杨金国
- 作品数：5 被引量：10H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 胎儿弯杆菌表面蛋白(SapA)基因的分段表达及其免疫原性分析被引量：7
- 2008年
- 应用PCR方法扩增出胎儿弯杆菌表面蛋白基因(SapA)的2个基因片段SapA-N(1398bp)和SapA-C(1422bp),采用DNA重组技术,将2个基因片段分别连接于表达载体pET32a(+),并在大肠杆菌中诱导表达(rSapA-N和rSapA-C),用金属鳌合层析的方法纯化蛋白。以Western blot检测重组蛋白的免疫学活性,ELISA试验分析2种蛋白用于胎儿弯杆菌病血清学诊断的可能性。结果表明,以可溶形式表达的2部分蛋白分子量大小约66ku,与预期大小相符。纯化的蛋白均具有良好的免疫学活性,但蛋白rSapA-N比蛋白rSapA-C的免疫学活性高,rSapA-N具有良好的胎儿弯杆菌病血清学诊断的应用价值。
- 赵海玲刘思国刘慧芳王春来司微杜艳芬杨金国林靖凯
- 关键词：原核表达纯化ELISA
- 利用Red重组系统敲除大肠杆菌菌株ClpP基因方法的研究被引量：1
- 2011年
- 为了研究ClpP基因的功能,试验利用Red系统的重组功能,通过PCR扩增出两端与大肠杆菌菌株ClpP基因上、下游序列同源,中间为氯霉素抗性基因cat的DNA片段,电击转化含质粒pKD46的大肠杆菌菌株DH091,筛选替换ClpP基因的阳性转化子,再导入质粒pCP20去除氯霉素抗性基因。结果表明:成功敲除大肠杆菌菌株ClpP基因。
- 司微刘慧芳王春来彭玮赫明雷杜艳芬赵海玲王聃杨金国林靖凯倪洪波刘思国
- 关键词：RED重组系统基因敲除
- 胎儿弯杆菌表面蛋白SapA抗原单克隆抗体的制备
- 2009年
- 用原核表达的重组胎儿弯杆菌毒力因子表面蛋白(rSapA-N)免疫小鼠,采用细胞融合技术,共获得2株抗rSapA-N的单克隆抗体(MAb),经Ig亚类鉴定,均为IgG1,轻链为κ链;Western blot证实这2株MAb均能与rSapA-N发生特异性反应,而与其它蛋白则不发生反应;以这2株MAb的杂交瘤细胞制备腹水,效价达到1∶100 000和1∶60 000。本研究制备的MAb,为研究和检测胎儿弯杆菌提供了一种重要的手段。
- 赵海玲林靖凯杜艳芬刘慧芳司微王春来王聃赫明雷彭玮杨金国刘思国
- 关键词：免疫单克隆抗体
- 猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型信号标签诱导突变体库的构建
- 2009年
- 本研究以自杀性质粒pUT携带含有信号标签的Mini-Tn5转座子对猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型菌进行转座诱变,构建了带有12对特异性信号标签的Mini-Tn5转座子的pUT自杀质粒,转化到供体菌E.coliβ2155后,利用双亲本滤膜杂交法与受体猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型菌(APP1)进行接合转移,构建并优化了接合转移体系。利用抗性和营养缺陷培养平板筛选得到接合突变体,通过抗性通用引物与12个特异标签引物和胸膜肺炎放线杆菌毒素IV(ApxIV)鉴定引物分别对这些突变体进行了PCR鉴定和测序验证。结果表明,经过加入标签的Mini-Tn5转座子可以通过接合转移的方式从供体菌E.coliβ2155中插入到APP1基因组当中,并成功构建了12个含有特异信号标签的重组质粒,获得了APP1的12个转座突变体库,经筛选鉴定后得到561个突变株。这为研究APP1的功能基因和筛选特定突变株提供了必要的基础。
- 赫明雷刘慧芳刘思国司薇王春来杨金国杜艳芬王聃
- 关键词：胸膜肺炎放线杆菌转座子
- 禽分枝杆菌副结核亚种重组蛋白r22-ag85B的表达及纯化被引量：2
- 2009年
- 为表达并纯化禽分枝杆菌副结核亚种主要抗原基因的串联重组蛋白r22-ag85B,期望研制出一种新型副结核病疫苗,以禽分枝杆菌副结核亚种参考株P18的基因组DNA为模板,扩增了22KD基因和ag85B基因。采用重叠延伸剪接PCR技术(SOE-PCR)获得了融合基因22-ag85B,将基因连接于表达载体pET32a(+),构建了重组质粒pET22-ag85B。将其转化到大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中,以IPTG(终浓度1mmol/L)诱导后对表达产物进行Western blot检测。检测结果显示,成功表达并纯化了重组蛋白r22-ag85B,其分子质量约为65ku。Western blot检测表明此蛋白具有良好的免疫学活性。禽分枝杆菌副结核亚种22-ag85B重组蛋白的成功表达及纯化为副结核病疫苗的研究工作奠定了基础。
- 杨金国王聃刘慧芳杜艳芬司微赵海玲林靖凯王春来倪红波赫明雷彭玮赵福广刘思国
