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袁盛凌: 作品数：41 被引量：71H指数：5; 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技重大专项艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>; 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>

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幽门螺杆菌Ure B串联融合表位的表面呈现表达被引量：1: 2011年; 目的:应用表达载体pHIE3N表面呈现表达幽门螺杆菌Ure B串联融合表位。方法:通过引入多克隆位点的方法改造表达呈现表达载体pHIE11,并用改造后的质粒表达幽门螺杆菌Ure B串联融合表位,用SDS-PAGE、Western blot和全菌ELISA检测所得到的重组菌。结果:改造的质粒插入序列正确,能够特异性呈现表达Ure B串联融合表位,表达产物的分子量约为60kDa,与预期大小一致。全菌ELISA结果表明Ure B串联融合表位表达于菌体表面。结论:pHIE3N载体能够表面展示呈现Ure B串联融合表位,构建的重组菌为幽门螺杆菌候选疫苗的研发奠定了基础。; 封小燕王艳春李平超陶好霞王芃袁盛凌王令春王普刘纯杰; 关键词：URE

重组减毒炭疽芽胞杆菌及其应用: 本发明公开了重组减毒炭疽芽胞杆菌及其应用。本发明提供了重组菌，为降低和/或抑制炭疽芽胞杆菌AP429 CGMCCNO.4912中mntA蛋白和nos蛋白活性得到的菌。本发明的实验证明，本发明炭疽芽胞杆菌(Bacillus...; 王艳春刘纯杰袁盛凌陶好霞

利用λ-Red重组系统和平衡致死系统改造抗药性致腹泻工程疫苗被引量：4: 2006年; 质粒pMM085是含有猪毒素源性大肠杆菌(ETEC)的黏附素K88与无毒肠毒素LTA-B+基因的重组质粒,含氯霉素抗性基因,由此构建的菌苗株带有抗药性。利用平衡致死系统改建此疫苗株,即将质粒上的氯霉素抗性基因cat替换成asd基因,并把新构建的质粒转移到缺失asd基因的大肠杆菌X6097中。但由于质粒pMM085是一个23kD的大质粒,传统的基因工程操作不易进行,利用λ-Red重组系统,将表达Red重组蛋白的质粒pKD46转化含pMM085的大肠杆菌X6097,并用两端各带有39ntcat基因同源区、含全长asd基因的PCR产物电击转化此感受态细胞,在λ-Red重组系统的帮助下,成功实现了asd基因对cat基因的置换。; 袁盛凌王芃刘向昕王艳春展德文张兆山

大肠杆菌表面CS3菌毛展示随机肽库的构建: 2006年; 目的:在肠毒素性大肠杆菌CS3菌毛表面构建 10肽随机肽库．方法:首先将原有的单酶切CS3菌毛呈现载体改造为双酶切载体,并证实改造后的载体能正确形成CS3菌毛．同时设计合成2条寡核苷酸序列,链1含有1个10肽随机编码序列(NNS)10, 链2可与链1的3′端互补．两条链经过退火、延伸、酶切和回收与经过同样酶切的呈现载体连接,连接产物纯化后分多次电击转化,获得随机肽库．随机挑选10个克隆进行测序并对测序结果进行分析．结果:获得1个库容量为1．8×106大小的随机肽库．测序结果显示,所构建肽库的基本框架与预期设计相符,4个寡核苷酸出现的频率也与理论值相接近．结论:在肠毒素性大肠杆菌CS3菌毛表面成功构建库容量为1．8×106大小的10肽随机肽库．为下一步利用肽库进行筛选奠定了基础．; 刘向昕袁盛凌展德文郑继平刘纯杰王芃王令春张兆山; 关键词：随机肽库

炭疽芽孢杆菌突变株AP431与A16R的生物特性比较研究被引量：1: 2016年; 目的系统评价所构建的炭疽芽孢杆菌突变株AP431的生物特性,并与出发菌株A16R对比,为后续研究提供数据基础。方法绘制生长曲线比较突变株AP431和A16R的生长性能;糖酵解实验分析二者生化特性的差异;免疫印迹和流式细胞术检测菌株的保护性抗原PA蛋白表达情况;连续传代共培养分析其竞争关系;过氧化氢灭菌实验和抑菌圈实验分析菌株对活性氧的耐受性;以C57小鼠为动物模型比较二者的毒力大小。结果与A16R相比,突变株AP431生长稍慢,生化特性基本一致。突变株AP431的PA蛋白在S层呈现表达良好,并且在培养基上清、细胞内和外膜上的表达水平均比A16R高。共培养实验发现AP431的生存竞争能力明显减弱。过氧化氢敏感实验表明,突变株AP431对过氧化氢的敏感性比A16R显著增高。动物毒力实验结果显示,分别在两种注射剂量下,突变株的致死率显著降低,与A16R组相比差异显著(P<0.01)。结论与A16R相比,炭疽菌突变株AP431保护性抗原PA表达水平明显提高,毒力明显降低,可作为新的疫苗候选株进行进一步研究。; 聂伯尧苏润雨陶好霞袁盛凌刘纯杰杨百亮王艳春; 关键词：生物特性毒力

蛇毒类凝血酶Calobin cDNA的设计合成与克隆被引量：11: 2003年; 人工合成了朝鲜蝮蛇(Agkistrodoncaliginosus)类凝血酶Calobin的编码序列。在设计引物时选择大肠杆菌和酵母菌的偏爱密码子,通过相互搭桥的方式,将全长为789bp的编码序列分成14个片段,每个片段长度为78个碱基左右,采用“核心模板法”并加以改进,通过4次PCR延伸反应,得到了全长基因。经扩增后回收目的片段,双酶切后连接到克隆载体,将得到的转化子酶切鉴定后,任意选择6个克隆进行双向测序,得到了全序列正确的3个克隆。本工作为类凝血酶在大肠杆菌和酵母系统中的高效表达奠定了基础,也为长度为700～900bp片段的合成提供了帮助。; 袁盛凌段海清张兆山; 关键词：蛇毒类凝血酶基因合成聚合酶链式反应

合成生物学助力应急疫苗研制: 2017年; 合成生物学具有系统性思维和工程学理念的特点,致力于创造新的生命或新的系统。合成生物学为疫苗研发人员提供了新的思路,不断开发出新疫苗研制的技术平台。通过抗原重构技术,合成的强抗原能够很好地激活VRC0-1种系的B细胞;利用合成生物学合成自组装的纳米颗粒疫苗,能够有效地暴露保守抗原;通过合成生物学完成流感疫苗基因组的快速组装,大大缩短了疫苗的研制周期;通过系统性地改造,重组沙门菌再一次成为疫苗开发的重要工具。合成生物学在应急疫苗研发过程中疫苗研制平台搭建及快速合成新发传染病抗原方面发挥着突出作用。; 袁盛凌王艳春刘纯杰; 关键词：合成生物学疫苗流感疫情递送系统

幽门螺杆菌毒素相关蛋白A的EPIYA多态性对胃上皮细胞AGS形态及IL-8表达的影响: 2015年; 目的:比较研究幽门螺杆菌毒素相关蛋白A(Cag A)不同分型对胃上皮细胞AGS形态及IL-8表达影响的差异。方法:设计、人工合成并优化不同cag A基因型,构建相应表达载体,转染胃上皮细胞AGS后观察不同型Cag A对细胞形态及IL-8表达的影响。结果:转染后每6 h进行细胞形态观察,于24、36 h对形成蜂鸟状细胞的数量进行统计分析,结果表明,各型Cag A均能引起发生蜂鸟状改变的细胞数量增加;较空载体对照,Cag A的6种型别皆有非常显著差异,Cag A ABCCC与其余5种Cag A型别有非常显著差异。同时于转染后12、36 h对细胞分泌的IL-8进行检测,统计分析表明,转染后12 h,转染各型Cag A细胞的IL-8表达量开始出现差异;转染后36 h,较空载体对照,Cag AABD、Cag A J-Western、Cag A ABDD和Cag A ABCCC存在非常显著差异,Cag A ABDD和Cag A ABCCC分别与Cag AABD、Cag A ABC存在非常显著差异。结论:幽门螺杆菌Cag A可引起转染后的AGS细胞发生蜂鸟状改变及IL-8表达增加,EPIYA基序C数目的增加与细胞蜂鸟状改变呈正相关,EPIYA基序C和D数目的增加与IL-8表达呈正相关。; 刘鹿王艳春陶好霞袁盛凌王令春刘纯杰; 关键词：幽门螺杆菌

钩端螺旋体层粘连蛋白结合蛋白Lsa20的表达与功能分析: 2015年; 目的:表达并纯化可溶性重组钩端螺旋体层粘连蛋白结合蛋白Lsa20,并对其与层粘连蛋白(LN)相互作用的生物特性进行分析。方法:优化合成Lsa20基因,连接到表达载体p ET28a(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导蛋白表达,然后利用Ni-NTA亲和介质纯化目标蛋白,重组蛋白经超滤浓缩后,进行相关ELISA、流式细胞术、间接免疫荧光实验。结果:构建了重组蛋白表达菌株,目标蛋白呈可溶性表达,纯化后纯度达90%以上;ELISA证实重组Lsa20与LN有较强的亲和力,测得解离常数为(27.23±2.53)nmol/L;流式细胞术及间接免疫荧光实验结果表明重组Lsa20可黏附到COS-7细胞表面。结论:重组Lsa20在体外能够与层粘连蛋白结合,具有同天然蛋白类似的生物学特性。同时,以Lsa20与LN相互作用实验为例,建立了研究LN结合蛋白生物功能的基本方案,为后续鉴定和研究新的LN结合蛋白的作用规律及黏附机制奠定了良好的实验基础。; 魏颖袁盛凌姚雪晶陶好霞王令春刘纯杰田威王艳春; 关键词：原核表达层粘连蛋白相互作用

幽门螺杆菌活菌载体疫苗及其专用重组菌: 本发明涉及一种幽门螺杆菌活菌载体疫苗及其专用重组菌。该专用重组菌为重组福氏志贺氏菌(Sh.flexneri)，是将含有幽门螺杆菌尿素酶B亚单位和幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位的融合蛋白的编码基因导入福氏志贺氏菌(Sh.fl...; 刘纯杰张兆山陶好霞王令春袁盛凌展德文王芃王艳春; 文献传递

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