肖伟玲
- 作品数：32 被引量：28H指数：3
- 供职机构：潍坊医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山东省科技攻关计划山东省优秀中青年科学家科研奖励基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- IL-1β对Hepa1-6细胞增殖、迁移及IFN应答的影响被引量：1
- 2011年
- 目的:构建应用于小鼠肝脏内表达和研究的IL-1β肝癌细胞特异性表达载体,观察其对小鼠Hepa1-6细胞体外增殖活性、迁移能力及干扰素增殖抑制效应等体外生物学行为的影响。方法:由C57BL/6小鼠腹腔液巨噬细胞扩增IL-1β基因,构建肝脏特异性pLIVE-IL-1β重组表达载体。利用transIT-LT1将鉴定后的pLIVE-IL-1β转染至Hepa1-6肝癌细胞,RT-PCR及双抗体夹心ELISA法分析转染前后IL-1表达水平,MTT法分析IL-1对细胞体外增殖活性的影响;利用细胞划痕实验分析对其迁移能力的影响,并确定对IFN-α诱导的细胞增殖抑制效应的作用。结果:重组载体经限制性酶谱分析酶解出822bp的条带,其序列与GenBank登录的小鼠IL-1β基因一致;转染后的Hepa1-6细胞培养上清中IL-1β的表达明显增高,细胞体外增殖速度明显加快;给予IFN-α作用后,IL-1β的表达使细胞对干扰素的抵抗性明显增强。结论:小鼠IL-1β肝癌组织特异性表达载体pLIVE-IL-1β能够在小鼠肝癌细胞中高效表达IL-1β,并能够显著促进肿瘤的体外增殖和迁移能力,削弱IFN-α对Hepa1-6细胞的增殖抑制作用。
- 林志娟梁淑娟王焕芹李艳平肖伟玲
- 关键词：IL-1Β肝癌NK细胞促炎性细胞因子干扰素
- IL-1β反义RNA肝癌特异性表达载体对肝癌恶性生物学行为的影响
- 目的:构建小鼠IL-1β反义RNA表达载体,探讨靶向阻断IL-1β后对肝癌细胞浸润与生长行为的影响及分子机制。方法:RT-PCR分别扩增小鼠IL-1β1(264bp)和IL-1β2(284bp)基因片段,首先经
- 刘艳艳梁淑娟肖伟玲王焕芹李青春张素华
- 文献传递
- pLIVE-mIL-1β在小鼠肝癌细胞中的稳定表达对
- 目的:利用可以在实验动物肝脏中达到高效、持续、特异性表达的载体系统pLIVE Vector,构建小鼠IL-1β真核表达载体pLIVE-mIL-1β,转染小鼠Hepa1-6肝癌细胞,观察目的基因的稳定表达及对细胞增殖和NK...
- 王焕芹梁淑娟肖伟玲刘艳艳李青春张素华
- 文献传递
- 小鼠IL-1β在H22细胞的表达及对NK细胞杀伤活性的影响被引量：5
- 2007年
- 目的:重组表达小鼠IL-1β全长基因,转染H22肝癌细胞,分析对NK细胞杀伤活性的影响。方法:构建小鼠IL-1β重组表达载体pIRES2-EGFP-mIL-1β,利用jetPEI转染H22肝癌细胞,RT-PCR和激光扫描共聚焦显微镜分析IL-1β重组载体的表达,MTT方法分析转染前后,野生型小鼠脾脏NK细胞对H22细胞杀伤活性的变化。结果:RT-PCR扩增出小鼠IL-1β,长度约843bp。纯化的PCR产物与pIRES2-EG-FP同时经XhoI和EcoRI双酶切,在T4连接酶作用下连接,转化大肠杆菌,提取质粒经PCR、限制性酶谱分析(XhoI+EcoRI)和DNA序列测定后,确认获得重组表达载体pIRES2-EGFP-mIL-1β。将该质粒转染至H22小鼠肝癌细胞中,RT-PCR和荧光观察证实,H22细胞能表达高水平IL-1β重组表达载体,与转染空载体的对照组细胞相比,IL-1β转基因后H22细胞对NK92细胞杀伤抵抗性明显增强,同时野生型小鼠脾脏NK细胞对pIRES2-EGFP-mIL-1β转基因细胞的杀伤活性明显下降,效靶比40:1时下降了约10%。结论:IL-1β能够明显增强H22肝癌细胞对NK细胞杀伤的抵抗性,可能是肝癌细胞借以逃逸天然免疫应答的重要机制。
- 肖伟玲梁淑娟牟东珍王雪净吴慧娜
- 关键词：IL-1ΒNK细胞天然免疫肝癌
- 慢病毒介导的IL-1b过表达对肝癌细胞肿瘤生物学行为的影响
- 研究背景:促炎性细胞因子IL-1b在肿瘤形成和肿瘤侵袭转移的过程中具有重要的调节作用,其本身属于经由非经典途径分泌进入组织液的蛋白质。目的:利用经典分泌途径和非经典分泌途径表达人IL-1b的慢病毒感染肝癌细胞HepG2,...
- 林志娟李娜肖伟玲付晓燕邸大琳梁淑娟
- 关键词：IL-1B肝癌细胞慢病毒
- 文献传递
- IL-1β反义RNA表达载体的构建及对肝癌细胞中IL-1β水平的影响
- 2008年
- 目的构建小鼠IL-1β反义RNA表达载体,观察对肝癌细胞中IL-1β表达的阻断效果。方法提取细胞总RNA,RT-PCR扩增IL-1β1和IL-1β2,将其反向连接到肝癌组织特异性表达载体PafpIRES2-EGFP,构建PafpIRES2-antiIL-1β1和PafpIRES2-antiIL-1β2反义RNA表达载体,利用jetPEI转染H22肝癌细胞和YAC-1淋巴细胞,荧光显微镜下观察反义RNA载体的表达,RT-PCR方法分析H22细胞中IL-1β表达水平的变化。结果RT-PCR扩增到两条长度分别为264和284bp的片段,与IL-1β1和IL-1β2相符,将其反向与PafpIRES2-EGFP连接,经菌落PCR和DNA序列分析证实,获得了PafpIRES2-antiIL-1β1和PafpIRES2-antiIL-1β2反义RNA表达载体。上述载体转染H22细胞后,荧光显微镜下可见细胞表达出明亮绿色荧光,而YAC-1细胞则未见荧光。RT-PCR分析证实转染反义RNA后H22细胞中IL-1β表达水平明显下降,尤以IL-1β2反义RNA的阻断效果更为显著。结论成功构建了小鼠IL-1β肝癌细胞特异性反义RNA表达载体PafpIRES2-antiIL-1β1,PafpIRES2-antiIL-1β2,两载体能有效地阻断肝癌细胞中IL-1β的表达。
- 梁淑娟吴慧娜肖伟玲牟东珍刘艳艳
- 关键词：IL-1Β反义RNA肝癌
- 带有人红细胞生成素信号肽序列的IL-1β基因在HepG2细胞中的表达被引量：1
- 2014年
- 目的构建由经典分泌途径和非经典途径表达人IL-1β的慢病毒载体,制备慢病毒后,感染HepG2肝癌细胞,比较肝癌细胞中IL-1β表达的水平。方法分别以表达人IL-1β前体蛋白基因和人红细胞生成素(EPO)信号肽序列与IL-1β成熟蛋白融合基因的pIRES2-EGFP-proIL-1β和pIRES2-EGFP-epoIL-1β质粒为模板,PCR扩增获得人IL-1β全长基因和含有EPO信号肽与IL-1β成熟蛋白融合基因的序列,将其分别克隆入pLenti6/V5慢病毒载体中,构建由非经典途径和经典途径分泌IL-1β的pLenti6/V5-proIL-1β和pLenti6/V5-epoIL-1β慢病毒表达载体。利用三质粒包装体系在HEK293T细胞中包装生产慢病毒,随后感染HepG2肝癌细胞,双抗体夹心ELISA和Western blot法检测细胞质和培养上清中IL-1β的表达水平。结果构建了含有人IL-1β全长基因和含有EPO信号肽与IL-1β成熟蛋白融合基因的pLenti6/V5-proIL-1β和pLenti6/V5-epoIL-1β慢病毒载体,经双酶切和DNA测序证实与基因库中登录的人IL-1β以及EPO信号肽序列一致。利用三质粒系统包装制备经不同途径表达IL-1β的慢病毒,研究证实经由2条不同途径分泌表达人IL-1β的慢病毒感染HepG2细胞后,与转染空载体的对照细胞相比,细胞培养液上清和胞质中IL-1β的水平均显著升高(P<0.01),其中HepG2/epoIL-1β细胞培养液上清中成熟蛋白IL-1β的水平明显高于HepG2/proIL-1β细胞,而胞质中总IL-1β的水平HepG2/proIL-1β高于HepG2/epoIL-1β。结论构建的带有EPO信号肽序列的IL-1β基因的慢病毒载体,在HepG2细胞表达后,分泌成熟IL-1β的水平明显高于非经典途径分泌的表达载体。
- 李娜邸大琳肖伟玲付晓燕梁淑娟
- 关键词：慢病毒HEPG2细胞
- 促炎性因子IL-1β对肝癌生长和浸润行为的影响及与NK细胞杀伤活性的关系
- 目的构建小鼠IL-1β(murine IL-1β,mIL-1β)全长基因的真核表达载体pIRES2-EGFP-mIL-1β,通过jetPEI介导的H22肝癌细胞转染,观察对肝癌细胞体外增殖活性的影响。建立BALB/c小鼠...
- 肖伟玲
- 关键词：IL-1Β肝癌NK细胞天然免疫促炎性细胞因子
- 文献传递
- 分泌型人IL-1β表达载体的构建及在H7402细胞中的表达
- 2008年
- 目的构建经典途径分泌型人白细胞介素1β(shIL-1β)重组表达载体,检测其在H7402肝癌细胞中的表达。方法采用SOE方法将人红细胞生成素(EPO)信号肽序列和编码人白细胞介素(hIL-1β)成熟蛋白的基因序列拼接形成融合基因,与pIRES2-EGFP质粒重组构建shIL-1β真核表达载体pIRES2-EGFP-shIL-1β,利用jetPEI方法将其稳定转染H7402细胞(H7402/shIL-1β),荧光显微镜及RT-PCR检测融合基因的表达水平,间接ELISA方法测定培养上清hIL-1β分泌水平。结果荧光显微镜下观察可见H7402/shIL-1β细胞发出明亮绿色荧光,RT-PCR检测显示pIRES2-EGFP-shIL-1β能够在H7402细胞中稳定表达融合基因mRNA,同时细胞培养上清中hIL-1β表达水平明显上升。结论成功构建了经典途径分泌的hIL-1β重组表达载体,该载体可在H7402细胞中稳定分泌生物活性的hIL-1β。
- 肖伟玲林亚杰牟东珍孙萍梁淑娟
- 关键词：分泌表达肝癌细胞信号肽
- 人caspase-1真核表达载体的构建及表达
- 2009年
- 目的构建人caspase-1真核表达载体,观察其在人肝癌细胞HepG2中的表达。方法分离人外周血淋巴细胞,LPS刺激提取细胞总RNA,RT-PCR方法分别扩增caspase-1两片段S_1、S_2,利用重叠延伸PCR方法(SOE)获得caspase-1全长序列,将其克隆入pIRES_2-EGFP载体,进行茵落PCR、限制性酶谱分析、DNA序列测定。通过jetPEI方法转染HepG2肝癌细胞,倒置相差荧光显微镜下观察其表达情况,RT-PCR分析caspase-1的表达水平。结果从外周淋巴细胞中经RT-PCR分别扩增出365bp和883bp片段,纯化后的PCR产物通过SOE扩增得到一1234bp的条带,与预期序列长度一致。SOE产物与pIRES_2-EGFP经EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切后连接,茵落PCR鉴定获得数个阳性克隆,质粒经EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ限制性酶谱分析酶解出1234bp条带,DNA序列分析证实重组载体中的DNA序列与GeneBank中人caspase-1序列完全一致。将该载体转染至HepG2细胞中,经RT-PCR证实,与转染pIRES_2-EGFP空载体的对照组细胞相比,caspase-1水平明显升高。结论本研究成功构建人caspase-1表达载体pIRES_2-EGFP-caspase-1,该载体能够在人肝癌细胞中高效表达外源基因。
- 李青春张素华马晓君肖伟玲梁淑娟
- 关键词：肝肿瘤真核表达载体CASPASE-1
