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用于检测山羊痘病毒的试剂盒: 本发明公开一种用于检测山羊痘病毒的试剂盒。本发明的试剂盒中至少包括有SEQ№1、SEQ№2、SEQ№3和SEQ№4四条引物，试剂盒内还有dNTP、Tris-HC、KCl、(NH<Sub>4</Sub>)<Sub>2</S...; 张强赵志荀范斌吴国华颜新敏李健朱海霞芦晓立孙晓林刘发央; 文献传递

山羊支原体山羊肺炎亚种特异性分子检测靶标的鉴定和应用被引量：2: 2020年; 本文旨在筛选出新的山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum subsp.capripneumoniae,Mccp)特异性分子诊断靶标。首先通过全基因组本地BLASTp方法筛选得到Mccp理论上特异的蛋白基因序列,经BLASTn验证、优选特异性基因92.1作为候选靶标,设计引物92.1F/R,采用普通PCR体系检测4株Mccp(1801、1601、1309F、Zly-14)和7种其他支原体基因组DNA,包括无乳支原体(Ma)PG2、丝状支原体山羊亚种(Mmc)PG3、Mmc YG(前称丝状支原体丝状亚种大菌落型,MmmLC)、绵羊肺炎支原体(Mo)Y98、山羊支原体山羊亚种(Mcc)Ckid、牛支原体(Mb)08M、李奇氏支原体(Ml)PG50,并检测Mccp、Mo、Mmc人工感染羊试验样本DNA,评估该体系的特异性。结果表明92.1F/R引物只能从Mccp菌株及其感染试验样本中扩增出509 bp目的条带,证实该引物可用于检测Mccp,92.1序列可作为CCPP新的核酸诊断靶标,为CCPP诊断和实验室研究提供了一种新的分子标记。; 吴娅琴刘保红袁婷陈芙蔡亚婷郝华芳陈胜利马丽娜刘永生颜新敏储岳峰; 关键词：山羊支原体山羊肺炎亚种引物

一种检测口蹄疫O型病毒的试剂盒及制备方法: 本发明公开一种可用于检测口蹄疫O型病毒的引物，以及用这些引物制备的检测试剂盒和制备方法。本发明的用于检测口蹄疫O型病毒的引物基因序列为SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、和SEQ ID...; 张强卢昌赵志荀吴国华颜新敏李应国岳华周晓黎李健朱海霞代雪玲田波芦晓立高顺平王曼; 文献传递

含O型FMDVP1-2A、3C基因和EGFP基因表达盒的构建被引量：2: 2009年; 采用RT-PCR方法分别扩增口蹄疫病毒O/China99毒株的P1-2A和3C基因,将P1-2A基因连接到pUC119载体,3C基因连接到pMD18-T载体,分别得到重组载体pUC119-P1-2A和pMD18-T-3C;将重组载体pUC119-P1-2A用HindⅢ、BamHⅠ酶切,重组载体pMD18-T-3C用BamHⅠ、NheⅠ酶切;利用酶切所得到的基因片段P1-2A、3C有共同的BamHⅠ酶切位点,实现基因P1-2A、3C的连接,构建重组载体pMD18-T-P1-2A-3C.将基因P1-2A-3C与启动EGFP表达的双向串连痘苗病毒启动子P7.5相连,构建载体p-EGFP-N1-P7.5-P1-2A-3C,并进行PCR扩增、酶切鉴定及序列测定.结果表明:试验成功构建了一侧启动表达P1-2A-3C基因,一侧启动表达标记基因EGFP的表达盒p-EGFP-N1-P7.5-P1-2A-3C.; 王建科吴国华叶奕优颜新敏朱海霞李健朱彩珠张强王雯慧; 关键词：FMDV

E3蛋白:一个重要的痘苗病毒抗干扰素免疫逃避因子被引量：2: 2013年; 痘苗病毒能够对抗宿主的抗干扰素作用是其致病机理中的一个重要方面。E3蛋白是由痘苗病毒编码的一类重要的抗干扰素免疫逃避因子,它通过其羧基末端的dsRNA结合域与dsRNA作用后抑制干扰素产生系统中的PRK、2′,5′-OAS/RNaseL系统和RNA聚合酶Ⅲ介导的抗病毒通路,还能通过抑制ISG15的修饰活性、ADAR1催化腺苷酸转化为次黄嘌呤的编辑活性以及IRF3/7的功能进一步逃避宿主的免疫监控。本文就E3蛋白介导的抗干扰素免疫逃避策略做一简要综述。; 于少雄颜新敏张强; 关键词：痘苗病毒免疫逃避

山羊CLAⅠα链基因的克隆及生物信息学分析: 2017年; 为探究山羊CLAⅠα链基因的多态性,本试验根据GenBank中山羊CLAⅠα链基因序列设计引物,采用RT-PCR技术从10个品系山羊白细胞中克隆山羊CLAⅠα链基因,测序后进行生物信息学分析。结果表明,CLAⅠα链基因长度为1 074bp,编码357个氨基酸。经核苷酸序列分析发现,10个品系山羊CLAⅠα链基因同源性集中在82.8%~99.5%之间。将10个品系山羊CLAⅠα链基因核苷酸推导的氨基酸序列进行比对,发现突变集中在α1区域(22—110位氨基酸)与α2区域(111—203位氨基酸)。遗传进化分析表明,GenBank中山羊CLAⅠα链基因与红寺湖绒山羊、河西绒山羊、陕北绒山羊、阿尔巴斯绒山羊的CLAⅠα基因遗传关系较近,与其他6个品系山羊,即简阳大耳山羊、金堂黑山羊、西农萨能奶山羊、美姑山羊、大足黑山羊、努比亚山羊的CLAⅠα基因遗传关系较远。本试验结果为进一步研究CLAⅠα链基因的多态性奠定了理论基础。; 邓阳吴国华颜新敏赵志荀李杨李健窦永喜张志东张强; 关键词：山羊克隆生物信息分析

一种比较山羊支原体山羊肺炎亚种菌株毒力的方法: 本发明公开一种简单比较山羊支原体山羊肺炎亚种菌株毒力的方法。发明的方法就将等浓度的经复苏的山羊支原体山羊肺炎亚种接种于鸡胚上，再将接种后的鸡胚置于恒温箱内培养，定时检测鸡胚状态及死亡情况，统计各个菌株的鸡胚致死率，以此进...; 陈胜利储岳峰郝华芳颜新敏刘永生毛婷

牛支原体TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用被引量：8: 2019年; 以牛支原体p80基因为靶基因,设计特异性引物与探针,优化反应体系,建立了牛支原体TaqMan探针实时荧光定量PCR(TaqMan real-time PCR)检测方法,并对该方法进行了特异性、敏感性、重复性评估以及临床样本检测。结果显示,特异性试验中,牛支原体2个菌株Cq值均小于18,其余13个非牛支原体菌株Cq值均大于36;敏感性试验中,最低可检3.89拷贝/μL靶DNA,是普通PCR的10~4倍(普通PCR 3.89×10~4拷贝/μL);重复性试验中,组内、组间重复的变异系数均小于1%;44份牛的临床样品利用TaqMan real time PCR检出6份阳性(阳性率为13.64%),分离培养鉴定检出7份阳性,普通PCR检测全部阴性。本研究建立了一种敏感、特异、稳定的牛支原体TaqMan real time PCR检测方法,可用于牛支原体的快速诊断和核酸定量检测。; 翟肖辉王方国郝华芳颜新敏陈胜利Hussam Askar Mohamad朱建勋储岳峰; 关键词：牛支原体 TAQMAN探针实时荧光定量PCR 敏感性

青海地区牦牛牛支原体核酸检测分析被引量：2: 2022年; 为了解青海地区牦牛牛支原体分子流行情况,本试验采用荧光定量PCR(qPCR)方法对2018-2019年采集青海地区的636份牦牛鼻拭子进行牛支原体核酸检测,并对不同地区、年份、年龄、性别、饲养模式的牦牛牛支原体核酸检测结果进行统计分析。结果显示,牛支原体的总检出率为21.86%(139/636),牛支原体在青海不同地区(海北州、海南州、西宁市、海西州)牦牛群存在不同程度的流行(0%~44%);2018年11月检出率为18.02%,2019年6月检出率26.37%;雌性检出率(27.84%)高于雄性检出率(18.41%),差异性显著(P<0.05);0~2岁的检出率最高,为22.26%,其次为3~6岁,检出率为19.50%,6~12岁检出率最低,为18.03%,差异性显著(P<0.05);放牧养殖模式下检出率最高(34.00%),其次是集约化养殖模式(22.81%),放牧+圈养养殖模式下检出率最低(17.47%),差异显著(P<0.05)。青海不同地区牦牛牛支原体存在不同程度的流行,不同年龄、性别、饲养模式存在统计学差异。本研究为明确青海地区牦牛牛支原体流行情况,为制定合理的防制措施提供了参考数据。; 王方国陈胜利颜新敏郝华芳兰仕梅李章程马丽娜储岳峰曹随忠; 关键词：牦牛牛支原体核酸检测

痘病毒F10L基因的克隆及生物信息学分析: 2014年; 将古浪山羊痘病毒的基因组DNA提取出来,并设计引物进行PCR扩增,克隆F10L基因的DNA序列.为了分析山羊痘病毒F10蛋白的分子特征,将PCR产物连接到p GEM-T Easy载体后转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆进行序列测定,利用生物信息学软件对F10L基因序列进行预测分析.结果显示,F10L基因序列由1 335个核苷酸组成的开放阅读框,编码444个氨基酸残基组成的多肽,蛋白质分子质量的理论值53.01 ku,理论等电点为7.14.该蛋白的二级结构中,α螺旋占12.44%,β折叠占15.73%,其余71.83%为无规则卷曲.多序列比对分析显示,不同羊痘病毒分离株F10L序列高度保守,一致性在97%以上.此研究结果为进一步研究F10蛋白的生物学功能和羊痘病毒早期蛋白的分子相互作用奠定了基础.; 赵银龙吴国华吴健朱海霞颜新敏赵志荀李健吴娜张强穆晓峰; 关键词：痘病毒基因克隆生物信息学分析

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颜新敏

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