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智力低下相关蛋白FXR1P与CMAS相互作用区域的鉴定: 本文通过构建不同的FXR1P选择剪接异构体诱饵载体，进行其与本实验室经酵母双杂交、Co-IP和细胞内蛋白共定位技术证实与FXR1P有相互作用的蛋白质CMAS(胞嘧啶单核苷酸N-乙酰神经氨酸合成酶)间的相互作用区域研究，鉴...; 符向辉何淑雅董晓李斌元王三虎秦凌雪陈小卫马云; 关键词：脆性X综合征酵母双杂交发病机制; 文献传递

FXR1P相关miRNA的筛选及miR-323a-3p靶标的验证: 脆性X综合征/(Fragile X syndrome，FXS/)是一种常见的遗传性智力低下疾病，其致病相关基因----脆性X智力低下基因1/(Fragile X mental retardation gene1,FMR1...; 秦凌雪; 关键词：MIRNA 生物信息学; 文献传递

智力低下相关蛋白(FXR1P)与CMAS相互作用的生物学效应研究(英文)被引量：2: 2013年; 脆性X综合征(FXS)是一种遗传性智力低下疾病,其发病率仅次于21三体综合征.脆性X智力低下蛋白(FMRP)是FXS的关键性致病因子,该蛋白由脆性X智力低下基因1(FMR1)编码所得.FMR1在神经肌肉和睾丸组织中广泛表达.脆性X相关蛋白1(FXR1P)则是由FMR1的同源基因脆性X相关基因1(FXR1)编码所得,并且与蛋白质和RNAs之间存在着相互作用.许多疾病都涉及到FXR1表达的改变.为了了解FXR1P与CMAS(胞嘧啶单核苷酸-N-乙酰神经氨酸合成酶)相互作用所产生的的生物学效应,我们构建了FXR1的过表达载体,并观察其在PC12细胞(大鼠鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞)和VSMC(血管平滑肌细胞)中的表达以及继而对于细胞形态和CMAS活性相关的许多细胞指标的效应.我们证实,FXR1基因的过表达可以提高PC12细胞中CMAS的活性,并对于该类细胞的生长提供一定程度的保护作用.PC12细胞是一种较为常见的用于研究神经系统疾病的细胞系.结论:我们推测FXR1P是一个组织特异调节因子,可以改变PC12细胞而非VSMC细胞中神经节苷酯(GM1)的浓度.; 马云秦凌雪董晓李斌元王昌博许璨王三虎何淑雅; 关键词：GM1 生物学效应 PC12细胞 VSMC

BTF红色荧光蛋白表达载体的构建及其在大鼠血管平滑肌细胞中的表达和定位研究: 2014年; 目的构建Bcl-2相关转录因子1（BTF）与红色荧光蛋白（RFP）融合表达载体并在大鼠血管平滑肌VSMC细胞中表达，为进一步研究BTF的相互作用蛋白及作用机制奠定实验基础。方法以人体外周血白细胞cDNA为模板，PCR扩增Btf基因，插入红色荧光蛋白表达载体pDsRed-N1中．构建重组表达载体pDsRed-N1-Btf，转染大鼠血管平滑肌VSMC细胞，通过激光共聚胶显微镜观察其在转染细胞中的表达及定位。结果DNA测序、酶切鉴定的结果显示，红色荧光蛋白表达载体pDsRed-N1-Btf构建成功，且序列正确。转染后经激光共聚胶显微镜观察到VSMC细胞中有红色荧光。且BTF主要定位于细胞质中。结论成功构建了pDsRed-N1-Btf表达载体，并主要定位于VSMC的胞质中，为后期研究BTF的相互作用蛋白及其与相互作用蛋白之间的作用机制奠定了良好的基础。; 马云王昌博杨满君秦凌雪李斌元何淑雅; 关键词：红色荧光蛋白融合蛋白

FXR1真核表达载体的构建与表达及其对神经节苷脂浓度的影响被引量：1: 2014年; 目的:构建脆性X相关基因1(FXR1)的真核表达载体并检测其对神经节苷脂(GM1)浓度的影响。方法:以pYESTrp3-FXR1为模板,利用PCR扩增FXR1基因,PCR产物经EcoR I和Xho I双酶切后插入真核表达载体pcDNA3.1(-)中,获得的阳性克隆进一步酶切及测序鉴定;将构建成功的pcDNA3.1(-)-FXR1转染SH-SY5Y细胞后,采用Western blot检测FXR1的表达情况,同时采用ELISA试剂盒检测细胞内GM1的浓度。结果:PCR扩增产物为1.9 Kb的片段,与FXR1基因大小相符,阳性克隆经双酶切后获得两条分别为5.4 Kb和1.9 Kb的片段,测序结果与GeneBank中序列相同。构建成功的重组质粒pcDNA3.1(-)-FXR1转染SH-SY5Y细胞后,细胞中FXR1的表达增加,同时有效提高了细胞内GM1的浓度(P<0.05)。结论:成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(-)-FXR1,FXR1的表达增加可以提高SH-SY5Y细胞中的GM1浓度,这些为后续深入研究FXR1基因在神经组织发育中的调控功能及其在脆性X综合征(FXS)中的作用机制奠定了基础。; 马云王昌博李斌元秦凌雪付亮董晓何淑雅; 关键词：真核表达神经节苷脂

分泌型碱性磷酸酶报告基因重组载体pSEAP—IQCE3’UTR的构建: 2012年; 目的构建分泌型碱性磷酸酶（secretedalkalinephosphatasereportergene。SEAP）报告基因重组载体pSEAP—IQCE3’UTR，为鉴定FXR1P是否是通过与IQCE的3’UTR发生相互作用，进一步探索FXR1P的功能奠定基础。方法首先设计目的基因片段IQCE3’UTR的PCR引物，然后通过RT—PCR扩增加CE基因3’UTR基因片段，酶切扩增的片段和报告基因空载体，并将空载体去磷酸化，去磷酸化后的空载体与目的基因片段进行连接反应，将连接产物转化人大肠埃希菌JM109，最后筛选阳性克隆，PCR鉴定插入序列的正反。结果构建了分泌型碱性磷酸酶报告基因重组载体pSEAP—IQCE3’UTR，经酶切鉴定、正反鉴定和测序分析可知重组载体构建成功。结论成功构建了分泌型碱性磷酸酶报告基因重组载体pSEAP—IQCE3’UTR，为进一步探索FXR1P的功能及其在脆性X综合征中的发病机理有着重要的意义。; 王三虎马云秦凌雪何彬彬李斌元苏泽红何淑雅; 关键词：SEAP 脆性X综合征

智力低下相关蛋白FXR1P与CMAS相互作用区域的鉴定: 目的FXR1P是一种对于神经和肌肉系统发育有重要调控作用的蛋白,FXR1是脆性X致病相关基因家族成员,通过构建不同的FXR1P选择剪接异构体诱饵载体,进行其与本实验室经酵母双杂交、Co-IP和细胞内蛋白共定位技术证实与F...; 符向辉何淑雅董晓李斌元王三虎秦凌雪陈小卫马云; 关键词：脆性X综合征酵母双杂交; 文献传递

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秦凌雪