王青元
- 作品数：10 被引量：14H指数：3
- 供职机构：安徽医科大学附属省立医院更多>>
- 发文基金：安徽省自然科学基金国家自然科学基金安徽省高校省级自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- GRIM-19及其截断体原核表达载体的构建及表达与纯化
- 2012年
- 目的构建GRIM-19及其截断体原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达并纯化融合蛋白。方法用RT-PCR法从HeLa细胞中扩增出带BamHⅠ、XhoⅠ酶切位点的GRIM-19及其截断体基因片段,将GRIM-19及其截断体基因片段克隆到pGEX-4T-3原核表达载体上,在大肠杆菌中诱导表达GST-GRIM-19及其截断体融合蛋白,用Glutathione Sepharose 4B纯化,纯化后蛋白经Western-blot鉴定。结果 pGEX-4T-3-GRIM-19及其截断体原核表达载体构建正确,并在大肠杆菌中成功诱导表达,IPTG诱导以浓度0.5mM,时间2h为宜,且通过Glutathione Sepharose4B成功纯化到融合蛋白。结论成功构建GRIM-19及其截断体原核表达载体,诱导表达并纯化GST-GRIM-19及其截断体融合蛋白。
- 王青元朱靖周颖许乾乾朱圆圆凌斌
- 关键词：GRIM-19纯化
- 人乳头瘤病毒18型E6蛋白真核表达载体的构建及其在子宫颈癌细胞株Hela细胞中的表达被引量：1
- 2010年
- 目的构建并鉴定p3×flag-myc-CMV-24-HPV18E6真核表达载体,并转染Hela细胞后,检测其在Hela细胞中的表达。方法用RT-PCR法从Hela细胞中扩增出带HindⅢ、SalⅠ酶切位点的HPV18E6基因片段,将HPV18E6基因片段连接到pMD-18T载体上,通过限制性内切酶HindⅢ、SalⅠ酶切,T4连接酶连接到含有上述酶切位点的p3×flag-myc-CMV-24真核表达载体上,通过脂质体将p3×flag-myc-CMV-24-HPV18E6转染入Hela细胞48h后,Western-blot检测HPV18E6及3×flag表达情况。结果p3×flag-myc-CMV-24-HPV18E6真核表达载体构建成功,构建的真核表达载体可以被限制性内切酶HindⅢ、SalⅠ切开,电泳可显示相应条带,经测序其序列与设计的一致,转染到Hela细胞48h后经Western-blot检测可见HPV18E6的高表达及flag的表达。结论p3×flag-myc-CMV-24HPV18E6真核表达载体的成功构建为进一步研究HPV18E6的致癌机制奠定了基础。
- 卫莹朱靖王青元范少君李敏肖卫华凌斌周颖
- 关键词：HELA细胞真核表达载体FLAG
- Grim-19对宫颈癌HeLa细胞端粒酶活性及衰老的影响被引量：3
- 2012年
- 目的重组质粒转染HeLa细胞以探讨Grim-19表达水平的变化对HeLa细胞中端粒酶活性的影响。方法将重组质粒p3×flag-myc-cmv-24-Grim-19(简写Grim-19)通过脂质体转染至HeLa细胞,48 h后通过Western blot检测Grim-19、htert、P16、P21的表达情况,同时检测HeLa细胞衰老和端粒酶活性。结果转染后可见flag的表达及htert的表达降低及P16、P21的表达升高,细胞衰老增加,增殖减弱及端粒酶活性的降低。结论在子宫颈癌细胞株HeLa中Grim-19具有调控端粒酶活性和细胞衰老的作用。
- 杨霞王青元朱靖冯定庆朱园园周颖凌斌
- 关键词：GRIM-19子宫颈腺癌HELA细胞端粒酶
- HPV16E6真核表达载体的构建及其在Caski细胞中的表达被引量：1
- 2010年
- 目的构建p3×flag-myc-CMV-24-HPV16E6真核表达载体,转染Caski细胞,检测其在Caski细胞中的表达。方法用RT-PCR法从CaSki细胞中扩增出带HindⅢ、XbalⅠ酶切位点的HPV16E6基因片段,将HPV16E6基因全长片段克隆到真核表达载体p3×flag-myc-CMV-24上,通过脂质体将p3×flag-myc-CMV-24-HPV16E6转染入Caski细胞。结果构建的p3×flag-myc-CMV-24-HPV16E6的真核表达载体转染Caski细胞48h后经Western-blot可检测到融合蛋白高表达。结论成功构建了p3×flag-myc-CMV-24-HPV16E6真核表达载体;为进一步研究HPV16E6导致子宫颈癌病变的机制奠定了基础。
- 王青元朱靖范少君周颖冯定庆李彩荣朱园园肖卫华凌斌
- 一种新型分离宫颈脱落细胞的方法
- 本发明公开了一种新型分离宫颈脱落细胞的方法，其特征是首先取宫颈脱落细胞于PBS磷酸缓冲液中，涡旋混匀得细胞悬液；将细胞悬液加入粘液分离液中；经离心、弃上清液后再次加入PBS磷酸缓冲液，重悬沉淀物，得到重悬的细胞悬液；将重...
- 凌斌周颖李敏许乾乾冯定庆朱园园沈国栋李彩荣卫莹雷蕾王青元朱靖姚凤球
- 文献传递
- HPV16E6真核表达载体的构建及其在CaSki细胞中的表达及定位被引量：3
- 2011年
- 目的:构建pEGFP-C2-HPV16E6真核表达载体,转染CaSki细胞,检测其在CaSki细胞中的表达。方法:用RT-PCR法从CaSki细胞中扩增出带有HindⅢ、XbaⅠ酶切位点的HPV16E6基因片段,将HPV16E6基因全长片段克隆到增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因真核表达载体pEGFP-C2上,通过脂质体将pEGFP-C2-HPV16E6转染入CaSki细胞。结果:pEGFP-C2-HPV16E6真核表达载体构建成功,转染CaSki细胞48h后经RT-PCR及Western-blot检测可见HPV16E6蛋白的高表达,激光共聚焦显微镜观察融合蛋白主要在CaSki细胞核内表达。结论:成功构建了pEGFP-C2-HPV16E6真核表达载体,为进一步对HPV16E6的研究奠定了基础。
- 王青元周颖杨霞李兵陶峰朱圆圆凌斌
- 关键词：CASKI细胞HPV16E6真核表达载体
- GRIM-19基因表达及沉默对宫颈癌细胞株SiHa细胞中核转录因子STAT3表达的影响被引量：2
- 2010年
- 目的:构建pEGFP-C2-GRIM-19真核表达载体并设计GRIM-19siRNA干扰序列,以探讨GRIM-19表达水平的变化对SiHa细胞中核转录因子STAT3表达的影响。方法:用RT-PCR法从SiHa细胞中扩增出带HindⅢ、BamHI酶切位点的GRIM-19基因片段,将GRIM-19基因片段克隆到增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因真核表达载体pEGFP-C2上。分别将pEGFP-C2-GRIM-19及GRIM-19siRNA通过脂质体转染入SiHa细胞48h后,通过Western-blot检测GRIM-19、STAT3的表达。结果:成功构建pEGFP-C2-GRIM-19真核表达载体,转染后可见GFP表达及STAT3表达降低,转染GRIM-19siRNA后可见GRIM-19表达降低及STAT3表达升高。结论:在宫颈癌细胞株中GRIM-19具有调控STAT3表达水平的作用。
- 朱靖卫莹王青元齐丽敏李敏肖卫华凌斌周颖
- 关键词：宫颈肿瘤SIHA细胞
- GRIM-19与E6和E6AP的蛋白相互作用及作用位点的研究
- 研究背景
子宫颈癌是女性生殖系统三大恶性肿瘤中最常见的恶性肿瘤，严重威胁着女性的健康和生命。全世界每年大约有50万新发子宫颈癌病例，约23万女性死于子宫颈癌，其中大部分（80/%左右）发生在发展中国家。其中发病率...
- 王青元
- 关键词：子宫颈肿瘤GRIM-19HPV16E6
- 文献传递
- TAp63γ抑制宫颈癌细胞株SiHa端粒酶活性及对细胞生长动力学的影响
- 2012年
- 目的:探讨TAp63γ的表达对宫颈癌细胞端粒酶活性及生长动力学的影响。方法:通过瞬时转染TAp63γ真核表达载体提高SiHa细胞中TAp63γ的表达水平并经RT-PCR及Western blot验证;通过PCR-ELISA试剂盒检测细胞的端粒酶活性,通过MTT检测细胞增殖及对顺铂的敏感性,通过衰老相关β-半乳糖苷酶染色法检测衰老细胞。结果:与对照组相比,转染TAp63γ的SiHa细胞中端粒酶活性显著下降,差异有统计学意义(P<0.05);细胞增殖减慢,差异有统计学意义(P<0.05);对顺铂敏感性增强,差异有统计学意义(P<0.05);对照组细胞衰老比例为(8±1.5)%;而转染TAp63γ组的衰老细胞比例为(39±8.6)%,明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:TAp63γ具有抑制宫颈癌细胞端粒酶活性的作用,可能是针对宫颈癌细胞生长动力学治疗的新靶点基因。
- 王青元周颖许乾乾杨霞朱园园冯定庆凌斌
- 关键词：P63端粒酶
- GRIM-19原核表达载体的构建及GST-GRIM-19的诱导表达与纯化被引量：4
- 2011年
- 目的构建GRIM-19原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达并纯化GST-GRIM-19融合蛋白。方法用RT-PCR法从HeLa细胞中扩增出含BamHⅠ、XhoⅠ酶切位点的GRIM-19基因片段,将其克隆至pGEX-4T-3原核表达载体上,在大肠杆菌中诱导表达GST-GRIM-19融合蛋白,用Glu-tathione Sepharose 4B纯化,纯化后蛋白经Western blot鉴定。结果构建pGEX-4T-3-GRIM-19原核表达载体成功,表达的GST-GRIM-19融合蛋白相对分子质量约45 ku,浓度0.1mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导2 h,并成功纯化到融合蛋白。结论成功构建GRIM-19原核表达载体,诱导表达并纯化GST-GRIM-19融合蛋白。
- 朱靖周颖王青元冯定庆朱园园李彩荣凌斌
- 关键词：原核细胞重组融合蛋白质类
