蔡媛媛
- 作品数：3 被引量：9H指数：2
- 供职机构：广州医学院第一临床学院医学检验系更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 不孕妇女阴道念珠菌病致病菌分析被引量：7
- 2014年
- 目的了解本地区不孕妇女外阴阴道念珠菌病(VVC)致病菌的菌种分布及药物敏感性情况,为临床治疗提供参考。方法采集不孕妇女阴道分泌物样本,留取念珠菌阳性样本,采用科玛嘉念珠菌显色培养基做培养鉴定,并采用Rosco纸片扩散法做药物敏感性试验。结果收集的454例样本中共分离出86株念珠菌,其中白念珠菌48株,占55.81%;光滑念珠菌24株,占27.91%;热带念珠菌8株,占9.30%;克柔念珠菌4株,占4.65%;近平滑念珠菌2株,占2.33%。分离的菌株对两性霉素B、克霉唑、咪康唑、氟康唑、伊曲康唑的敏感率分别为93.55%、77.91%、65.12%、62.79%、59.30%。结论非白念珠菌在不孕妇女VVC中分离率较高,不同菌种对不同抗菌药物敏感性有较大差异,临床应根据培养鉴定和药物敏感性结果合理使用抗真菌药物。
- 唐晓华江镜全叶俊凯蔡媛媛夏勇
- 关键词：念珠菌药物敏感性试验不孕妇女
- 人Ⅱ型高尔基体膜蛋白73多克隆抗体的制备及免疫学鉴定
- 2013年
- 目的制备人Ⅱ型高尔基体膜蛋白73(Golgi protein 73,GP73)的多克隆抗体,为进一步研究GP73的功能奠定基础。方法利用重组原核表达载体PET-32a-GP73在大肠杆菌BL21中诱导表达,利用切胶方法回收纯化蛋白,并免疫新西兰兔制备多克隆抗体。制备的抗体经硫酸铵沉淀纯化后,用ELISA法和Western blot对多克隆抗体进行效价和特异性检测,用免疫组织化学法(IHC)检测纯化抗体在不同肝组织中识别GP73的能力。结果 GP73蛋白表达成功,并成功获得纯化的GP73蛋白及兔抗GP73多克隆抗体;ELISA法测定多克隆抗体效价>16 000;Western blot证明多克隆抗体的特异性良好;IHC显示GP73蛋白在正常肝组织中仅表达于胆管上皮细胞,而在肝癌组织中表达于肝癌细胞和胆管上皮细胞。结论成功获得了纯化的GP73蛋白及高效价的多克隆抗体,肝脏组织的IHC验证了其良好的特异性。
- 吴玉蔡媛媛徐霞林云恩
- 关键词：肝癌多克隆抗体
- 重组Trail蛋白在大肠杆菌中的表达及纯化条件的优化被引量：2
- 2012年
- 目的:构建肿瘤坏死因子相关凋亡配体胞外功能区的原核表达质粒,优化诱导蛋白表达的相关条件,检测切胶纯化所得蛋白的抗原结合活性,以及亲和层析纯化蛋白的促凋亡功能。方法:扩增Trail胞外功能区第114-281个氨基酸基因序列,插入融合表达载体pET-28α(+)的多克隆位点,构建重组表达质粒pET-28α(+)-Trial114-281。以重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选阳性重组子,调整诱导前菌群的密度(A600)值,诱导时IPTG的浓度、温度及诱导时间,确定最佳诱导条件,同时比较超声、渗透冲击和IP裂解三种破碎细菌方法以及切胶回收和Ni-NTA亲和层析方法对纯化目的蛋白的影响。Western blot鉴定切胶纯化蛋白的抗原结合活性,用Ni-NTA亲和层析方法得到的蛋白作用于A549细胞,采用流式细胞术检测检测该细胞的凋亡率。结果:成功扩增了Trail胞外区基因序列,经测序证实其正确插入到表达载体pET-28α(+)中,经IPTG诱导,在37℃时呈包涵体表达,25℃时为可溶性表达,经软件分析确定A600=0.6,IPTG终浓度为0.6 mmol/L,诱导4 h为包涵体表达的最佳条件;A600=1.0,IPTG 1.0 mmol/L,诱导4 h为可溶性目的蛋白表达的最佳诱导条件。三种破菌方法的比较,超声法获得的蛋白最多。切胶和Ni-NTA亲和柱纯化的方法都得到了目的蛋白,Westernblot分析显示,切胶纯化的蛋白有较好的抗原结合活性,亲和层析得到的可溶性蛋白可以促使A549细胞发生凋亡。结论:成功构建了重组表达载体pET28α-Trial114-281,在A600值、IPTG以及诱导时间都相同的情况下,37℃出现包涵体表达,而25℃则出现了可溶性表达。切胶纯化获得蛋白有较好的抗原结合活性,亲和层析纯化的可溶性蛋白能保持其原有的功能不被破坏,促使肿瘤细胞A549的凋亡。
- 蔡媛媛李雪燕吴玉杜晶春徐霞
- 关键词：目的蛋白纯化
