朱靖
- 作品数：16 被引量：50H指数：3
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- 一种新型分离宫颈脱落细胞的方法
- 本发明公开了一种新型分离宫颈脱落细胞的方法，其特征是首先取宫颈脱落细胞于PBS磷酸缓冲液中，涡旋混匀得细胞悬液；将细胞悬液加入粘液分离液中；经离心、弃上清液后再次加入PBS磷酸缓冲液，重悬沉淀物，得到重悬的细胞悬液；将重...
- 凌斌周颖李敏许乾乾冯定庆朱园园沈国栋李彩荣卫莹雷蕾王青元朱靖姚凤球
- 文献传递
- ITCH的功能及其与疾病的关系被引量：1
- 2012年
- ITCH又称AIP4(atrophin 1相互作用蛋白4),最初是在研究小鼠表皮颜色时被发现的。ITCH是一个单体蛋白,属于同源的HECT类型的泛素连接酶E3家族,参与体内多种蛋白质的泛素化降解过程;参与免疫反应;参与多种细胞过程,包括细胞循环、增殖和凋亡;在肿瘤的形成过程中发挥重要的作用。现就ITCH的功能及其与疾病的关系研究进展予以综述。
- 陶峰周颖朱靖凌斌
- 关键词：ITCH疾病E3泛素连接酶
- TAp63γ在子宫颈癌组织中表达降低及其临床意义被引量：1
- 2010年
- 目的:探讨子宫颈鳞状细胞癌中TAp63蛋白的表达及其临床意义。方法:采用免疫组织化学SP法和Western Blotting检测30例子宫颈鳞状细胞癌及20例正常宫颈组织中TAp63蛋白的表达,分析TAp63表达情况与子宫颈癌病理分级之间的关系。结果:TAp63蛋白在子宫颈鳞状细胞癌中表达水平显著低于正常宫颈组织(P<0.05),在高分化和中分化子宫颈癌中表达显著高于其在低分化子宫颈癌中的表达(P<0.05)。随着肿瘤病理分级的升高,TAp63表达有明显下调(P<0.05)。结论:TAp63表达降低能够增强肿瘤的恶性行为,与子宫颈癌细胞的分化程度密切相关,参与子宫颈癌的发生发展,可以作为评价肿瘤生物学行为的一个新的标记物。
- 范少君周颖李敏朱靖许乾乾凌斌
- 关键词：宫颈鳞状细胞癌TAP63
- 野生型P53及其调控基因与子宫颈癌发病机制被引量：14
- 2010年
- P53基因是迄今发现与人类肿瘤的发生相关性最高的抑癌基因,在人类癌症中发生突变的频率高达50%。在子宫颈癌组织中表达则降低,且以野生型(wt)为主。wtP53第4外显子72密码的基因多态性与子宫颈癌发病机制密切相关。wtP53蛋白在子宫颈癌细胞中半衰期短,功能易失活,具有调节细胞周期、促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞生长的功能。其功能失活与多种基因,如E6,E7,MDM2和STAT3等基因的降解作用有关。
- 朱靖周颖凌斌
- 关键词：野生型P53人乳头瘤病毒子宫颈癌凋亡
- 人乳头瘤病毒18型E6蛋白真核表达载体的构建及其在子宫颈癌细胞株Hela细胞中的表达被引量：1
- 2010年
- 目的构建并鉴定p3×flag-myc-CMV-24-HPV18E6真核表达载体,并转染Hela细胞后,检测其在Hela细胞中的表达。方法用RT-PCR法从Hela细胞中扩增出带HindⅢ、SalⅠ酶切位点的HPV18E6基因片段,将HPV18E6基因片段连接到pMD-18T载体上,通过限制性内切酶HindⅢ、SalⅠ酶切,T4连接酶连接到含有上述酶切位点的p3×flag-myc-CMV-24真核表达载体上,通过脂质体将p3×flag-myc-CMV-24-HPV18E6转染入Hela细胞48h后,Western-blot检测HPV18E6及3×flag表达情况。结果p3×flag-myc-CMV-24-HPV18E6真核表达载体构建成功,构建的真核表达载体可以被限制性内切酶HindⅢ、SalⅠ切开,电泳可显示相应条带,经测序其序列与设计的一致,转染到Hela细胞48h后经Western-blot检测可见HPV18E6的高表达及flag的表达。结论p3×flag-myc-CMV-24HPV18E6真核表达载体的成功构建为进一步研究HPV18E6的致癌机制奠定了基础。
- 卫莹朱靖王青元范少君李敏肖卫华凌斌周颖
- 关键词：HELA细胞真核表达载体FLAG
- Grim-19对宫颈癌HeLa细胞端粒酶活性及衰老的影响被引量：3
- 2012年
- 目的重组质粒转染HeLa细胞以探讨Grim-19表达水平的变化对HeLa细胞中端粒酶活性的影响。方法将重组质粒p3×flag-myc-cmv-24-Grim-19(简写Grim-19)通过脂质体转染至HeLa细胞,48 h后通过Western blot检测Grim-19、htert、P16、P21的表达情况,同时检测HeLa细胞衰老和端粒酶活性。结果转染后可见flag的表达及htert的表达降低及P16、P21的表达升高,细胞衰老增加,增殖减弱及端粒酶活性的降低。结论在子宫颈癌细胞株HeLa中Grim-19具有调控端粒酶活性和细胞衰老的作用。
- 杨霞王青元朱靖冯定庆朱园园周颖凌斌
- 关键词：GRIM-19子宫颈腺癌HELA细胞端粒酶
- HPV16E6真核表达载体的构建及其在Caski细胞中的表达被引量：1
- 2010年
- 目的构建p3×flag-myc-CMV-24-HPV16E6真核表达载体,转染Caski细胞,检测其在Caski细胞中的表达。方法用RT-PCR法从CaSki细胞中扩增出带HindⅢ、XbalⅠ酶切位点的HPV16E6基因片段,将HPV16E6基因全长片段克隆到真核表达载体p3×flag-myc-CMV-24上,通过脂质体将p3×flag-myc-CMV-24-HPV16E6转染入Caski细胞。结果构建的p3×flag-myc-CMV-24-HPV16E6的真核表达载体转染Caski细胞48h后经Western-blot可检测到融合蛋白高表达。结论成功构建了p3×flag-myc-CMV-24-HPV16E6真核表达载体;为进一步研究HPV16E6导致子宫颈癌病变的机制奠定了基础。
- 王青元朱靖范少君周颖冯定庆李彩荣朱园园肖卫华凌斌
- GRIM-19基因表达及沉默对宫颈癌细胞株SiHa细胞中核转录因子STAT3表达的影响被引量：2
- 2010年
- 目的:构建pEGFP-C2-GRIM-19真核表达载体并设计GRIM-19siRNA干扰序列,以探讨GRIM-19表达水平的变化对SiHa细胞中核转录因子STAT3表达的影响。方法:用RT-PCR法从SiHa细胞中扩增出带HindⅢ、BamHI酶切位点的GRIM-19基因片段,将GRIM-19基因片段克隆到增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因真核表达载体pEGFP-C2上。分别将pEGFP-C2-GRIM-19及GRIM-19siRNA通过脂质体转染入SiHa细胞48h后,通过Western-blot检测GRIM-19、STAT3的表达。结果:成功构建pEGFP-C2-GRIM-19真核表达载体,转染后可见GFP表达及STAT3表达降低,转染GRIM-19siRNA后可见GRIM-19表达降低及STAT3表达升高。结论:在宫颈癌细胞株中GRIM-19具有调控STAT3表达水平的作用。
- 朱靖卫莹王青元齐丽敏李敏肖卫华凌斌周颖
- 关键词：宫颈肿瘤SIHA细胞
- GRIM-19及其截断体原核表达载体的构建及表达与纯化
- 2012年
- 目的构建GRIM-19及其截断体原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达并纯化融合蛋白。方法用RT-PCR法从HeLa细胞中扩增出带BamHⅠ、XhoⅠ酶切位点的GRIM-19及其截断体基因片段,将GRIM-19及其截断体基因片段克隆到pGEX-4T-3原核表达载体上,在大肠杆菌中诱导表达GST-GRIM-19及其截断体融合蛋白,用Glutathione Sepharose 4B纯化,纯化后蛋白经Western-blot鉴定。结果 pGEX-4T-3-GRIM-19及其截断体原核表达载体构建正确,并在大肠杆菌中成功诱导表达,IPTG诱导以浓度0.5mM,时间2h为宜,且通过Glutathione Sepharose4B成功纯化到融合蛋白。结论成功构建GRIM-19及其截断体原核表达载体,诱导表达并纯化GST-GRIM-19及其截断体融合蛋白。
- 王青元朱靖周颖许乾乾朱圆圆凌斌
- 关键词：GRIM-19纯化
- GRIM-19及其靶基因产物STAT3与子宫颈癌的相关性被引量：1
- 2010年
- 目的:通过研究干扰素/维甲酸联合应用诱导细胞凋亡相关基因19(GR IM-19)及其靶基因产物转录信号子与激活子3(STAT3)在子宫颈癌组织中的表达情况,探讨GR IM-19及其靶基因产物在子宫颈癌发病中的作用。方法:采用W estern B lotting和RT-PCR方法检测40例子宫颈癌组织和30例正常子宫颈组织中GR IM-19与STAT3及下游基因的表达情况。结果:在子宫颈癌组织中STAT3 mRNA与蛋白均高表达,STAT3下游基因Cyc linB1和Bc l-2L1 mRNA高表达,而GR IM-19mRNA及蛋白表达在癌组织中均明显低于正常组织(P<0.05)。结论:GR IM-19与STAT3在子宫颈癌组织中表达呈负相关,GR IM-19在子宫颈癌组织中的低表达可能与子宫颈癌的发生与发展密切相关。
- 卫莹凌斌李敏朱靖范少君冯定庆肖卫华周颖
- 关键词：子宫颈肿瘤STAT3基因
