杨永娟
- 作品数：3 被引量：6H指数：1
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- 感染复数对Sabin株脊髓灰质炎病毒在Vero细胞中增殖的影响被引量：1
- 2008年
- 目的观察不同感染复数(MOI)对Sabin株脊髓灰质炎病毒在Vero细胞中增殖的影响。方法分别用Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin株脊髓灰质炎病毒感染Vero细胞,观察不同MOI致细胞病变情况,并检测病毒滴度。结果病毒感染Vero细胞后48h,3组MOI(0.001、0.01、0.1)细胞病变均达莞。Ⅰ型病毒增殖高峰出现在接种后72h,3组MOI病毒滴度分别为(8.690±0.190)、(8.690±0.190)和(8.315±0.185)lgCCID50/ml;Ⅱ型病毒增殖高峰出现在接种后96h,3组MOI病毒滴度分别为(8.355±0.097)、(8.440±0.310)和(8.285±0.155)lgCCID50/ml;Ⅲ型病毒增殖高峰出现在接种后48～96h,3组MOI病毒最高滴度分别为(7.500±0.250)、(7.500±0.250)和(7.750±0.250)lgCCID50/ml。结论不同MOI对3型病毒增殖影响不大,可以采用低MO(I0.001)制备疫苗。
- 石慧颖张冲李懿杨永娟宋冬梅陈明宁海京刘宇赵敏支惠沈心亮
- 关键词：脊髓灰质炎病毒病毒增殖灭活疫苗
- 肠病毒71型空斑检测方法的建立被引量：4
- 2009年
- 目的建立肠病毒71型(EV71)空斑检测方法,为EV71生物学特性及疫苗的研究提供手段。方法将不同稀释度的5株EV71分别接种至单层RD细胞和Vero细胞,加入甲基纤维素覆盖,计数空斑,并计算病毒滴度。通过3次连续检测,验证空斑法的精密性,并对空斑法与微量细胞病变法检测病毒滴度的结果进行比较。结果采用RD细胞和Vero细胞,通过空斑法对EV71病毒滴度进行检测,96h后均能规律地出现边缘整齐、清晰的空斑,RD细胞和Vero细胞检测的空斑直径分别为1～2mm和0.5～1mm。连续3次重复试验结果显示,试验间变异系数的平均值Vero细胞为2.52%,RD细胞为4.49%。空斑法与微量细胞病变法比较,其检测结果具有良好的线性相关性,相关系数为r=0.972,P=0.006。结论已建立了精密性好、出斑规律的EV71病毒空斑检测方法。
- 郝春生赵敏张晨何薇薇王潇潇杨永娟张中洋沈心亮李秀玲
- 关键词：肠病毒71型
- 肠病毒71型分离株的鉴定及免疫原性研究被引量：1
- 2009年
- 目的在对肠病毒71型（enterovirus 71，EV71）分离株进行鉴定的基础上，对其诱导小鼠产生的免疫应答水平进行研究，拟为进一步的EV71候选疫苗研究奠定基础。方法超速离心纯化病毒后，采用磷钨酸负染法通过电镜观察病毒形态、大小；采用特异性EV71单抗通过间接免疫荧光法（IFA）检测病毒的特异性；合成EV71特异性引物，通过RT—PCR对病毒进行分子生物学鉴定；病毒的VP1基因序列测定后，与其他EV71序列进行比较，绘制种系发育树，确定病毒基因型；通过腹腔注射途径免疫小鼠，免疫后分离血清通过微量细胞病变抑制法测定血清中和抗体效价，ELISA法检测血清抗体水平和抗体亚型水平。结果电镜下可观察到典型的圆形病毒颗粒，直径为20～30nm，呈典型的肠病毒形态；085和087株病毒感染细胞中均能观察到黄绿色荧光，提示该两株病毒可与EV71单抗特异性结合；RT—PCR可以从病毒感染细胞中扩增出226bp大小的特异性产物带，而采用CA16特异性引物则不能扩增出相应大小的产物带；基于VP1基因序列的种系发育分析显示，087和085株均为c4基因型；085和087株E、EV71免疫小鼠后可诱导产生能中和包括其本身在内的多个病毒株的中和抗体，针对同一株中和病毒，实验组间差异无统计学意义；针对不同中和病毒株，各实验组中和本株、523-07T株的能力明显高于FY-02T株（P〈0．05）；ELISA法检测结果显示，接种灭活前后的EV71病毒085和087株后均能诱导小鼠产生抗EV71特异性IgG；IgG亚型为IgG1／IgG2a混合型，灭活病毒免疫组小鼠血清EV71特异性IgG、IgG1、IgG2a水平明显高于活病毒免疫组（P〈0．05）。两株病毒之间差异无统计学意义。结论本研究分离到的085和087株病毒均为EV71CA基因亚型，并具有一定的免疫原性。
- 李秀玲张中洋王潇潇杨永娟郝春生赵敏何薇薇张晨沈心亮
- 关键词：肠病毒71型免疫原性
