耿涛
- 作品数：17 被引量：20H指数：3
- 供职机构：江苏科技大学生物与环境工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 白僵菌诱导家蚕抗菌肽enbocin1基因的表达特征及产物的抗真菌活性被引量：4
- 2016年
- 家蚕的抗菌肽家族基因enbocin1是蚕体免疫系统相关基因。为解析家蚕对病原真菌感染免疫应答反应的分子机制,采用实时荧光定量PCR检测抗菌肽基因enbocin1在家蚕5龄幼虫感染球孢白僵菌(Beauveria bassiana)后的时空表达模式,结果显示:enbocin1主要在幼虫脂肪体中显著上调表达,而且持续至感染诱导后30 h,感染后8、30 h的表达水平分别上调了约44倍和6倍;在马氏管、体壁中该基因的诱导表达差异不显著,在血淋巴中几乎检测不到该基因的表达。进一步用原核表达系统成功表达并纯化获得了高纯度的重组家蚕抗菌肽enbocin1,体外抑菌试验表明其对白僵菌具有较强的抑菌活性,且重组enbocin1蛋白浓度与抑菌活性之间具有量效关系。用重组enbocin1蛋白制备了效价达1∶30 000的多克隆抗体,可用于进一步深入研究enbocin1的功能及其作用机制。研究结果提示抗菌肽enbocin1在家蚕抵御真菌感染的过程中可能具有重要作用。
- 黄玉霞耿涛侯成香吕丁丁覃光星高坤郭锡杰
- 关键词：家蚕抗菌肽抑菌活性球孢白僵菌
- 一对应用于检测家蚕质型多角体病毒的检测引物及检测方法
- 一对应用于检测家蚕质型多角体病毒（BmCPV）的检测引物及检测方法，所述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。采用所述特异性引物可有效地扩增BmCPV的RDRP基因5’→3’第366碱基到...
- 潘中华郭锡杰耿涛吴萍沈中元朱峰
- 鹿茸干细胞中Notch通路信号因子的检测
- 梅花鹿角是哺乳动物中唯一能够完全再生的器官,是研究器官再生的良好的生物学模型。位于雄性梅花鹿头部额外脊处的生茸骨膜（antlerogenic periosteum, AP）是鹿茸发生的组织基础,而鹿茸再生的组织基础是位于...
- 耿涛
- 关键词：软骨
- 文献传递
- 家蚕与白僵菌互作机制的研究
- 家蚕(Bombyx mori)是鳞翅目昆虫的代表物种，是人类经过长期驯化而得来的重要经济昆虫之一，有着良好的科学研究基础，是探索昆虫免疫防御机制、病原互作机制的重要模式生物。球孢白僵菌(Beauveria bassian...
- 耿涛
- 关键词：家蚕球孢白僵菌免疫防御生物防治
- 家蚕miRNA Novel-31＊上调溶血素基因的表达被引量：1
- 2016年
- 【目的】Novel-31*是在家蚕质型多角体病毒(Bombyx mori cytoplasmic polyhedrosis virus,Bm CPV)感染的家蚕中发现的一个差异表达miRNA。本研究旨在验证Novel-31*对其靶基因表达的调控作用,以便进一步研究miRNA及其靶基因在昆虫免疫调节中的作用。【方法】用生物信息学方法预测Novel-31*的靶基因,荧光定量PCR分析Novel-31*及其靶基因在家蚕感染Bm CPV后不同时间点的表达变化;构建miRNA慢病毒表达载体和靶基因慢病毒表达载体,转染293T细胞,同时合成Novel-31*mimics转染家蚕培养细胞Bm N,使用荧光定量PCR检测Novel-31*对靶基因表达的调控作用。【结果】生物信息学方法预测发现,溶血素基因是Novel-31*的靶基因,其结合位点位于溶血素基因的5'UTR区域。荧光定量PCR分析表明,Novel-31*及溶血素基因在感染Bm CPV的家蚕血淋巴细胞中呈现明显的上调表达。荧光定量PCR检测表明,在Novel-31*慢病毒表达载体和溶血素基因5'UTR慢病毒表达载体转染的293T细胞中和在转染Novel-31*mimics的家蚕Bm N细胞中,溶血素基因都上调表达。【结论】溶血素基因是miRNA Novel-31*的靶基因,Novel-31*与溶血素基因5'UTR结合,上调溶血素基因的表达。
- 施莉莉耿涛吴萍潘中华覃光星高坤侯成香郭锡杰
- 关键词：家蚕MIRNA靶基因慢病毒载体溶血素
- 家蚕抗菌肽cecropin A的表达特征及其体内外抑菌研究被引量：3
- 2016年
- 家蚕抗菌肤cecropin A(BmCecA)是家蚕体液免疫中产生的一种重要的抗菌肤。本研究利用RT-PCR技术克隆出BmCecA基因的开放阅读框(ORF),该ORF编码22个氨基酸的信号肤和37个氨基酸的成熟肤,通过蛋白结构分析该成熟肤形成经典的双亲α螺旋。实时荧光定量PCR表明,BmCecA在5龄家蚕的体壁、马氏管、中肠、丝腺、血淋巴和脂肪体中均有表达在脂肪体中表达量最高,其次是血淋巴。通过固相合成法合成BmCecA成熟肤用质谱和聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明其分子量约为4.05 kD,高效液相色谱检测其纯度为89.14%。用合成多肤分别对革兰氏阴性菌大肠杆菌(Escherichia coli)、铜绿假单胞菌(Pseudomouas aerugiuosa)、革兰氏阳性菌球形节杆菌(Arthrobacter globiformis)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)做体外抑菌实验,发现BmCecA对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均有明显的抑菌作用。首次用BmCecA做家蚕的体内抑菌实验,结果显示注射BmCecA的家蚕存活率显著高于对照组相对于对照组,致死中时间(LT_(50))分别延长了17.85%(大肠杆菌)、37.31%(铜绿假单胞菌)、21.92%(球形节杆菌)、49.45%(枯草芽孢杆菌)差异显著。凝胶迁移实验结果说明BmCecA可能在破坏细菌细胞膜之后作用于基因组DNA和RNA,从而导致细菌的快速死亡。本研究结果有利于从分子水平上深入理解家蚕乃至其它昆虫抵御细菌侵染的防御机理,也为家蚕的抗菌育种提供理论依据。
- 吕丁丁耿涛侯成香黄玉霞覃光星郭锡杰
- 关键词：家蚕CECROPIN抗菌活性细菌
- 家蚕感染质型多角体病毒相关基因Arylphorin的克隆与鉴定
- 2013年
- 【目的】克隆家蚕Arylphorin的cDNA全长序列,利用生物信息学对该序列进行分析,检测该基因在家蚕感染质型多角体病毒(Bombyx mori cytoplasmic polyhedrosis virus,BmCPV)后的表达量变化模式,为进一步研究其生物学功能奠定基础。【方法】以家蚕中肠总RNA为模板反转录合成cDNA,利用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆家蚕Arylphorin的全长cDNA;通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析其组织表达模式和在家蚕感染BmCPV后的表达差异。【结果】克隆得到了家蚕Arylphorin的全长cDNA(命名为BmAryl),在GenBank登录号为JN581664。该基因的cDNA全长为2 260 bp,包含1个26 bp 5′非翻译区和1个143 bp的3′非翻译区,3′非翻译区包含有终止密码子、多聚腺嘌呤信号AATAAA和poly(A)尾。其最大开放阅读框(ORF)为2 091 bp,编码的蛋白由696个氨基酸组成,预测蛋白分子量为82.8 kD,等电点为6.07。多序列比对和系统进化分析发现,家蚕BmAryl蛋白与家蚕的性别专一贮藏蛋白2相似性最高,为66%。BmAryl主要在家蚕的脂肪体和血淋巴中表达,精巢和卵巢中的表达量无明显差别;而在家蚕感染BmCPV后该基因在中肠的表达量明显下调。【结论】成功克隆获得BmAryl的全长cDNA,其编码的蛋白质属于芳香蛋白家族,BmAryl主要在家蚕的脂肪体和血淋巴中表达,不存在性别专一性,且家蚕感染BmCPV后BmAryl在中肠的表达明显下调。
- 高坤邓祥元吴萍覃光星侯成香钱荷英耿涛郭锡杰
- 关键词：家蚕质型多角体病毒中肠
- GSTs和GSH-Px在家蚕幼虫抵御球胞白僵菌感染过程中的作用被引量：3
- 2016年
- 本实验研究家蚕幼虫解毒和抗氧化防御体系在抗真菌感染过程尤其是真菌毒素解毒过程中的作用。检测了家蚕幼虫感染球孢白僵菌以及注射球孢白僵菌毒素之后血淋巴、中肠和脂肪体中谷胱甘肽-S-转移酶（GSTs）活力、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）活力、谷胱甘肽还原酶（GR）活力和谷胱甘肽（GSH）含量的变化及GST、GSH-Px基因表达水平的变化，同时还检测了注射GSH和毒素对家蚕幼虫感染球孢白僵菌后存活率的影响。结果表明球孢白僵菌感染家蚕幼虫后脂肪体、中肠、血淋巴中的GSTs、GR、GSH-Px酶活力性显著提高，各组织中BraGSTd1、BmG5Ts1、BmGSTo1和BmGSH-Px的表达量在感染后期（54～72h）也显著上调表达，说明家蚕幼虫可以通过增加酶活力并上调解毒和抗氧化因子的表达量以增强抗真菌感染能力。毒素注射实验表明家蚕幼虫对球孢白僵菌毒素的解毒作用主要在脂肪体和血淋巴中依赖GSTs、GR和GSH来完成，同时定量实验表明BmGSTs1和BmGSTo1在注射毒素24h后显著上调表达，说明它们可能是家蚕幼虫对球孢白僵菌毒素的主要解毒基因。存活率实验结果表明GSH能够缓解球孢白僵菌毒素对蚕体的损害，延长家蚕幼虫的半数致死时间（约6h）。本研究结果表明家蚕幼虫GSTs和GSH-Px构成的解毒和抗氧化防御系统在抗真菌感染过程中起到重要作用，丰富了对家蚕与病原真菌互作机制的认识。
- 耿涛黄玉霞侯成香吕丁丁覃光星郭锡杰
- 关键词：球孢白僵菌解毒作用
- Notch信号通路在体外培养的鹿茸干细胞中的表达
- 2010年
- Notch信号通路是一条进化上十分保守的信号转导系统,在调节干细胞增殖、分化和凋亡方面起到重要作用。研究表明,鹿生茸区骨膜和角柄骨膜分别含有鹿茸发生和再生的干细胞。应用RT-PCR的方法对离体培养生茸区骨膜和角柄骨膜细胞进行检测,得出Notch信号通路各信号因子在2种细胞中的表达情况。结果:Notch-1、Notch-2、Notch-4、Dll-4J、agged-1J、agged-2、Hes-1等信号因子在这2种干细胞中均有不同程度的表达,说明Notch信号通路可能参与了他们的增殖、分化的调控。
- 耿涛杨福合邢秀梅褚文辉孙红梅李春义
- 关键词：NOTCH信号通路
- 一株点青霉菌株及其在生物转化桑叶黄酮苷中的应用
- 一株点青霉菌株(Penicillium notatum)LJ－2菌株，保藏日期为2008年7月14日，保藏登记号为CGMCC No.2590。点青霉Penicillium notatum LJ－2在生物转化桑叶黄酮苷制备...
- 吴福安王俊陈明胜耿涛仇荣赵璐璐
- 文献传递
