徐杨
- 作品数：11 被引量：18H指数：2
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- 胱抑素C和β2微球蛋白半定量金标联合检测试剂盒
- 本实用新型公开了一种胱抑素C和β2微球蛋白半定量金标联合检测试剂盒，属于医学诊断技术领域。所述试剂盒由卡盒、比色卡和试纸条三部分组成：卡盒包括盒盖（8）与盒底（14）两部分，卡盒内置比色卡（9）和试纸条。卡盒正面可见检视...
- 杜惠芬李克生徐杨
- 文献传递
- 抗人胱蛋白酶抑制剂C单克隆抗体的制备及鉴定被引量：1
- 2016年
- 目的制备抗人Cys-C单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。方法用基因工程表达的Cys-C抗原免疫BALB/c小鼠,用杂交瘤技术制备抗人Cys-C单克隆抗体,间接ELISA法检测单克隆抗体的效价、亲和力,鉴定单克隆抗体的亚类并检测抗原位点互补关系,SDS-PAGE鉴定抗体纯度,秋水仙素阻抑法鉴定染色体数目。结果筛选出2株能稳定分泌抗人Cys-C单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2H2、3C4,抗体Ig亚类均为IgG1,亲和常数分别为7.429×10-8、1.95×10-7,2株单克隆抗体抗原位点不重叠,染色体鉴定符合杂交瘤细胞的特性。结论成功制备了特异性的抗人Cys-C单克隆抗体,为Cys-C检测试剂盒的研究开发奠定了基础。
- 徐杨杜惠芬连晓雯张瑞君柴丹丹李克生
- 关键词：胱蛋白酶抑制剂C单克隆抗体
- 再生基因4(REG4)真核表达载体的构建及其蛋白在HEK293T细胞中的表达、纯化
- 2023年
- 目的构建再生基因4(regenerating gene 4,REG4)的真核表达载体,转染人胚肾细胞293T(human embryonic kidney 293T cells,HEK 293T),获得重组人再生胰岛衍生蛋白IV(regenerating islet-derived protein IV,Reg IV)。方法根据NCBI数据库REG4基因序列进行基因优化、合成,将其克隆至pCDNA3.4载体并进行双酶切和测序鉴定,通过转染试剂聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)将pCDNA3.4-REG4质粒瞬时转染至HEK 293T细胞(实验组),同时以pEGFP-C1质粒作为转染对照组,未转染重组质粒的HEK 293T细胞作为空白对照组。荧光显微镜观察转染对照组转染效率,分别收集实验组及空白对照组细胞和细胞培养液上清,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)与免疫印迹试验(Western-Blot,WB)检测Reg IV蛋白表达水平。通过镍柱及丙烯葡聚糖凝胶S-400(Sephacryl S-400)柱进行蛋白纯化,SDS-PAGE及WB对纯化后重组蛋白进行鉴定。结果经测序和双酶切鉴定,重组质粒pCDNA3.4-REG4构建成功。转染对照组(pEGFP-C1质粒)荧光显微镜观察结果显示转染效率约50%,表明转染成功。WB结果显示仅在实验组(pCDNA3.4-REG4质粒)的细胞中检测到RegIV蛋白。镍柱纯化时目的蛋白无法与镍柱填料有效结合,SephacrylS-400凝胶柱层析纯化获得了此重组蛋白。结论成功构建了REG4基因真核表达载体并在HEK 293T细胞中成功表达,为深入研究Reg IV蛋白的作用机理及开发潜在的抗癌靶向药物奠定了基础。
- 徐杨杜惠芬李克生柴丹丹石晓玲连晓雯张学良
- 关键词：真核表达瞬时转染蛋白纯化
- 再生基因4(RegⅣ)的原核表达、蛋白结构复性及纯化
- 2020年
- 目的:构建再生基因4(Reg Ⅳ)的原核表达载体,获得重组人Reg Ⅳ蛋白。方法:将已构建好的pEGFP-C1-Reg Ⅳ质粒进行酶切纯化获得目的基因,并构建到pET-30a原核表达载体上,经测序鉴定后将序列正确的重组质粒转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE凝胶电泳鉴定,并用凝胶层析对表达产物进行复性纯化。结果:构建了pET-30a-Reg Ⅳ原核表达重组质粒,IPTG诱导表达出约22KD的重组蛋白,表达产物经复性纯化后获得纯度较高的目的蛋白。结论:成功构建了Reg Ⅳ原核表达载体,并成功表达了重组人Reg Ⅳ蛋白。
- 徐杨张学良杜惠芬柴丹丹连晓雯张瑞君李克生
- 关键词：原核表达纯化
- 金标法检测尿β_2-MG在肾功能损伤诊断中的临床价值被引量：11
- 2019年
- 目的评价尿液β_2-微球蛋白(β_2-MG)金标检测试剂盒在肾功能早期损伤诊断中的应用价值。方法将临床诊断为肾病综合征患者53例、慢性肾炎综合征患者40例、慢性肾衰竭患者18例、高血压肾病患者33例、糖尿病肾病患者23例作为研究组,体检健康者157例作为对照组,以β_2-MG金标检测试剂盒检测β_2-MG水平,并与胶乳增强免疫比浊法检测结果进行比较。结果金标法与胶乳增强免疫比浊法检测尿液β_2-MG阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05);金标法检测临床确诊肾病的167例患者尿β_2-MG的灵敏度为76.7%,符合度为85.2%,特异度为94.3%。结论尿液β_2-MG金标检测试剂盒对诊断肾功能早期损伤具有一定的临床应用价值。
- 徐杨杜惠芬李克生李光迪张瑞君柴丹丹连晓雯
- 关键词：Β2-微球蛋白早期肾损伤金标法
- 金银花中绿原酸提取工艺的改进被引量：5
- 2013年
- 目的:探索金银花的新型提取工艺。方法:采用紫外分光光度法测定绿原酸含量,比较水提法与液-液双相连续萃取法对绿原酸提取率的差别。结果:水提法与液-液双相连续萃取法对绿原酸提取率的差异具有显著性,液-液双相连续萃取法所得浸膏率低、绿原酸占浸膏比率高。结论:液-液双相连续萃取法所提绿原酸虽在含量上低于普通水提取,但其纯度高,杂质含量少,可作为一种有效的金银花中绿原酸的提取分离方法。
- 徐杨王兴刚贺殿贾忠马志刚李克生
- 关键词：金银花绿原酸
- β2微球蛋白半定量金标快速检测试剂盒
- 本实用新型公开了一种β2微球蛋白半定量金标快速检测试剂盒，属于临床医学检测领域。所述试剂盒包括卡盒、比色卡和试纸条三部分：卡盒包括盒盖(8)与盒底(14)两部分，卡盒内置比色卡(9)和试纸条。卡盒正面可见检视窗(1)、加...
- 杜惠芬李克生徐杨连晓雯柴丹丹
- 文献传递
- β_2-微球蛋白金标快速检测试剂条的研制
- 2015年
- 目的研制一种β2-微球蛋白（β2-MG）金标快速检测试剂条。方法以健康人群血清及尿液β2-MG含量均值的1.5倍作为金标检测试剂条的cut-off值。制备胶体金,标记β2-MG单抗并固化于玻璃纤维,将其与抗体包被的硝酸纤维素膜组装成β2-MG金标检测试剂条。用健康者、糖尿病患者和肾病患者的血清及尿液对试剂条的特异性、敏感性、符合性及稳定性进行测试,与全自动生化仪同步检测,进行符合性实验。结果β2-MG金标检测试剂条血清和尿液cut-off值分别为1.5 mg/L和0.27 mg/L。试剂条对血清及尿液检测特异性分别为97.50%、95.00%,检测敏感性为93.33%~96.67%,试剂条重复性好,37℃条件下12 d质量稳定,与免疫比浊试剂的符合率为88.89%~94.93%。结论β2-MG金标检测试剂条是一种特异性强、敏感性高、快速、简便,适宜普及推广的肾功能检测试剂。
- 李克生杜惠芬李光迪刘玉梅连晓雯徐杨
- 关键词：Β2-微球蛋白
- 血清和尿液β2-MG检测对肿瘤化疗患者早期肾损伤的诊断意义被引量：1
- 2018年
- 目的:评价β2-MG检测在肿瘤化疗患者早期肾损伤诊断的临床意义。方法:用β2-MG金标检测试剂盒对125份肿瘤化疗患者血清样本、113份肿瘤化疗患者尿液样本,67份非化疗肿瘤患者血清样本和63份非化疗肿瘤患者尿液样本进行检测,同时采用胶乳增加免疫比浊法检测血清Cys C,用酶法检测血清样本Scr和BUN,超正常值参考范围按阳性结果统计。结果:化疗组和非化疗组患者血清β2-MG阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05),两组患者血清Cys C、BUN和Scr阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05);化疗组和非化疗组患者尿β2-MG阳性率比较差异有统计学意义(P<0.01),两组患者血清Cys C、BUN和Scr阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:尿液β2-MG检测对化疗肿瘤患者早期肾损伤有一定诊断价值,且较血清Cys C、BUN和Scr检测敏感。
- 杜惠芬徐杨李克生江秀娟柴丹丹张瑞君连晓雯
- 关键词：早期肾损伤
- 人胱抑素C金标快速检测试剂条的研制
- 2016年
- 目的研制一种胱抑素C(Cys-C)金标快速检测试剂条。方法确定早期肾损伤的血清Cys-C cut-off值,以0.9μg/ml为试剂条最低检测值。用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,用胶体标记Cys-C单克隆抗体并固化于玻璃纤维素垫,用Cys-C单克隆抗体和羊抗鼠Ig G抗体包被硝酸纤维素膜,制备Cys-C免疫层析金标检测试剂条。用试剂条检测175份糖尿病患者血清样本、418份肾病患者血清样本和102份健康人血清样本,对试剂条的特异性、敏感性、符合性及稳定性进行测试。结果试剂盒的特异度达到93.33%,糖尿病患者血清Cys-C阳性率为77.71%,肾病患者血清Cys-C阳性率为85.88%,两类患者血清Cys-C阳性率均显著高于健康人群,差异有统计学意义(P<0.01)。重复性和稳定性试验结果显示试剂检测结果的重复性好,37℃条件下12 d质量稳定。结论 Cys-C金标检测试剂条是一种特异性强、敏感性高、快速、简便,适宜普及推广的肾功能检测试剂。
- 杜惠芬李克生李光迪江秀娟徐杨柴丹丹
- 关键词：胱抑素C
