梁淑娟
- 作品数：99 被引量：206H指数：7
- 供职机构：潍坊医学院基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山东省科技攻关计划山东省研究生教育创新计划更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学生物学哲学宗教更多>>
- 小鼠IL-1β在H22细胞的表达及对NK细胞杀伤活性的影响被引量：5
- 2007年
- 目的:重组表达小鼠IL-1β全长基因,转染H22肝癌细胞,分析对NK细胞杀伤活性的影响。方法:构建小鼠IL-1β重组表达载体pIRES2-EGFP-mIL-1β,利用jetPEI转染H22肝癌细胞,RT-PCR和激光扫描共聚焦显微镜分析IL-1β重组载体的表达,MTT方法分析转染前后,野生型小鼠脾脏NK细胞对H22细胞杀伤活性的变化。结果:RT-PCR扩增出小鼠IL-1β,长度约843bp。纯化的PCR产物与pIRES2-EG-FP同时经XhoI和EcoRI双酶切,在T4连接酶作用下连接,转化大肠杆菌,提取质粒经PCR、限制性酶谱分析(XhoI+EcoRI)和DNA序列测定后,确认获得重组表达载体pIRES2-EGFP-mIL-1β。将该质粒转染至H22小鼠肝癌细胞中,RT-PCR和荧光观察证实,H22细胞能表达高水平IL-1β重组表达载体,与转染空载体的对照组细胞相比,IL-1β转基因后H22细胞对NK92细胞杀伤抵抗性明显增强,同时野生型小鼠脾脏NK细胞对pIRES2-EGFP-mIL-1β转基因细胞的杀伤活性明显下降,效靶比40:1时下降了约10%。结论:IL-1β能够明显增强H22肝癌细胞对NK细胞杀伤的抵抗性,可能是肝癌细胞借以逃逸天然免疫应答的重要机制。
- 肖伟玲梁淑娟牟东珍王雪净吴慧娜
- 关键词：IL-1ΒNK细胞天然免疫肝癌
- mOX40-hIgG1Fc的构建、表达及其生物学活性的初步研究
- 目的:构建mOX40-hIsG1Fc融合蛋白真核表达载体,转染COS-7细胞进行表达获得mOX40-hIgG1Fc融合蛋白,并通过体外实验初步研究其生物学效应,为OX40分子的进一步研究奠定良好的基础。方法:①Trizo...
- 刘艳菲冯永堂牟东珍苗乃法梁淑娟王丽娜邸大琳吴国庆魏兵孙萍
- 关键词：OX40COS-7细胞
- 文献传递
- 三质粒慢病毒包装细胞体系的构建及其感染效率检测被引量：4
- 2013年
- 目的建立一种基于三质粒的慢病毒包装细胞体系并对其感染效率进行检测。方法利用双酶切方法构建一个pLVTHM重组慢病毒表达载体，然后与pSPAX2，pMD2．G共转染HEK293T获取慢病毒原液，利用高速离心的方法对其进行浓缩纯化。设定不同感染复数（1，5，10，15，20），将上述制备的慢病毒制品感染HEK293T和HepG2肝癌细胞，荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达水平以确认制备的病毒是否成功，其感染效率如何。结果利用一段非沉默性基因片段，构建了一个pLVTHM重组慢病毒表达栽体，将其与两个包装质粒共转染HEK293T细胞后，荧光显微镜下可见发出明亮绿色荧光，证明上述栽体成功转染到包装细胞中。于转染后42h和66h分剐收集细胞培养上清，获得含有慢病毒的原液，对病毒进行浓缩后获得浓度为l×10^8Tu／ml的病毒浓缩液。利用浓缩的病毒感染HEK293T和HepG2细胞，随着感染时间及感染复数值的增加，细胞内绿色荧光表达明显增强，感染后24h时HEK293T细胞内即可见明亮绿色荧光，其感染效率约为60％；在较难进行基因转染的HepG2细胞中，感染后24h后约40％的细胞可见明亮绿色荧光。结论成功建立了三质粒慢病毒包装细胞体系，该体系可成功表达含有目的基因的慢病毒，为后续系列研究提供了重要的工作平台。
- 岳翠青邵华明林志娟刘艳菲吴国庆梁淑娟
- 关键词：慢病毒载体
- IgG抗体亲和肽-碱性磷酸酶融合蛋白
- 本发明公开了一种IgG抗体亲和肽-碱性磷酸酶融合蛋白，是IgG抗体亲和肽和碱性磷酸酶构成的融合蛋白，能作为替代酶标记抗体用于免疫测定，其一经产生即具有与IgG抗体的结合活性和AP催化活性，且二者标记比例为1∶1；该融合蛋...
- 唐金宝杨洪鸣梁淑娟陈永
- 利用智慧教学工具开展知识系统化重构教学——以“计算机网络基础与应用”课程为例被引量：22
- 2020年
- 为推动知识由点及面、由碎片化向系统化的发展,文章提出利用智慧教学工具开展知识系统化重构教学,并对其流程进行了详细梳理。随后,文章以"计算机网络基础与应用"课程为例,按照教学改革的具体实施过程,利用智慧教学工具"超星学习通"开展了知识系统化重构教学,并通过问卷调查和成绩分析验证了教学效果。实践表明,利用智慧教学工具开展知识系统化重构教学,有助于提高学生对知识的综合应用能力,学生满意度较高,教学效果显著,有较大的推广价值。
- 刘建明徐莉莉梁淑娟
- 关键词：知识系统化教学重构
- OX40L基因修饰肿瘤细胞疫苗的构建及其生物学活性初步研究
- ＜正＞目的用RT-PCR法获取小鼠OX40L基因,构建OX40L真核表达载体,转染H22肝癌细胞获得表达OX40L的肿瘤细胞疫苗,并初步研究其生物学活性。方法（1）用TRIzol抽提活化脾细胞的总RNA,用RT-PCR法...
- 冯永堂王菲原江水邸大琳梁淑娟牟东珍苗乃法吴国庆魏兵
- 关键词：OX40L协同刺激信号肿瘤免疫细胞瘤苗
- 文献传递
- 小鼠分泌型IL-1β真核表达载体的构建及其表达
- 2011年
- 目的:构建小鼠经典分泌途径IL-1β真核表达载体,转染至Hepa1-6细胞,并测定其分泌表达水平。方法:引物延伸获得小鼠AFP信号肽序列(sAFP),RT-PCR扩增获得小鼠IL-1β成熟蛋白基因序列(mIL-1β),SOE方法将两段序列拼接形成融合基因,与pIRES2-EGFP质粒重组构建分泌型真核表达载体pIRES2-EGFP-smIL-1β,并将其转染至Hepa1-6细胞,RT-PCR检测融合基因的表达水平,Western blot检测细胞内mIL-1β蛋白的表达,ELISA法测定培养上清及细胞裂解液中mIL-1β水平。结果:经SOE法拼接获得的融合基因与GenBank中登录的序列一致,RT-PCR检测显示该载体能够在Hepa1-6细胞中表达融合基因mRNA,细胞培养上清中mIL-1β的分泌水平明显上升,而胞质中的mIL-1β无明显变化。结论:成功地构建了经典途径分泌的mIL-1β重组表达载体,该载体可以在Hepa1-6细胞培养上清中有效分泌具有生物活性的mIL-1β。
- 肖伟玲王雪净牟东珍林志娟王焕芹梁淑娟
- 关键词：信号肽分泌表达
- AFP启动子调控的IL-1β表达对肝癌细胞生物学行为的影响
- 目的建立能够在肿瘤细胞中特异性表达高水平促炎性细胞因子IL-1β的真核表达载体,转染小鼠肝癌细胞建立皮下荷瘤模型,研究IL-1β对肝癌发生发展的影响,从而为肝脏肿瘤免疫逃逸机理的研究提供实验依据。
- 李青春梁淑娟刘艳艳王焕芹肖伟玲张素华
- 文献传递
- STAT3 shRNA慢病毒对肝癌细胞生长迁移浸润能力的影响
- 研究背景:STAT3(Signal Transducers andActivators of Transcription,STAT)信号转导在多种肿瘤细胞中处于持续活化状态,过度活化的STAT3与肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭...
- 李潇芳王玉琦付晓燕闫奔房佩佩朱耀强梁淑娟
- 关键词：STAT3慢病毒肝癌细胞SHRNA
- 文献传递
- 从红毛五加多糖提取液中高效快速脱除蛋白及色素的方法
- 本发明提供了一种红毛五加多糖提取液脱蛋白、脱色素方法，在提取液中加入蛋白酶将蛋白质分子降解后，借助反胶束溶液处理技术将其中的蛋白质分子和色素分子一起去除，通过蛋白酶‑CTAB联合处理实现了蛋白类、色素类杂质的同步高效率去...
- 陈永吴江梁淑娟
- 文献传递
