武美玲
- 作品数：10 被引量：29H指数：3
- 供职机构：东北农业大学更多>>
- 发文基金：转基因生物新品种培育专项国家自然科学基金黑龙江省杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 猪ROSA26特异性整合位点及其应用
- 本发明公布了一种猪ROSA26特异性整合位点及其应用，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所述，通过其衍生的打靶载体系列如SEQ ID NO.1所示。本发明采用的ROSA26特异性位点在猪或高等哺乳动物基因组中不会受到免...
- 孔庆然武美玲刘忠华
- 文献传递
- TSA促进转基因猪体细胞核移植胚胎发育和外源基因表达被引量：6
- 2011年
- 不完全的表观遗传重编程是造成转基因克隆动物效率低下的主要原因,组蛋白修饰作为表观遗传修饰的一个重要部分,可以直接影响克隆胚胎的发育和外源基因的表达情况。TSA(Trichostatin A)作为一种组蛋白去乙酰化抑制剂,可以改变组蛋白的乙酰化水平,促进表观遗传重编程,提高克隆动物的效率。同时TSA能改变染色质结构,使转录因子易于与DNA序列结合,促进外源基因的表达。文章确定了TSA处理转基因猪成纤维细胞和核移植胚胎的最佳条件,分别为250 nmol/L、24 h和40 nmol/L、24 h,通过进一步正交实验发现,TSA同时处理供体细胞和克隆胚胎可以显著的促进核移植胚胎的体外发育。此外,无论TSA处理转基因猪成纤维细胞或核移植胚胎,都可以提高外源基因的表达水平。
- 孔庆然朱江黄波郇延军王峰石永乾刘仲凤武美玲刘忠华
- 关键词：TSA体细胞核移植胚胎发育外源基因表达
- 猪骨髓间充质干细胞的分离培养及核移植后重构胚胎发育能力的研究被引量：5
- 2008年
- 不同类型的细胞核移植效率不同,原因之一可能是不同类型细胞核移植后进行重编程的潜力不同。本实验对猪骨髓间充质干细胞(porcine bone marrow mesenchymal stem cells,pMSCs)体外分离培养的方法进行了优化,对猪骨髓间充质干细胞的增殖及生长特性进行了观察分析,并以其作为供体细胞进行核移植,对此类型细胞进行重编程的潜力进行了评估。结果表明用密度梯度离心法分离猪骨髓间充质干细胞优于全骨髓贴壁法;猪骨髓间充质干细胞数目在培养第6天达到峰值,传代培养10h时,贴壁率达到78.50%;传代培养后第4天分裂指数最高,为24.00‰;以猪骨髓间充质干细胞(pMSCs)和猪胎儿成纤维细胞(PF)分别作为供核细胞构建核移植胚胎,其体外囊胚发育率分别为14.63%与15.07%(P>0.05),孤雌对照组囊胚发育率为30.91%(P<0.05);而三组囊胚细胞数分别为30.67±17.7、24.1±6.5和25.8±11.4(P>0.05)。实验表明,体外培养的猪骨髓间充质干细胞生长增殖旺盛,生物学性状稳定,并适合作为核移植供体细胞。
- 王振坤田江天李秋明武美玲孔庆然郑重于学武雷蕾刘忠华
- 关键词：核移植
- 转基因猪中外源基因拷贝数和整合位点的研究被引量：18
- 2009年
- 主要采用了绝对定量PCR和热不均一交错PCR(thermal asymmetric interlaced PCR,TAIL-PCR),检测了体细胞核移植技术生产的绿色荧光蛋白转基因猪中外源基因拷贝数和整合位点,并利用旁侧PCR(Junction PCR)对整合位点进行确定,同时进一步分析了整合位点的纯合性.结果表明,绝对定量PCR可以准确有效地检测外源基因拷贝数,标准曲线为:log2N(拷贝数)=-0.9354△Ct+3.4116(R2=0.9974,P<0.001),两只转基因猪中外源基因拷贝数分别为30.85±1.77和18.87±1.34;TAIL-PCR能成功地克隆转基因猪中外源基因整合位点,得到25条特异性条带,经BLAST比对,共获得TgInS1(1440bp)、TgInS2(1263bp)和TgInS3(1861bp)3个整合位点.以整合位点侧翼序列特异性引物与外源基因特异性引物的组合引发Junction PCR,得到预计大小的特异性片段,确定了整合位点上、下游侧翼序列的准确性.采用整合位点5′上游和3′下游侧翼序列特异性引物与外源基因特异性引物的组合,进行Junction PCR,在两只转基因猪中都得到与野生型猪一致的侧翼序列特异性引物扩增片段,表明我们获得的转基因猪都为整合位点杂合子.初步建立了绝对定量PCR和TAIL-PCR对外源基因拷贝数和整合位点检测的体系,为今后研究外源基因在转基因猪中遗传和表达的稳定性打下了基础.
- 孔庆然武美玲朱江格日乐其木格郇延军尹智牟彦双刘忠华
- 关键词：转基因猪拷贝数整合位点TAIL-PCR
- 猪ROSA26启动子的鉴定与应用
- 本研究在猪中对ROSA26启动子进行克隆和鉴定，并检测了其第一外显子和驱动绿色荧光蛋白基因(GFP)的表达活性。通过与小鼠ROSA26启动子的同源比对，在猪13号染色体上得到了一段长为513bp，同源率达到92％的序列，...
- 武美玲孔庆然王娟解炳腾刘忠华
- 关键词：启动子
- 猪ROSA26启动子及其应用
- 本发明公布了猪ROSA26启动子序列及其应用，根据鼠，牛，人中ROSA26位点的序列比对得到保守序列，根据保守序列设计引物扩增得到猪内源ROSA26启动子；得到的ROSA26启动子用于外源基因的GFP的表达，GFP蛋白在...
- 孔庆然武美玲刘忠华
- 文献传递
- PiggyBac转座子介导EGFP在猪体细胞和克隆胚胎中的表达
- PiggyBac转座子是来源于鳞翅目昆虫Trichoplusia ni.的DNA转座子,因其可以携带长达14kb的DNA片段在多个物种的基因组上进行转座,所以可以作为良好的遗传操作工具。本实验以EGFP为标记基因,转座子...
- 罗一博张力武美玲朱江刘忠华
- 关键词：PIGGYBAC猪体细胞克隆胚胎转基因
- 文献传递
- 猪ROSA26特异性整合位点及其应用
- 本发明公布了一种猪ROSA26特异性整合位点及其应用，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所述，通过其衍生的打靶载体系列如SEQ ID NO.1所示。本发明采用的ROSA26特异性位点在猪或高等哺乳动物基因组中不会受到免...
- 孔庆然武美玲刘忠华
- 文献传递
- 猪ROSA26启动子及其应用
- 本发明公布了猪ROSA26启动子序列及其应用，根据鼠，牛，人中ROSA26位点的序列比对得到保守序列，根据保守序列设计引物扩增得到猪内源ROSA26启动子；得到的ROSA26启动子用于外源基因的GFP的表达，GFP蛋白在...
- 孔庆然武美玲刘忠华
- 曲古抑菌素A对克隆猪端粒长度的影响
- 2012年
- 端粒是染色体末端结构,在细胞分裂时随着DNA复制而缩短,体细胞核移植能不同程度地延长端粒长度,但有些克隆动物端粒的长度在体细胞核移植过程中不能有效恢复,因而这些克隆动物就会表现出早衰现象。文章发现克隆东北民猪以及eGFP、Mx和PGC1α转基因克隆猪的端粒长度与核供体成体成纤维细胞相比显著缩短(P<0.05),表明体细胞核移植的重编程过程没能延长细胞的"寿命"。曲古抑菌素A(Trichostatin A,TSA)是一种去乙酰化酶抑制剂,有研究表明其能提高某些物种的体细胞核重编程效率。为了使端粒长度有效恢复,文章利用40 nmol/L TSA处理1细胞期猪克隆胚胎24 h,结果发现,与对照组相比,TSA处理能显著地提高克隆胚胎体外发育的囊胚率(16.35%vs.2 7.09%,21.60%vs.34.90%,P<0.05),而且囊胚期端粒长度也得到显著延长(P<0.05)。克隆胚胎移植受体后得到了TSA处理组与非处理组的克隆猪,虽然TSA处理并没有提高克隆效率(1.3%vs.1.7%,TSA vs.control),但端粒长度与对照组和供体细胞相比均显著延长(P<0.05)。猪体细胞核移植不能有效恢复端粒长度,但是TSA处理能有效延长克隆猪端粒长度。
- 解炳腾纪光臻孔庆然毛剑石永乾刘世超武美玲王娟刘林刘忠华
- 关键词：重编程端粒TSA
