陈慧慧
- 作品数：18 被引量：32H指数：4
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- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- IL-2与IL-7基因对犬细小病毒VP2 DNA疫苗在小鼠的免疫增强作用
- <正>试验目的:探讨犬白细胞介素-2(cIL-2)与犬IL-7(cIL-7)基因对犬细小病毒(CPV)VP2蛋白DNA疫苗免疫增强的协同作用。【方法】利用含内部核蛋白体进入位点(IRES)的真核表达载体构建cIL-2和c...
- 陈慧慧王利月林洪羽王永红张考李文艳温洁霞仲飞李秀锦
- 文献传递
- 含绿色荧光蛋白基因的PRRSV感染性克隆的制备及特性分析
- 2012年
- 为直观形象地观察PRRSV对细胞的感染,本文拟构建含有绿色荧光蛋白(GFP)基因的重组猪呼吸与繁殖综合征病毒(PRRSV)感染性克隆,并对其某些特性进行分析。首先依据PRRSV病毒株(GenBank:AY545985.1)的序列,以其感染性克隆重组质粒(FL-12)和含有GFP基因的质粒(PCDNA-EF1-GFP)为模板,采用重叠PCR的方法,扩增出上。
- 张考仲飞李秀锦陈慧慧李文艳温洁霞
- 关键词：感染性克隆PRRSV感染病毒株非结构蛋白体外转录
- 人CD14信号肽介导卵清蛋白在HEK293T细胞的高效表达
- 2012年
- 本试验将人CD14信号肽序列与卵清蛋白(ovalbumin,OVA)基因融合,旨在提高OVA在非输卵管上皮细胞中的表达。提取鸡输卵管上皮细胞总RNA,经反转录合成的cDNA,再利用修饰的特异性引物,通过PCR从cDNA中分别扩增出5'端与人CD14信号肽序列融合和非融合的OVA基因,并将它们分别插入到真核表达载体pcDNA3.1A中,构建成表达载体pcDNA-CD14sp-OVA和pcDNA-OVA。经磷酸钙介导,将质粒转染至HEK293T细胞,使其进行表达,用鼠抗OVA单克隆抗体通过免疫印迹(Western blot)法检测OVA表达水平。结果表明:本试验扩增的OVA基因序列与GenBank中的序列(登录号NM_205152)一致,构建的人CD14信号肽序列融合OVA基因的表达载体结构正确。经过在HEK293T细胞的表达,融合人CD14信号肽序列的重组蛋白OVA的表达水平明显得到提高。结果提示,融合人CD14信号肽序列后的重组蛋白OVA在非输卵管上皮细胞中的表达水平明显提高,为OVA基因作为DNA疫苗模式抗原的应用提供了必要的条件。
- 能昌爱李秀锦仲飞李振张峰陈慧慧张考韩冬梅
- 关键词：卵清蛋白重组蛋白表达
- IL-7基因与IL-2基因对DNA疫苗免疫原性增强的协同作用
- 白细胞介素(IL)2和IL-7是动物体重要的细胞因子。IL-2具有促进T细胞的增殖与分化、激活细胞毒性淋巴细胞和巨噬细胞的活性;IL-7具有促进T细胞和B细胞的增殖的活性。研究证明IL-7促进T细胞介导的免疫依赖于IL-...
- 李秀锦陈慧慧仲飞能昌爱韩晓敏王璐孙岩
- 文献传递
- 重组猪肺表面活性蛋白A在体外可抑制PRRSV感染宿主细胞
- 2012年
- 表面活性蛋白A(SP-A)是动物肺泡表面重要的天然防御物质。猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的宿主细胞是猪肺泡巨噬细胞(PAM),SP-A是否对PRRSV的感染有影响尚不清楚。为此本文通过制备重组SP-A在体外分析了SP-A对PRRSV感染的影响。首先采用PCR方法从含有猪SP-A基因的质粒中扩增SP-A基因。
- 张峰仲飞李秀锦王幸兴张考陈慧慧李振李文艳潘红丽韩冬梅
- 关键词：宿主细胞PRRSV感染肺表面活性蛋白肺泡巨噬细胞信号肽序列分泌型表达载体
- IL-7基因与IL-2基因对DNA疫苗免疫原性增强的协同作用
- 2012年
- 白细胞介素(IL)2和IL-7是动物体重要的细胞因子。IL-2具有促进T细胞的增殖与分化、激活细胞毒性淋巴细胞和巨噬细胞的活性;IL-7具有促进T细胞和B细胞的增殖的活性。研究证明IL-7促进T细胞介导的免疫依赖于IL-2。由于IL-2和IL-7 IL-2均有刺激淋巴细胞增殖作用。
- 李秀锦陈慧慧仲飞能昌爱韩晓敏王璐孙岩
- 关键词：免疫原性细胞介导淋巴细胞增殖IL-7
- 慢病毒载体介导猪繁殖与呼吸综合征病毒E蛋白在猪肺泡巨噬细胞中的表达
- 2012年
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)E蛋白是病毒最小的囊膜蛋白,与其它囊膜糖蛋白(GP2a、GP3、GP4)以复合物的形式存在于囊膜中。研究认为E蛋白是一种粒子孔道蛋白,推测与病毒释放和致病过程有关。为研究E蛋白的致病作用,需将E蛋白基因转入猪肺泡巨噬细胞内并使其表达。为此本文利用慢病毒载体将PRRSV的E基因转入巨噬细胞。
- 陈慧慧仲飞李秀锦张考李文艳温洁霞
- 关键词：囊膜糖蛋白基因转入慢病毒载体病毒载体介导致病过程
- 重组猪IL-7在真核细胞的分泌表达及生物活性分析被引量：1
- 2013年
- 为了解猪IL-7(pIL-7)在防治猪免疫抑制性传染病及疫苗生物佐剂中的作用,通过RT-PCR方法从猪脾脏中扩增出含有自身信号肽序列的pIL-7 cDNA基因,将其克隆到pcDNA3.1A表达载体上,构建出羧基端与Myc/His融合的pIL-7基因真核表达载体pcDNA3.1A-pIL-7/MH。由磷酸钙介导将pcDNA3.1A-pIL-7/MH质粒转染人类胚胎肾细胞293T(HEK293T)使其进行瞬时表达,以Western-blot检测构建的pIL-7基因表达载体是否可介导重组pIL-7在真核细胞中进行分泌型表达。然后利用Ni-NTA琼脂糖亲和层析纯化表达的重组pIL-7,并通过淋巴细胞增殖试验检测其的生物活性。结果表明,扩增的pIL-7基因序列与GenBank序列完全一致;构建的表达载体可介导重组pIL-7在真核细胞HEK293T中进行分泌型表达。表达的重组pIL-7对猪脾淋巴细胞有明显的促增殖效应。由此可见,利用真核细胞表达的重组pIL-7具有生物活性。
- 温洁霞林洪羽王利月李文艳张考陈慧慧仲飞李秀锦
- 关键词：真核表达
- 慢病毒载体介导猪繁殖与呼吸综合征病毒E蛋白在猪肺泡巨噬细胞中的表达
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)E蛋白是病毒最小的囊膜蛋白,与其它囊膜糖蛋白(GP2a、GP3、GP4)以复合物的形式存在于囊膜中。研究认为E蛋白是一种粒子孔道蛋白,推测与病毒释放和致病过程有关。为研究E蛋白的致病作...
- 陈慧慧仲飞李秀锦张考李文艳温洁霞
- 文献传递
- 重组猪肺表面活性蛋白A在体外可抑制PRRSV感染宿主细胞被引量：8
- 2012年
- 【目的】研究重组猪肺表面活性蛋白A(SP-A)在体外对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染的抑制作用。【方法】采用PCR方法从含有猪SP-A基因的质粒中扩增SP-A基因,并将其插入到含有人CD5信号肽序列的真核表达载体pcDNA3.1A-CD5中,构建成SP-A基因的真核分泌型表达载体pcDNA-CD5-SPA/MH。将重组表达载体通过磷酸钙介导转染HEK293T细胞进行瞬时表达,通过Western blot方法鉴定表达产物,采用Ni-NTA琼脂糖凝胶亲和层析法从培养基中分离和纯化重组SP-A蛋白,通过ELISA方法检测SP-A蛋白与PRRSV的结合活性。将SP-A蛋白与PRRSV孵育,然后感染MARC-145细胞和猪肺泡巨噬细胞,感染72 h后测定病毒滴度,分析重组SP-A蛋白对PRRSV感染的抑制作用。【结果】结果表明构建的真核表达载体能够介导SP-A基因在HEK293T细胞中进行分泌表达;表达的重组猪SP-A蛋白能够与PRRSV进行剂量依赖性结合;用重组猪SP-A蛋白与PRRSV进行孵育,然后感染MARC-145细胞和猪肺泡巨噬细胞,结果显示SP-A处理的PRRSV感染细胞后的病变程度明显低于对照组。感染72 h后,SP-A处理组的PRRSV在MARC-145细胞和猪肺泡巨噬细胞的滴度明显低于SP-A非处理组。【结论】重组猪SP-A在体外对PRRSV的感染有明显的抑制作用,揭示SP-A具有抗PRRSV的活性。
- 张峰仲飞李秀锦王幸兴张考陈慧慧李振李文艳潘红丽韩冬梅
- 关键词：抗病毒活性猪繁殖与呼吸综合征病毒真核表达
