞癌标本和食管鳞癌细胞株中C-Myc和BubR1的表达有相关一致性;C-Myc高表达的细胞株中BubR1启动子活性的激活程度更强,并且过表达C-Myc后能进一步上调启动子活性;C-Myc特异性抑制剂10058-F4可以有效下调BubR1表达,并减低细胞在梯度紫杉醇作用下的细胞生存率。DAPI染色结果显示联用10058-F4和低浓度紫杉醇能明显增加细胞处于有丝分裂期的比率。在食管鳞癌细胞中C-Myc能上调有丝分裂期检查点蛋白BuR1的水平,并与食管癌对紫杉醇的敏感性相关,C-Myc可能通过上调BubR1表达而减低食管鳞癌对紫杉醇的反应。; 胡敏宋培培湛晓琴吕自兰陈楚施琼翁亚光; 关键词：C-MYC 紫杉醇

骨形态发生蛋白9对食管鳞状细胞癌细胞的抑制作用: 2013年; 目的探讨骨形态发生蛋白9（Bone morphogenetic proteins 9,BMP 9）对食管鳞状细胞癌细胞增殖、克隆、迁移、侵袭及细胞周期的影响。方法用AdGFP和AdBMP 9分别感染3株食管鳞状细胞癌细胞株ECA109、KYSE150和KYSE180,并设不感染病毒的3种细胞作为对照,采用RT-PCR法检测AdBMP 9感染的3株细胞中BMP 9基因mRNA的转录水平,MTT法检测病毒感染细胞0～96h各组细胞的增殖活力,平板克隆法检测各组细胞的克隆形成能力,划痕试验检测各组细胞的迁移能力,Transwell小室试验检测各组细胞的侵袭能力,并对3组ECA109细胞进行细胞周期的检测。结果 AdBMP 9感染的3株细胞中BMP 9基因mRNA的转录水平均明显提高。与AdGFP感染和未感染病毒的细胞相比,3种细胞在过表达BMP 9后,增殖活力明显降低（P〈0.05）;细胞克隆形成能力均下降（下降率达70%以上）,且克隆细胞团明显变小;细胞迁移和侵袭能力均下降;AdBMP 9感染的ECA109细胞处于G1期的细胞比例明显上升,S期比例明显下降（P〈0.05）。结论 BMP 9可明显抑制食管鳞癌细胞的增殖、克隆、迁移和侵袭能力,并将细胞周期阻滞于G1期。; 胡敏宋培培湛晓琴吕自兰章帆翁亚光; 关键词：食管鳞状细胞癌

下调CENP-E对乳腺癌MCF-7细胞的影响: 2012年; 目的:探讨有丝分裂检查点蛋白着丝粒蛋白-E(CENP-E)基因在肿瘤发生发展中的作用。方法:利用shRNA下调CENP-E基因的表达,分别用巢式PCR和Western blot检测CENP-E mRNA和蛋白的表达;MTT检测CENP-E下调后MCF-7细胞的增殖变化;流式细胞术检测CENP-E下调后对MCF-7细胞凋亡的影响;Transwell试验检测MCF-7细胞的迁移和侵袭能力变化;间接免疫荧光检测细胞内CENP-E蛋白和有丝分裂情况。结果:shRNA能有效抑制CENP-E mRNA和蛋白的表达。MTT结果显示CENP-E下调后MCF-7细胞的增殖能力减弱(P<0.05);流式细胞术显示下调CENP-E后能促进MCF-7细胞的凋亡;间接荧光结果显示CENP-E干扰后MCF-7细胞内CENP-E蛋白减少并伴有核分裂异常;Transwell试验显示CENP-E干扰组细胞的迁移和侵袭能力增强(P<0.05)。结论:下调部分CENP-E的表达能抑制MCF-7细胞的增殖,促进MCF-7细胞的凋亡,增强MCF-7细胞的迁移和侵袭能力。; 湛晓琴胡敏宋培培章帆刘晨施琼翁亚光; 关键词：非整倍体 CENP-E 肿瘤

癌基因c-myc对食管癌BubR1的调控: 2013年; 目的探讨癌基因c-myc对食管癌有丝分裂检查点效应蛋白BubR1的调控作用。方法将Bub1b基因启动子亚克隆至载体pSEAP2-Basic中,构建重组质粒pSEAP2-Bub1b-P2000,在Lipofectamine 2000的介导下,分别转染过表达c-myc的HEK-293细胞(经Ad-c-myc感染)和ECA-109细胞;转染6 h后,经c-myc抑制剂10058-F4作用ECA-109细胞。SEAP化学发光法检测各组细胞的ALP活性;采用RT-PCR和Western blot法分别检测抑制c-myc表达的ECA-109细胞中Bub1b基因mRNA转录和BubR1蛋白的表达水平。结果重组质粒经PCR、双酶切及测序鉴定构建正确;重组质粒转染过表达c-myc的HEK-293细胞和抑制c-myc表达ECA-109细胞的ALP活性明显升高(P<0.000 1);抑制c-myc表达可明显下调ECA-109细胞中Bub1b基因mRNA转录和BubR1蛋白的表达水平(P<0.05)。结论癌基因c-myc对食管癌细胞中BubR1的表达有正调控作用,为进一步研究BubR1在食管癌中发挥的作用奠定了基础。; 宋培培胡敏湛晓琴章帆施琼翁亚光; 关键词：C-MYC基因食管癌

野生型着丝粒蛋白-E基因沉默对人结肠癌HCT116细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响: 2012年; 目的利用RNA干扰技术下调野生型着丝粒蛋白E(Wild type centromere protein E,CENP-EWT)基因的表达,观察CENP-EWT基因沉默对结肠癌HCT116细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响。方法将HCT116细胞分为空白对照组、空载体转染组和CENP-EWT shRNA转染组,转染48 h后,采用巢式PCR检测细胞中CENP-EWT基因mRNA的转录水平;MTT法检测细胞的增殖活力;Hoechst法检测细胞的凋亡比例;Transwell小室试验检测细胞的迁移和侵袭能力。结果与空白对照组和空载体转染组相比,CENP-EWT shRNA转染组可有效抑制CENP-EWT基因的转录水平(P<0.05);CENP-EWT shRNA转染组细胞的增殖活力明显下降(P<0.05);细胞凋亡比例明显增加(P<0.01),细胞的迁移和侵袭能力明显增强(P<0.01)。结论 CENP-EWT基因沉默能够抑制人结肠癌HCT116细胞增殖,诱导细胞凋亡,但同时能增强细胞的迁移和侵袭能力。; 章帆湛晓琴宋培培胡敏施琼翁亚光; 关键词：野生型 HCT116细胞结肠癌

食管癌中癌基因c-myc对人有丝分裂检查点蛋白BubR1调控作用的研究: 目的:研究在食管癌中癌基因c-myc对人有丝分裂检查点蛋白BubR1的调控作用。　　方法:将BubR1的基因Bub1b启动子区域约500bp、1000bp、1500bp、2000bp的片段分别亚克隆于基于碱性磷酸酶(Al...; 宋培培; 关键词：C-MYC基因食管癌

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宋培培

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