张韦华
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
- 供职机构：上海交通大学医学院附属瑞金医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 抗半胱氨酸蛋白酶-7核酶的克隆、体外表达与切割活性的研究
- 2004年
- 目的 设计并合成抗小鼠半胱氨酸蛋白酶-7(caspase-7)的锤头状核酶,并对它们的体外表达与体外切割活性进行研究。 方法 采用计算机软件对锤头状核酶和小鼠caspase-7基因的二级结构进行分析,核酶的DNA序列在体外由自动合成仪合成,小鼠caspase-7目的基因通过RT-PCR扩增获得,将核酶基因和caspase-7基因分别克隆入载体pBSKneoU6’和pGEM-T中,通过体外转录得到核酶和caspase-7mRNA,通过体外切割筛选出具有切割活性的核酶。 结果 针对目的基因的333和394位点发计合成了两个核酶:Rz333和Rz394。成功获得caspase-7 mRNA的表达载体pC7及含有核酶的重组质粒pU6Rz333和pU6Rz394,通过体外转录表达出含有caspase-7 mRNA的987 nt的靶mRNA及完整的核酶Rz333(47 nt)和Rz394(50 nt)。体外切割实验证实Rz333能够定点切割caspase-7 mRNA,产生243 nt和744 nt的切割产物,切割效率为67.98％。Rz394不能切割靶基因。 结论 核酶Rz333能够位点特异性的切割caspase-7 mRNA。
- 张韦华谢青周霞秋姜山金由辛
- 关键词：基因克隆锤头状核酶
- 肝细胞凋亡发生机制及干预的研究
- 谢青周霞秋廖丹徐人欢李光明晏春根姜山臧国庆徐玉敏俞红郭清周惠娟张韦华
- 该研究以破坏细胞内钙离子平衡诱导内质网应激作为实验模型，研究了钙离子信号对Caspase－12蛋白酶活化的作用，为内质网应激相关性疾病的治疗提供了新的思路。发现了胸去氧胆酸抗肝细胞凋亡的一个新的作用机制，并针对凋亡基因C...
- 关键词：
- 关键词：肝细胞凋亡干预
- 大鼠肝卵圆细胞增殖模型建立及其表面标记检测被引量：3
- 2004年
- 本文拟建立大鼠卵圆细胞增殖模型 ,分离纯化卵圆细胞并对其特性进行研究。给SD大鼠喂饲 2 乙酰氨基芴 (2 AAF) ,剂量分别为 5、10、15、2 0mg kg ,连续给药 6d ,第 7天行三分之二肝切除术 ,术后继续给药 1周 ,并于术后每隔 3d取肝组织行常规组织学观察、细胞增殖试验及免疫组化染色。经免疫磁珠标记C kit阳性细胞以纯化卵圆细胞 ,再经免疫细胞化学及RT PCR对其进行鉴定。结果显示 ,10、15、2 0mg kg三种剂量 2 AAF均可成功建立卵圆细胞增殖模型 ,卵圆细胞增殖于第 8天较明显 ,至第 11天达高峰 ,第 14天有所减少。卵圆细胞胞核BrdU染色阳性 ,卵圆细胞表达特异性抗原OV6、肝细胞标记白蛋白、胆管细胞标记CK19、甲胎蛋白以及连接蛋白 4 3,同时还表达造血干细胞标记C kit。实验表明 ,2 AAF剂量为 10～ 2 0mg kg时可获得较理想的大鼠卵圆细胞增殖模型 ,增生的卵圆细胞为具有双向分化潜能的肝干细胞 前体细胞。
- 俞红秦爱兰周霞秋张韦华
- 关键词：卵圆细胞肝前体细胞干细胞免疫组化
- 大鼠肝卵圆细胞增殖模型建立及其纯化鉴定被引量：7
- 2004年
- 为建立大鼠卵圆细胞增殖模型,分离纯化卵圆细胞并对其特性进行研究,SD大鼠喂饲2-乙酰氨基芴(2-acetyailamifluorene,2-AAF),剂量分别为5、10、15、20mg/kg,连续给药6d,于第7天行三分之二部分肝切除,术后继续给药1周,每隔3d取肝组织行常规组织学观察,作细胞增殖试验及免疫组化染色。通过免疫磁珠标记C-kit阳性细胞以纯化卵圆细胞(Magneticactivatedcellsorting,MACS),用免疫细胞化学及RT-PCR对纯化细胞进行鉴定。结果:10、15、20mg/kg三种剂量2-AAF均可成功建立卵圆细胞增殖模型,卵圆细胞增殖于第8天较明显,至第11天达高峰,第14天有所减少。卵圆细胞胞核Brdu染色阳性,其除表达卵圆细胞特异性抗原OV6外,尚表达肝细胞标记白蛋白及胆管细胞标记CK19。胚胎期肝细胞抗原AFP、连接蛋白43在卵圆细胞中亦有高表达,同时还表达造血干细胞标记C-kit。以MACS纯化的C-kit阳性卵圆细胞,90%以上为OV6阳性,并有AFP、白蛋白、CK19mRNA转录。结论:2-AAF剂量为10～20mg/kg时可获得满意的大鼠卵圆细胞增殖模型,增生的卵圆细胞为具有双向分化潜能的肝干细胞/前体细胞,利用C-kit标记通过MACS可纯化这种肝干细胞/前体细胞。
- 秦爱兰周霞秋谢青俞红张韦华
- 关键词：卵圆细胞肝前体细胞纯化免疫细胞化学
