黄元姣
- 作品数：45 被引量：98H指数：6
- 供职机构：广西医科大学更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区自然科学基金国家自然科学基金广西地方性高发疾病防治研究重点实验室基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学轻工技术与工程更多>>
- 基于同源重组的产绿色荧光蚕丝转基因家蚕的制备
- 2013年
- 采用基因打靶技术对家蚕丝素蛋白基因(fib)进行分子设计与遗传改造,探讨从基因水平改良蚕丝性能的可行性。以家蚕丝素轻链基因(fib-L)终止密码子TAA上游1.2 kb(fib-LL)和下游0.5 kb(fib-LR)片段作为基因打靶载体的左右同源臂,将绿色荧光蛋白基因(gfp)插入到两同源臂的中间,并使其与fib-L基因处于同一读码框,构建基因打靶载体pSK-FibL-L-GFP-FibL-R。将该载体质粒转染BmN细胞后,荧光显微镜下观察细胞呈现绿色荧光,表明载体构建成功。将该载体质粒通过精子介导法导入家蚕品种高白的卵,在G0代筛选出茧呈绿色荧光的家蚕,并通过PCR检测证实其为转基因家蚕;用GFP抗体对G3代转基因家蚕幼虫后部丝腺组织进行Western blotting检测,有分子质量为65 kD的Fib-L-GFP融合蛋白特异性条带呈现。转基因家蚕所产蚕丝在蓝光的激发下发出绿色荧光,表明通过基因打靶将gfp导入了家蚕丝素轻链基因中,并成功实现融合表达。
- 李静芝曹广力杨李阳薛仁宇黄元姣贡成良
- 关键词：家蚕基因打靶绿色荧光蛋白基因
- 蓖麻蚕蛹生物反应器生产重组人表皮生长因子的研究被引量：2
- 2013年
- 重组人表皮生长因子(rhEGF)已经广泛应用于医疗和化妆品。以杆状病毒AnpeNPV为基因表达载体,昆虫为生物反应器而建立的蛋白表达系统已获得成功。本文以人表皮生长因子(hEGF)基因替代柞蚕AnpeNPV中的核多角体基因而获得的AnpehEGF病毒为载体、蓖麻蚕蛹为生物反应器表达的rhEGF蛋白质,采用PCR、West-ern blot和ELISA等实验方法对其进行检测,硫酸铵沉淀和Ni-NTA Agrose亲和层析法对其进行分离纯化。实验结果显示,无论是在基因或是蛋白水平上都可检测到rhEGF的表达。AnpehEGF感染蚕蛹后第6d开始检测到rhEGF的表达量快速上升,第12d达到高峰,第3、6、9、12d的表达量分别为19.77、24.90、618.59、1 952.46ng/g,而到了病毒感染后期(第15d)出现了蛋白降解现象。表达的rhEGF通过分离纯化获得了较纯的产品。结果表明蓖麻蚕蛹作为生物反应器生产外源蛋白rhEGF是可行的,说明利用AnpeNPV和蓖麻蚕蛹可开发更加低成本而又高效的rhEGF生产新途径。
- 伍玉婷黄元姣雷丹青吴勇浒李牡艳小林淳王先裕
- 关键词：生物反应器重组人表皮生长因子
- 细胞实验检测蓖麻蚕蛹生物反应器表达的重组人表皮生长因子的生物学活性被引量：2
- 2012年
- 目的探讨蓖麻蚕蛹生物反应器中分离纯化获得的重组人表皮生长因子(rhEGF)蛋白质的生物学活性。方法采用Tricine-SDS-PAGE和免疫印迹法(Western blot)鉴定rhEGF,通过MTT和台盼蓝法检测rhEGF的细胞活性。结果 Tricine-SDS-PAGE、Western blot结果显示,蓖麻蚕蛹中分离纯化获得的rhEGF具有正确的分子量和免疫原性;MTT法显示,纯化的rhEGF具有酶促活性,且酶促活性优于rhEGF标准蛋白(P<0.05),其最高活性浓度为1.0μg/L,在0.0625～1.0μg/L浓度范围内具有剂量依赖性;rhEGF能够促进Balb/c3T3细胞的分裂增殖,效果优于rhEGF标准蛋白(P<0.05)。结论 AnpehEGF感染的蓖麻蚕蛹中分离纯化获得的rhEGF,具有类似天然hEGF的生物学活性,且效果优于rhEGF标准蛋白;rhEGF的细胞实验为进一步的动物实验提供了基础。
- 伍玉婷黄元姣雷丹青吴勇浒李牡艳
- 关键词：重组人表皮生长因子生物学活性细胞实验
- 基于网络药理学探讨知母皂苷A-Ⅲ抗鼻咽癌的作用机制被引量：3
- 2021年
- 目的通过网络药理学探讨知母皂苷A-Ⅲ抗鼻咽癌(NPC)的作用靶点及分子机制。方法利用Swiss Target Prediction数据库获取知母皂苷A-Ⅲ作用靶点,通过GeneCards数据库检索NPC相关疾病靶点,将其与知母皂苷A-Ⅲ作用靶点映射,使用Cytoscape 3.6.1软件构建知母皂苷A-Ⅲ-鼻咽癌疾病靶点网络图,并运用DAVID数据库进行GO功能富集分析及KEGG通路富集分析。结果获得知母皂苷A-Ⅲ抗鼻咽癌的潜在靶点31个,化合物-关键靶点-通路网络图显示关键靶点主要包括PRKCA、IGF1R、VEGFA和KDR等。GO功能富集分析获得分子功能条目13个、生物过程条目55个和细胞组成条目10个,KEGG通路富集得到20条相关通路,涉及蛋白多糖通路、癌症信号通路和PI3K-Akt信号通路等信号通路。结论基于网络药理学多靶点、多通路的整体作用特点,预测了知母皂苷A-Ⅲ抗鼻咽癌的作用靶点和潜在作用机制,以期为下一步实验研究提供科学依据。
- 成南南徐宁杨萌哲白先愚郭兴喆杨建宇吕安乔黄元姣
- 关键词：网络药理学鼻咽癌分子机制
- 鼻咽癌细胞中S100A8与S100A9基因的克隆及其质粒构建和表达被引量：5
- 2015年
- 我们发现S100A8和S100A9蛋白质不仅在鼻咽癌患者血浆中水平高于健康人,而且在鼻咽癌组织及培养细胞中也存在高表达。本研究的目的是在鼻咽癌细胞中克隆S100A8和S100A9基因并构建表达质粒和在鼻咽癌细胞中表达,为内源性S100A8和S100A9蛋白质与鼻咽癌发生发展的关系研究奠定基础。PCR扩增目的基因S100A8和S100A9片段,将其插入载体p Bud CE4.1构建S100A8-S100A9-p Bud CE4.1表达质粒,经双酶切、PCR及测序鉴定后转染至人鼻咽癌细胞系(CNE1)进行表达并用Real time-PCR及Western Blot进行检测。PCR、双酶切和测序结果显示,S100A8和S100A9氨基酸序列无变异(S100A8有1个碱基突变),表达质粒S100A8-S100A9-p Bud CE4.1构建正确。Real Time-PCR和Western Blot结果显示,S100A8和S100A9基因在CNE1中正确转录与表达。成功克隆S100A8和S100A9基因并构建S100A8-S100A9-p Bud CE4.1表达质粒且可在鼻咽癌细胞中稳定表达。
- 何芹黄元姣撖子建鄢雪敏蔡琰
- 关键词：鼻咽癌S100A8S100A9
- 荔浦香芋乳酸发酵系列产品工艺研究被引量：4
- 2009年
- 对乳酸菌发酵荔浦香芋汁工艺进行了初步探讨。实验以荔浦香芋、牛奶粉、蔗糖为主要原料,通过正交试验确定了合适的发酵条件。牛奶中加入40%荔浦香芋浆,添加蔗糖量为5%,保加利亚乳杆菌与嗜热链球菌最佳添加比例为1∶1,发酵时间为24h,发酵温度为42℃,得到荔浦香芋酸奶和香芋果冻口感良好、性质稳定,具有香芋的清香和乳酸发酵食品的独特风味。
- 张贝贝玄超黄元姣
- 关键词：保加利亚乳杆菌嗜热链球菌乳酸发酵
- 芒果乳酸菌饮料的配方工艺研究被引量：4
- 2008年
- 对芒果乳酸菌饮料的配方工艺作了初步研究。通过单因素试验确定了以果胶和CMC按照1:1的配制组成复合稳定剂作为芒果乳酸菌饮料中的稳定添加剂。通过正交试验确定了芒果乳酸菌饮料的最佳配方工艺如下:芒果汁的添加量为12%,发酵乳的添加量为30%,白砂糖的添加量为6%,pH值为4.0(4.2),稳定剂的添加量为0.4%。本产品口感极佳,可以作为一种新型绿色保健饮品进行推广。
- 张贝贝玄超黄元姣
- 关键词：芒果乳酸菌饮料正交试验
- 携带绿色荧光报告基因EBV-LMP2A真核表达载体构建及转染鼻咽癌细胞
- 2016年
- 目的构建携带绿色荧光基因的真核表达载体p IRES2-Zs-Green1-LMP2A,并转染至鼻咽癌CNE2细胞。方法从EB病毒阳性的狨猴淋巴瘤细胞B95-8中克隆EB病毒编码的EBV潜伏膜蛋白2A(latent membrane protein 2A,LMP2A)序列,并定向克隆入p IRES2-Zs-Green1载体,双酶切及测序鉴定重组的真核表达载体p IRES2-Zs-Green1-LMP2A;通过脂质体转染将重组的真核表达载体p IRES2-Zs-Green1-LMP2A转染至鼻咽癌CNE2细胞(实验组),同时另设转染p IRES2-Zs-Green1载体的阴性对照组及未转染的空白对照组。利用质粒所携带的绿色荧光蛋白表达计算细胞转染效率,RT-PCR检测目的基因LMP2A在鼻咽癌CNE2细胞中的表达。结果双酶切及测序鉴定证实真核表达载体p IRES2-Zs-Green1-LMP2A构建成功,荧光显微镜下发现实验组和阴性对照组细胞均发出绿色荧光,实验组细胞转染率约为75%;RT-PCR检测发现实验组细胞中有目的基因LMP2A表达,但阴性对照组和空白对照组均未检测到目的基因表达。结论成功构建了p IRES2-Zs-Green1-LMP2A真核表达载体并转染鼻咽癌CNE2细胞,目的基因LMP2A可在转染的鼻咽癌CNE2细胞中稳定表达。
- 鄢雪敏撖子建蔡琰余展鹏黄元姣
- 关键词：序列克隆
- 鼻咽癌患者血清和鼻咽组织中8-羟基脱氧鸟苷含量的变化
- 2009年
- 目的:8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)是DNA损伤性生物标志物。通过检测鼻咽癌患者血清和鼻咽组织中8-OHdG的水平,初步探究鼻咽癌的发生和发展是否与DNA损伤有关。方法:利用抗8-OHdG单克隆抗体,通过ELISA和免疫荧光组织化学方法分别检测鼻咽癌患者血清和鼻咽组织中8-OHdG的水平。结果:8-OHdG在鼻咽癌患者血清和组织中表达水平较高,与正常人血清和慢性咽炎组织比较差异显著(P<0.05)。结论:结果提示鼻咽癌的发生和发展可能与8-OHdG的水平有关。8-OHdG有望成为辅助鼻咽癌诊断的一个生物标志物。
- 黄元姣张贝贝马宁玄超盛晓晓木村真理子
- 关键词：鼻咽肿瘤8-羟基脱氧鸟苷
- SELDI-TOF-MS技术在筛选肝癌患者血清标记物中的应用被引量：5
- 2007年
- 目的：筛选肝癌患者血清中特异标记物。方法：利用表面加强激光解吸电离—飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）技术及其配套蛋白质芯片,对33例肝癌患者、33例正常人和17例慢性肝病患者的血清蛋白质图谱进行检测,结合Biomarker Patterns Software（BPS）建立诊断模型。结果：肝癌患者与正常人和慢性肝病患者血清蛋白质图谱在相对分子质量为2000-50000范围内,有73个蛋白质峰差异有统计学意义（P〈0.05）。经软件分析,建立由相对分子质量为4177和7789的标记蛋白组成的肝癌诊断模型,其诊断肝癌灵敏度为81.8%（27/33）,特异度为80%（40/50）。结论：SELDI-TOF-MS蛋白质芯片技术是一种快速、简便易行、用量少和高通量分析方法,不仅能直接筛选出肝癌患者血清中相对特异的潜在标记物,而且具有较好的临床应用价值。
- 覃健张志勇何敏王琪韦霄黄元姣
- 关键词：肝癌肿瘤标记物
