程牛亮
- 作品数：162 被引量：525H指数：13
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- 相关领域：医药卫生生物学文化科学化学工程更多>>
- 一种构建多拷贝串联小分子多肽基因的方法被引量：4
- 2006年
- 目的:构建蛇毒锯鳞蝰血抑环肽(Ecs)基因串联多拷贝重组质粒。方法:采用重叠延伸PCR克隆Ecs基因,将第28位Met的密码子突变为Leu,利用其序列特点及酶切位点,在表达载体pET30a上将Ecs基因以同向串联方式连接,在E.coliBL21(DE3)中表达产物。结果:工程菌表达的串联Ecs与预期结果相符,实现了Ecs基因的串联表达。结论:为活性小肽的体外表达提供了新的思路和方法。
- 杨涛杨利军程牛亮解军张悦红牛勃
- 关键词：串联基因
- 血小板因子4及其相关肽段研究进展被引量：2
- 2004年
- 赵滢滢牛勃程牛亮
- 关键词：血小板因子4PF4肽段氨基酸
- 人血小板因子4在大肠杆菌中的高效表达及活性研究被引量：3
- 2004年
- 为了提高人血小板因子 4(humanplateletfactor 4,hPF4)的表达 ,在PT7 7 hPF4表达质粒的基础上 ,采用PCR定位突变技术 ,改造人血小板因子 4(hPF4)cDNA基因片段 ,去除cDNA 3′端非翻译区AT富含序列 ,改用大肠杆菌强串联终止密码子TAATAA ,成功构建了高效表达质粒pBV2 2 0 hPF4。摇瓶发酵重组人血小板因子 4的产量达 1 60mg L较原表达质粒PT7 7 hPF4表达量提高了近 80倍。经包涵体的洗涤、变性、复性后 ,采用鸡胚绒毛尿囊膜血管生成抑制实验测定复性后rhPF4的生物学活性 ,结果显示 :rhPF4具有抑制血管生成活性。
- 张俊芳韩兵社解军胡晓年牛勃程牛亮
- 关键词：大肠杆菌活性质粒血管生成抑制
- 生物化学实验教学课程体系改革的创新实践被引量：16
- 2010年
- 为进一步提高生物化学实验课教学质量,我们对实验教学进行了一次全新的改革尝试:重新确定教材大纲、系统规划课程体系、改变课堂教学模式、加强辅助教学手段、搭建多元化高新实验技术平台、制定综合性发展性考核评价标准,形成一套行之有效的实验课程教学新体系,为生化实验教学的继续深入改革奠定了基础。
- 刘红林程牛亮张悦红
- 关键词：生物化学实验教学课程体系教学改革
- Pu27下调c-myc基因表达抑制SW480结肠癌细胞增殖
- 2016年
- 目的探讨外源性Pu27序列对SW480结肠癌细胞的作用。方法设立空白组、Pu27实验组和Mut Pu27对照组,观察药物摄取,c-myc基因表达,细胞增殖和凋亡情况。结果 Pu27以非转染方式进入细胞,下调c-myc基因表达,抑制细胞增殖促进凋亡。结论 Pu27具有选择性抗肿瘤作用。
- 兰晓瑜张毅强王爽李美宁程牛亮
- 关键词：C-MYC结肠癌
- 人胰岛素突变体GIRR的分离纯化及性质研究被引量：1
- 2004年
- 构建人胰岛素原突变体GIRR(A2 1Asn→Gly,B1 7Leu→Ile ,B31Arg ,B32Arg)基因的原核融合表达载体并进行表达和纯化 ,进一步对其性质进行研究。将人胰岛素原突变体基因重组到pTXB1融合表达载体上 ,在E .coliBL2 1 (DE3)中得到高效表达。表达产物经几丁质亲和柱层析分离以及胰蛋白酶和羧肽酶B的酶促转化等步骤 ,得到纯的人胰岛素突变体GIRR ,其纯度经HPLC鉴定达到 95 % ,氨基酸组成和设计相符 ,其受体结合活性是猪胰岛素的 1 0 5 % ,生物活性为 2 6 8IU mg。其血浆半衰期为 2 0分钟 ,比标准猪胰岛素提高 3倍多。结果提示本突变体具有更长的半衰期 ,为长效胰岛素的制备提供了新的思路。
- 解军于保锋陈显久张悦红常冰梅胡晓年牛勃程牛亮
- 关键词：人胰岛素原核HPLC突变体
- 加强考试管理,搞好评估工作被引量：2
- 2006年
- 本科教学评估是高等教育改革后保证本科教学质量的一个重要举措，它对本科教学起到了积极的促进作用；考试是教学的重要组成部分，也是本科教学评估重点检查内容之一。从实际出发，结合本科教学评估要求，谈几点考试评建准备工作。
- 刘志伟程牛亮王瑞杰
- 关键词：考试教学评估
- 前列腺素脱氢酶在大肠杆菌中的表达纯化及鉴定
- 2008年
- 15-羟基前列腺素脱氢酶(PGDH)属于抑癌基因,在多种肿瘤中表达缺失,在肿瘤的发生发展中起着重要作用。提取人正常大肠黏膜组织总RNA,利用RT-PCR方法扩增得到PGDH基因的编码序列,克隆入原核表达载体pBV220,测序鉴定正确后转化E.coliDH5α,经温控诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE和Western blot,证实为相对分子质量约为29000的PGDH-His6蛋白,表达产物以包涵体形式存在,3h诱导表达量最高,约占菌体总蛋白的30%。经Ni2+配体亲和层析纯化得到纯度大于95%的目的蛋白。重组PGDH简单复性后具有一定的生物活性,约为3.7×104U/mg,为下一步研究其在肿瘤中的作用奠定了基础。
- 李美宁解军常冰梅张悦红殷云勤程牛亮
- 关键词：大肠癌15-羟基前列腺素脱氢酶克隆原核表达
- 靶向Pin1基因的shRNA干扰质粒的构建及其对大肠癌SW620细胞Pin1基因的抑制作用被引量：2
- 2009年
- 目的构建靶向Pin1基因的短发夹RNA(shRNA)干扰真核表达质粒,并检测其对大肠癌SW620细胞Pin1基因的抑制作用。方法设计合成特异性针对人Pin1基因的寡核苷酸序列,退火后与pGenesil-1载体连接,构建靶向Pin1基因的shRNA真核表达质粒pGenesil-1-Pin1(+),利用脂质体转染大肠癌SW620细胞,以质粒pGenesil-1-Pin(-)转染细胞和未转染细胞为对照。利用荧光显微镜观察转染后细胞表达的绿色荧光蛋白,估算转染效率;应用实时荧光定量PCR和Western blot检测其对SW620细胞Pin1基因mRNA转录及蛋白表达的影响。结果所构建的特异Pin1shRNA真核表达质粒经酶切及测序证明构建正确,转染SW620细胞的转染效率为64%。shRNA对SW620细胞Pin1基因mRNA的抑制率在转染后72h最高,为70.2%,蛋白抑制率为60%。结论已成功构建了靶向Pin1基因的shRNA干扰真核表达质粒,可抑制SW620细胞Pin1基因mRNA的转录及蛋白的表达。
- 郝华李美宁赵志兰杜叶平秦立元程牛亮
- 关键词：RNA干扰短发夹RNA大肠癌
- 双胸蚓纤溶酶Ⅲ的分离纯化及其性质研究被引量：13
- 1996年
- 用硫酸铵分段盐析，ＤＥＡＥ－纤维素，ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－２５和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５柱层析的方法，从双胸蚓组织中分离纯化出一种纤溶酶，经聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）显示一条区带，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定其分子量为２２．
- 郑国平程牛亮张祖王旬单鸿仁
- 关键词：蚯蚓纤维蛋白溶酶色谱法
