袁明
- 作品数：11 被引量：35H指数：4
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- 大肠杆菌O157 LPS单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立被引量：7
- 2011年
- 以热灭活的大肠杆菌O157∶H7(E.coli O157∶H7)菌体抗原为免疫原,E.coli O157∶H7菌体结合脂多糖(LPS)为筛选抗原,应用淋巴细胞杂交瘤技术制备E.coli O157∶H7LPS单克隆抗体。采用改良过碘酸钠法制备辣根过氧化物酶(HRP)酶标抗体,并建立检测E.coli O157∶H7的双抗体夹心ELISA方法。结果,成功制备了9株稳定分泌E.coli O157∶H7LPS单克隆抗体的杂交瘤细胞,其中7F9和7G2为LPS O-特异性多糖(O-SP)单克隆抗体,与E.coli O157∶H7菌体具有较好的反应性。此双抗体夹心ELISA方法对与受试的非O157菌株没有交叉反应,对E.coli O157∶H7纯培养菌液的检出下限为3×104CFU/mL。结果表明,建立的ELISA检测方法对E.coli O157具有较高的特异性和灵敏度,该方法有望与其他方法相结合用于对E.coli O157∶H7的检测。
- 刘红亮李克生陈学忠杜惠芬连晓雯鲁学萍袁明
- 关键词：单克隆抗体双抗体夹心ELISA
- 肠炎沙门菌脂多糖抗原的制备及其生物学特性被引量：1
- 2011年
- 目的制备肠炎沙门菌(Salmonella enteritidis,SE)脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)抗原,并鉴定其生物学特性。方法分别用热酚水法和水饱和冷酚法提取SE LPS抗原,免疫BALB/c小鼠,制备LPS单克隆抗体。采用蒽酮-硫酸法测定LPS多糖含量,考马斯亮蓝染色法测定其蛋白含量,SDS-PAGE分析其分子结构,Western blot分析其反应原性,间接ELISA法分析其特异性。结果热酚水法水相LPS粗提物中的多糖和蛋白含量分别约为3.413 mg/ml和46μg/ml,水饱和冷酚法水相LPS粗提物中的多糖和蛋白含量分别约为2.248 mg/ml和31μg/ml;提取的LPS呈现明显的梯度型条带;制备的2株抗LPS单抗(1D3和2E5)均能与提取的LPS发生特异性反应;制备的LPS除了与伤寒沙门菌A～F多价血清发生交叉反应外,与其他各种肠道菌单价或多价血清均未发生反应。结论热酚水法和水饱和冷酚法均可制备出活性、纯度均较好的LPS,但水饱和冷酚法操作简单,且提取的样品纯度高,特异性和反应原性良好,可用于肠炎沙门菌特异性抗原位点单抗的制备及免疫学检测。
- 鲁学萍杜惠芬李克生连晓雯刘红亮袁明叶文华
- 关键词：沙门菌肠炎脂多糖类抗原
- 兰州地区恶性肿瘤患者弓形虫抗体IgG和IgM检测结果对比分析被引量：4
- 2010年
- 采用间接ELISA法对兰州地区435例不同临床类型恶性肿瘤患者血清中的弓形虫抗体IgG和IgM进行检测，以50例健康体检者作为对照，对前者伴发弓形虫病的情况进行统计，得出兰州地区不同临床类型恶性肿瘤患者伴发弓形虫病的特点及规律。
- 连晓雯李克生杜惠芬袁明叶文华周永奇
- 关键词：恶性肿瘤弓形虫病
- 高效价抗人血红蛋白单克隆抗体的制备及鉴定
- 2007年
- 目的制备高效价抗人血红蛋白（Hb）单克隆抗体并对其进行鉴定。方法用纯化人血红蛋白免疫Balb／c小鼠。取免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选分泌抗人Hb单克隆抗体的细胞株，将阳性细胞株接种于小鼠腹腔制备单克隆抗体并对腹水抗体进行纯化，测定抗体亚类，分析其敏感性、特异性及纯化抗体的相对亲和力。结果共获得3株单克隆抗体杂交瘤细胞株，均与人Hb有较高的亲和力，其敏感性可达0．5μg/ml，而且与人肌红蛋白（Mb）及各种动物血红蛋白、肌红蛋白均无交叉反应。结论3株单克隆抗体杂交瘤细胞株有较好的特异性，与人Hb有较高的亲和力。
- 杜惠芬李克生袁明叶文华连晓雯
- 关键词：人血红蛋白单克隆抗体
- 金黄色葡萄球菌蛋白A单克隆抗体的制备被引量：1
- 2012年
- 为获得稳定性好、特异性强、效价较高的抗金黄色葡萄球菌蛋白A单克隆抗体,用热灭活的金黄色葡萄球菌wol-04菌体抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,以金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)为筛选抗原进行克隆筛选,并对各株单抗的生物学特性进行分析和鉴定.结果表明:试验获得了3株稳定分泌SPA单克隆抗体的杂交瘤细胞,其中单克隆抗体3B11、4F7为SPA表面抗原表位的单克隆抗体,与金黄色葡萄球菌wol-04菌体和SPA有较强的免疫反应性,免疫球蛋白亚类分别为IgG1和IgG3,具有稳定性好、特异性强、效价较高的特点.
- 彭洪江杜惠芬李克生马卫静杜丽娟袁明连晓雯
- 关键词：单克隆抗体杂交瘤细胞间接ELISA
- CRM9与兔抗人IgG连接方法探讨被引量：1
- 2005年
- 目的:用直接偶联法构建新型蛋白兔抗人IgGCRM9.方法:分别应用异型双功能连接剂(m Maleimido benzoyl N hydoxysuccinimideester,MBS)和N琥珀酰亚胺3(2吡啶二巯基)丙酸盐(SPDP)将兔抗人IgG多抗和白喉毒素突变体(CRM9)进行连接,制备出新的蛋白.结合后的蛋白经SephacrylS300分离纯化,用聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖电泳证明二者的结合情况.采用酶联免疫法检测IgG与CRM9按不同比例反应后所构建的蛋白复合体中抗体部分的活性.结果:用MBS连接剂连接IgG与CRM9后的产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳显示出的条带明显滞后于IgG所显示的条带,而在琼脂糖凝胶电泳中IgG与CRM9混合反应的样品所显示的两条条带均与IgG和CRM9单独所在的条带一致.酶联免疫实验测得的各组A450nm值表明,IgG与CRM9按1∶1和1∶3两种比例制备的样品对抗体活性影响最小,而按1∶5和1∶两种比例制备的蛋白,抗体活性受到很大的抑制.结论:兔抗人IgG与CRM9可以通过MBS结合,二者在1∶1～1∶3之间的比例时,可以有较好的连接,而且对抗体活性的影响最小.SP DP则不适用于本实验中的两种蛋白的连接.这将为免疫毒素的新型连接提供有效的方法.
- 胡洁张润玲杜惠芬袁明李克生
- 关键词：MBS
- 肠出血性大肠杆菌O157∶H7脂多糖抗原的提取鉴定及间接ELISA法的建立被引量：8
- 2011年
- 目的提取并纯化具有强免疫反应性和高特异性的肠出血性大肠杆菌O157∶H7(E.coliO157∶H7)脂多糖(LPS)抗原,并研究其在E.coliO157∶H7 LPS抗体检测中的应用。方法应用热酚水法提取E.coliO157∶H7 LPS抗原,同时收集水相和酚相LPS,并对其产率、纯度及免疫反应性进行分析比较,用酸解法制备O-特异性多糖(O-SP),并以不同的LPS为包被抗原,建立间接ELISA法检测E.coliO157∶H7 LPS抗体。结果大分子量的E.coliO157∶H7 LPS优先溶于酚相,而水相中含有更多的小分子量LPS,与水相LPS相比酚相LPS具有更高的免疫反应性和纯度,酚相LPS经酸解去脂得到的O-SP具有更高的反应特异性。结论酚相LPS和O-SP都可用于E.coliO157∶H7 LPS抗体的ELISA检测,O-SP具有更高的特异性,是检测E.coliO157∶H7 LPS特异性抗体的理想材料。
- 刘红亮陈学忠李克生杜惠芬陈应泰连晓雯鲁学萍袁明叶文华
- 关键词：脂多糖间接ELISA
- 山羊痘弱毒疫苗株TK基因的克隆及序列分析被引量：4
- 2007年
- 以提取的山羊痘弱毒疫苗株HLJ—V9 DNA为模板，设计特异性引物并进行PCR扩增，获得了2078bp的DNA片段，并将PCR产物克隆至pGEM—T Easy载体。酶切鉴定、PCR鉴定和测序结果表明，成功获得了TK基因，获得的TK基因内存在一个Kpn Ⅰ酶切位点和编码区的早期转录终止信号TTTTTN（T）T。核苷酸和氨基酸同源性分析表明，弱毒疫苗毒株HLJ—V9 TK基因与参考毒株的同源性在95．5％～100％之间，说明羊痘病毒TK基因具有高度的保守性。
- 鞠厚斌张强袁明施程洪韩若婵谢芳吴国华颜新敏李健朱海霞朱彩珠卫广森
- 关键词：山羊痘病毒TK基因
- 兰州地区不同临床类型恶性肿瘤患者弓形虫抗体IgG的ELISA检测结果分析被引量：6
- 2008年
- 本文就运用间接ELISA法对兰州地区372例不同临床类型的恶性肿瘤患者血清中弓形虫IgG抗体进行检测,以932例正常体检组作为对照,对伴发弓形虫病的阳性率进行统计,得出兰州地区不同临床类型恶性肿瘤患者伴发弓形虫的特点及规律,补充了兰州地区此项研究的空白。
- 孙艳芳贾宁杜惠芬袁明连晓雯李克生
- 关键词：恶性肿瘤弓形虫抗体IGGELISA
- 血清CRP、PCT检查联合血培养对菌血症早期诊断价值被引量：1
- 2022年
- 目的:探讨血清中C-反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)与血培养对菌血症患者早期临床诊断的价值。方法:回顾性分析兰州大学第一医院2020年11月至2021年3月收治的52例菌血症患者为观察组以及60例非菌血症患者为对照组,观察组根据血培养结果分为革兰阴性菌(G-菌)组和革兰阳性菌(G+菌)组,观察组和对照组均采用全自动生化分析仪、化学发光仪检测患者血清中CRP和PCT的水平,统计分析血清CRP、PCT与血培养检查结果,分析三项检查对菌血症患者早期临床诊断的应用。结果:观察组患者血清中CRP、PCT水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组患者三项联合检查的阳性检出率明显高于血清CRP、PCT与血培养各单项检查阳性率,差异有统计学意义(P<0.05);观察组患者中,G-菌患者PCT水平高于G+菌患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:血清CRP、PCT检查联合血培养对菌血症患者早期诊断具有较高灵敏度,值得临床推广。
- 颉晓玲袁明刘志武张晨
- 关键词：菌血症PCTCRP血培养
