连晓雯
- 作品数：27 被引量：56H指数：5
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- 再生基因4(REG4)真核表达载体的构建及其蛋白在HEK293T细胞中的表达、纯化
- 2023年
- 目的构建再生基因4(regenerating gene 4,REG4)的真核表达载体,转染人胚肾细胞293T(human embryonic kidney 293T cells,HEK 293T),获得重组人再生胰岛衍生蛋白IV(regenerating islet-derived protein IV,Reg IV)。方法根据NCBI数据库REG4基因序列进行基因优化、合成,将其克隆至pCDNA3.4载体并进行双酶切和测序鉴定,通过转染试剂聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)将pCDNA3.4-REG4质粒瞬时转染至HEK 293T细胞(实验组),同时以pEGFP-C1质粒作为转染对照组,未转染重组质粒的HEK 293T细胞作为空白对照组。荧光显微镜观察转染对照组转染效率,分别收集实验组及空白对照组细胞和细胞培养液上清,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)与免疫印迹试验(Western-Blot,WB)检测Reg IV蛋白表达水平。通过镍柱及丙烯葡聚糖凝胶S-400(Sephacryl S-400)柱进行蛋白纯化,SDS-PAGE及WB对纯化后重组蛋白进行鉴定。结果经测序和双酶切鉴定,重组质粒pCDNA3.4-REG4构建成功。转染对照组(pEGFP-C1质粒)荧光显微镜观察结果显示转染效率约50%,表明转染成功。WB结果显示仅在实验组(pCDNA3.4-REG4质粒)的细胞中检测到RegIV蛋白。镍柱纯化时目的蛋白无法与镍柱填料有效结合,SephacrylS-400凝胶柱层析纯化获得了此重组蛋白。结论成功构建了REG4基因真核表达载体并在HEK 293T细胞中成功表达,为深入研究Reg IV蛋白的作用机理及开发潜在的抗癌靶向药物奠定了基础。
- 徐杨杜惠芬李克生柴丹丹石晓玲连晓雯张学良
- 关键词：真核表达瞬时转染蛋白纯化
- 抗H5N1亚型禽流感病毒单克隆抗体的制备和鉴定
- 禽流感/(AIV/)是由A型流感病毒感染引起的一种禽类传染性疾病综合征,有重要的公共卫生意义。本研究的目的是以H5N1亚型高致病性禽流感病毒作为免疫原,研制出抗H5N1亚型禽流感病毒的单克隆抗体/(McAb/),并将其用...
- 连晓雯
- 关键词：H5亚型禽流感病毒单克隆抗体酶联免疫测定法
- 文献传递
- 抗沙眼衣原体主要外膜蛋白(MOMP)单克隆抗体的制备及初步应用
- 2014年
- 制备抗沙眼衣原体(CT)单克隆抗体,建立沙眼衣原体的胶体金免疫层析快速检测方法。采用纯化沙眼衣原体主要外膜蛋白(MOMP)免疫Balb/c小鼠,选取高效价的免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,ELISA检测筛选分泌抗MOMP单克隆抗体(McAb)的细胞株并进行相关鉴定。共获得分泌IgG1,IgG2b和IgM的3株单克隆抗体杂交瘤细胞株。纯化的单克隆抗体与鹦鹉热衣原体、肺炎衣原体、肺炎支原体均无交叉反应。通过位点分析选择配对良好的两株McAb,制备检测CT的双抗体夹心法免疫层析试纸条。制备的胶体金试纸条对MOMP的最低检出值可达50 ng·mL-1。
- 连晓雯杜惠芬李克生
- 关键词：单克隆抗体
- β2微球蛋白半定量金标快速检测试剂盒
- 本实用新型公开了一种β2微球蛋白半定量金标快速检测试剂盒，属于临床医学检测领域。所述试剂盒包括卡盒、比色卡和试纸条三部分：卡盒包括盒盖(8)与盒底(14)两部分，卡盒内置比色卡(9)和试纸条。卡盒正面可见检视窗(1)、加...
- 杜惠芬李克生徐杨连晓雯柴丹丹
- 文献传递
- 抗酸土脂环酸芽孢杆菌(Alicyclobacillus acidoterrestris)单克隆抗体制备被引量：1
- 2018年
- 【背景】基于本实验室已经建立的脂环酸芽孢杆菌检测和鉴定方法工作基础之上,以期建立具有很好的经济价值和实用价值,且更为方便、快捷、准确、特异、灵敏的检测方法。【目的】实现对果汁生产中脂环酸芽孢杆菌从原料到成品的快速检测和鉴定。【方法】采用杂交瘤细胞技术,以Alicyclobacillus acidoterrestris(ATCC49025)免疫BALB/c小鼠,用建立的间接ELISA方法筛选杂交瘤细胞,得到了3株能稳定分泌A.acidocaldarius抗体的杂交瘤细胞株,其中两株为Ig G1亚类,并对其进行生物学特性的鉴定。【结果】得到的两株单抗3F7和9C4是针对不同的抗原位点,且多次传代后稳定性基本保持不变;特异性实验表明两株单抗均不与A.acidocaldarius(NCIMB11725)、Bacillus cereus(ATCC11778)、Bacillus subtilis(ATCC11774)、A.cycloheptanicus(ATCC49029)等发生交叉反应。【结论】3F7和9C4这两株单抗可以进一步用于检测胶体金试纸条的研制。
- 张宇霞连晓雯李儒杜惠芬李克生
- 关键词：脂环酸芽孢杆菌单克隆抗体
- LZTFL1在胃癌等组织中的表达及其与不同黏附因子表达的相关性研究
- 背景:胃癌(Gastric Cancer,GC)是危害人类健康的常见恶性肿瘤,也是全球癌症相关死亡的第二大原因。由于胃癌的浸润转移是一个多基因参与的复杂过程,不仅与癌细胞自身基因结构改变与表达异常有关,还受到组织微环境的...
- 连晓雯
- 关键词：胃癌E-钙粘蛋白Β-连环蛋白细胞间粘附分子-1血管细胞粘附分子-1
- 文献传递
- 甲状腺肿瘤血清β2-MG诊断指标的建立及相关性研究
- 刘勤江李克生王莉王涛杜惠芬连晓雯达静云马世红
- 本项目通过建立血清β2-MG的ELISA快速定量检测方法，研制了β2-MG酶标定量试剂盒。用该方法检测正常人群1002例、甲状腺癌95例、结节性甲状腺肿243例血清β2-MG含量并进行综合分析。正常人群β2-MG浓度平均...
- 关键词：
- 关键词：甲状腺肿瘤血清
- 兰州地区不同临床类型恶性肿瘤患者弓形虫抗体IgG的ELISA检测结果分析被引量：6
- 2008年
- 本文就运用间接ELISA法对兰州地区372例不同临床类型的恶性肿瘤患者血清中弓形虫IgG抗体进行检测,以932例正常体检组作为对照,对伴发弓形虫病的阳性率进行统计,得出兰州地区不同临床类型恶性肿瘤患者伴发弓形虫的特点及规律,补充了兰州地区此项研究的空白。
- 孙艳芳贾宁杜惠芬袁明连晓雯李克生
- 关键词：恶性肿瘤弓形虫抗体IGGELISA
- 抗人胱蛋白酶抑制剂C单克隆抗体的制备及鉴定被引量：1
- 2016年
- 目的制备抗人Cys-C单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。方法用基因工程表达的Cys-C抗原免疫BALB/c小鼠,用杂交瘤技术制备抗人Cys-C单克隆抗体,间接ELISA法检测单克隆抗体的效价、亲和力,鉴定单克隆抗体的亚类并检测抗原位点互补关系,SDS-PAGE鉴定抗体纯度,秋水仙素阻抑法鉴定染色体数目。结果筛选出2株能稳定分泌抗人Cys-C单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2H2、3C4,抗体Ig亚类均为IgG1,亲和常数分别为7.429×10-8、1.95×10-7,2株单克隆抗体抗原位点不重叠,染色体鉴定符合杂交瘤细胞的特性。结论成功制备了特异性的抗人Cys-C单克隆抗体,为Cys-C检测试剂盒的研究开发奠定了基础。
- 徐杨杜惠芬连晓雯张瑞君柴丹丹李克生
- 关键词：胱蛋白酶抑制剂C单克隆抗体
- 牦牛形态结构和生理生殖机能对高原环境的适应性
- 本文介绍了牦牛的分布及其生态条件,从表型适应、解剖学和形态学适应、生理机能和繁殖机能的适应等方面阐述了牦牛对高寒、缺氧生态环境的适应性,并对牦牛的研究前景作了展望.
- 崔燕雍艳红王正波何俊峰王剑屠迪连晓雯
- 关键词：牦牛适应性
- 文献传递
