王芃
- 作品数：53 被引量：103H指数：6
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 大肠杆菌表面CS3菌毛展示随机肽库的构建
- 2006年
- 目的:在肠毒素性大肠杆菌CS3菌毛表面构建 10肽随机肽库．方法:首先将原有的单酶切CS3菌毛呈现载体改造为双酶切载体,并证实改造后的载体能正确形成CS3菌毛．同时设计合成2条寡核苷酸序列,链1含有1个10肽随机编码序列(NNS)10, 链2可与链1的3′端互补．两条链经过退火、延伸、酶切和回收与经过同样酶切的呈现载体连接,连接产物纯化后分多次电击转化,获得随机肽库．随机挑选10个克隆进行测序并对测序结果进行分析．结果:获得1个库容量为1．8×106大小的随机肽库．测序结果显示,所构建肽库的基本框架与预期设计相符,4个寡核苷酸出现的频率也与理论值相接近．结论:在肠毒素性大肠杆菌CS3菌毛表面成功构建库容量为1．8×106大小的10肽随机肽库．为下一步利用肽库进行筛选奠定了基础．
- 刘向昕袁盛凌展德文郑继平刘纯杰王芃王令春张兆山
- 关键词：随机肽库
- AB_5肠毒素A、B亚基比例表达调控机理的研究
- 2000年
- 霍乱毒素（CT）及大肠杆菌热不稳定肠毒素（LT）的B亚基基因的表达水平是A亚基的5～7倍。研究发现A基因内部存在着1个80bp长的翻译调控区，含有3个翻译起始序列（TIR），其第2个翻译起始序列的终止密码与第3个翻译起始序列的起始密码重叠，因而形成翻译偶联，继续翻译至A基因的终止密码。将TIR3的起始密码ATG突变为ATC后TIR2及TIR3失去功能，这时下游报告基因（类似于ctxB基因）表达水平降低9倍；为了更直接验证，去除了ctxA基因中与翻译起始调控及ctxA、B基因间翻译偶联调控所必须序列之外的其他序列，结果仍然表明TIR3的ATG突变为ACA后，下游基因表达水平降低9倍。结果表明：A亚基基因内部的翻译调控元件及翻译偶联是AB5素A、B亚基基因比例表达的原因。
- 曹诚李平王芃李杰之石成华马清钧
- 关键词：霍乱毒素操纵子翻译调控亚基
- PC-1解除S6K对AKT信号通路的负反馈抑制
- 2014年
- 目的:通过建立过表达PC-1的前列腺癌LNCaP细胞系及敲低PC-1表达的C4-2细胞系,探究PC-1激活AKT信号通路的分子机制。方法:将PC-1基因及针对PC-1的siRNA序列,分别克隆至慢病毒表达载体pCDH-EF1-Myc-MCS-T2A-Puro及干扰载体pSIH1-H1-Puro,包装成慢病毒后分别感染前列腺癌LNCaP及C4-2细胞,通过Western印迹鉴定PC-1过表达及敲低效果,并检测PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白S6K、AKT的磷酸化水平。结果:PC-1过表达时,S6K磷酸化水平下降,而AKT的磷酸化水平上升。结论:PC-1可以通过抑制S6K激酶活性,解除其对AKT的负反馈抑制作用,从而激活AKT激酶的活性。
- 张晓清王健王洪涛李山虎王芃黄芳洪鎏邓楚中周建光
- 关键词：前列腺癌AKT信号通路
- 人4型腺病毒拷贝数SYBR Green Ⅰ实时定量PCR检测方法的建立被引量：1
- 2017年
- 目的:建立检测人4型腺病毒拷贝数的荧光定量PCR方法。方法:提取本实验室构建的4型腺病毒全基因组质粒,以梯度稀释质粒为标准模板,选取人4型腺病毒六邻体区域基因设计一对特异性引物,进行SYBR GreenⅠ荧光定量PCR扩增并制作标准曲线。结果:标准曲线为y=-4.284x+53.468,由全基因组质粒所构建的标准曲线线性关系良好,扩增反应Ct值与拷贝数的对数呈线性关系(R2=0.999 609),检出敏感度可达1×102拷贝/μL,且与其他几种腺病毒无交叉反应。用该方法检测4型腺病毒感染细胞2、12和24 h后的病毒拷贝数,其病毒拷贝数随时间增加,与细胞病变(CPE)变化保持一致,且荧光定量PCR的测量结果稳定(变异系数<6%)。结论:建立了检测人4型腺病毒基因拷贝数的荧光定量RT-PCR方法,该方法灵敏度高、特异性强。
- 张文宁王芃周建光王健秦崇涛李宗李山虎
- 关键词：实时荧光定量PCR
- 利用λ-Red重组系统和平衡致死系统改造抗药性致腹泻工程疫苗被引量：4
- 2006年
- 质粒pMM085是含有猪毒素源性大肠杆菌(ETEC)的黏附素K88与无毒肠毒素LTA-B+基因的重组质粒,含氯霉素抗性基因,由此构建的菌苗株带有抗药性。利用平衡致死系统改建此疫苗株,即将质粒上的氯霉素抗性基因cat替换成asd基因,并把新构建的质粒转移到缺失asd基因的大肠杆菌X6097中。但由于质粒pMM085是一个23kD的大质粒,传统的基因工程操作不易进行,利用λ-Red重组系统,将表达Red重组蛋白的质粒pKD46转化含pMM085的大肠杆菌X6097,并用两端各带有39ntcat基因同源区、含全长asd基因的PCR产物电击转化此感受态细胞,在λ-Red重组系统的帮助下,成功实现了asd基因对cat基因的置换。
- 袁盛凌王芃刘向昕王艳春展德文张兆山
- 采用Red重组系统构建包装菌株DH-gIII被引量：1
- 2008年
- 选择感染性噬菌体技术是研究蛋白相互作用的良好手段,获得基因III缺陷的辅助噬菌体是构成SIP体系的关键。为制备基因III缺失的辅助噬菌体,利用λRed重组系统将完整的噬菌体基因III和氯霉素抗性基因整合到大肠埃希菌DH5α的染色体上组氨酸操纵元位点构建包装菌株,经氯霉素抗性筛选并用PCR及组氨酸表型鉴定,获得包装菌株DH-gIII;将缺失功能基因III的缺陷型噬菌体基因组转化到包装菌株中培养制备辅助噬菌体,以集落形成试验来检测缺陷型噬菌体的感染能力,结果滴度可达到4.3×108,只具备一次感染力,表明包装菌株构建成功,能用来制备辅助噬菌体,有望用于SIP体系。
- 高荣凯王芃王琰
- 关键词：RED重组系统辅助噬菌体
- 能在芽孢表面展示PA<Sub>20</Sub>蛋白的炭疽芽孢杆菌及其应用
- 本发明公开了一株能在芽胞表面展示PA<Sub>20</Sub>蛋白的炭疽杆菌株及其应用。该菌株，是将pagA<Sub>20</Sub>基因插入到炭疽芽胞杆菌(Bacillus anthracis)芽胞蛋白bclA基因未端...
- 展德文王艳春刘纯杰陶好霞袁盛凌王令春王芃
- 文献传递
- 一种预防和/或治疗幽门螺杆菌感染的疫苗
- 本发明公开了一种预防和/或治疗幽门螺杆菌感染的疫苗。该疫苗的活性成分为HP0762蛋白，所述HP0762蛋白的氨基酸序列如GenBank AccessionNo.ACM46115.1所示。首先通过反向疫苗学的方法从幽门螺...
- 刘纯杰王涛陶好霞王令春袁盛凌展德文王芃王艳春
- 文献传递
- 运用重叠延伸PCR技术构建SGK3激酶PX结构域突变体被引量：3
- 2016年
- 目的:构建SGK3激酶PX结构域突变体载体,观察其在人肾胚细胞293T中的表达与定位。方法:利用重叠延伸PCR原则设计引物,合成具有点突变的SGK3突变体,将其连接到p EGFP载体上,测序验证;将所获突变载体瞬时转染人肾胚细胞293T,利用荧光倒置显微镜检验突变体在细胞中的表达及功能实现。结果:测序结果表明合成了具有点突变的SGK3序列;荧光倒置显微镜下SGK3突变体相较野生型SGK3在293T细胞内的不均匀分布表明转染成功,突变体载体在人肾胚细胞293T中获得表达且有所定位。结论:通过改变PX结构域序列上第90位氨基酸可以使SGK3激酶失去定位的功能,从而为研究SGK3在细胞中的功能提供基础。
- 吕文杰王洪涛黄芳王健王芃洪鎏周建光潘耀振李山虎
- 关键词：重叠延伸PCR
- 能在芽孢表面展示PAD4蛋白的炭疽芽孢杆菌及其应用
- 本发明公开了一株能在芽孢表面展示PAD4蛋白的炭疽杆菌株及其应用。该菌株，是将Pa4基因插入到炭疽芽孢杆菌(Bacillus anthracis)芽孢蛋白bclA基因未端获得的菌株。具体可为炭疽芽孢杆菌(Bacillus...
- 展德文王艳春刘纯杰陶好霞袁盛凌王令春王芃
- 文献传递
