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北京地区两株人偏肺病毒M蛋白基因的原核表达及抗原活性分析被引量：1: 2007年; Human metapneumovirus(hMPV) is a recently identified respiratory virus more like human respiratory syncytial virus in clinical symptoms.Matrix protein(M) is one of the most important structural proteins.For further studying of hMPV,the full length of M genes from the recombinant plasmid pUCm-M1816 and pUCm-M1817 were cloned by PCR and sub-cloned into the pET30a(+) vector,which is a prokaryotic expression vector,after dual-enzyme digestion with Bam HI and Xho I.The positive recombinated plasmids were transformed into E.coli BL21(DE3) and expressed under the inducing of IPTG.Target proteins were characterized by SDSPAGE and Western blotting.In this article,we’ve successfully constructed the recombinated plasmids pET30a-M1816 and pET30a-M1817 which have correct open reading frames confirmed by dual-enzyme digestion analysis and sequencing. The fusion proteins with 6·His-N were highly produced after inducing by 1mmol/L IPTG at 37℃.A unique protein band with approximate 27.6 kD was characterized by SDS-PAGE.Most of the target protein existed in inclusion body.Western blot analysis showed that the target protein has specific binding reaction to rabbit antiserum against polypeptides of the matrix protein of hMPV.So the M genes were highly expressed in the prokaryotic system and the expressed M proteins have specific antigenic activities.It can be used for further studying of hMPV infections in Beijing.; 曹守春钱渊李国华朱汝南赵林清丁雅馨; 关键词：人偏肺病毒原核表达

上海地区婴幼儿腹泻的轮状病毒分子流行病学研究被引量：38: 2004年; 目的　了解上海地区婴幼儿腹泻轮状病毒感染的分子流行病学特点。方法　收集复旦大学儿科医院 1999年 11月～ 2 0 0 1年 12月 ,住院的腹泻病儿童粪便标本 12 30份。采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测轮状病毒基因组 ,用核酸杂交确定轮状病毒G血清型别。采用Kruskal Wallis非参数统计法对不同G血清型别的临床变量作分析。结果　 12 30份标本中轮状病毒基因阳性 4 93份(40 1% ) ,其中RNA长型 397份 (80 5 % ) ,短型 5 5份 (11 2 % ) ,混合型 18份 (3 7% ) ,未能分型 2 3份(4 7% )。 32 8份含有足量RNA的标本行RT PCR扩增VP7全基因 ,2 5 4份标本 (77 4 % )获得阳性产物 ,进一步作杂交分型显示G1血清型 14 1例 (5 5 5 % ) ,占第一位 ;G3血清型 70例 (2 7 6 % ) ,占第二位 ;G2血清型 2 4例 (9 4 % ) ,占第三位 ;混合感染血清型 16例 (6 3% ) ,占第四位 ;仅发现 1例G4型(0 4 % ) ,未分型 2例 (0 8% )。所有G2型均为电泳短型 ,而G1、G3、G4均为电泳长型。四种型别轮状病毒感染患儿的平均发病年龄以及发热峰值、热程、每天腹泻峰次数、腹泻天数、呕吐天数差异无显著意义。结论　A组轮状病毒是目前上海地区腹泻儿童的主要致病原。在不同的 3年中 ,轮状病毒的电泳型均以长型为主 ,流行血清型为G1 G3型。; 曾玫朱启镕张又李国华陈冬梅丁雅馨钱渊; 关键词：婴幼儿腹泻流行病学病毒基因

人Boca病毒外壳蛋白VP2在杆状病毒中的表达及病毒样颗粒的构建被引量：2: 2009年; 为了得到结构与功能更接近于天然病毒的人Boca病毒（HBoV）主要外壳蛋白VP2,将来源于北京急性呼吸道感染患儿标本（BJ3722）的HBoV VP2基因编码区克隆至杆状病毒表达转移载体（pFastBac1）,通过转座反应获得重组Bacmid DNA,以这种DNA转染昆虫细胞Sf9。收获重组病毒及其昆虫细胞培养物,经SDS-PAGE并应用兔抗HBoV VP2高价免疫血清进行Western blot,以检测所表达的VP2蛋白。昆虫细胞经重组病毒感染后7~10d细胞完全裂解时,收获培养上清（VLPs-A）,或在感染后4~5d细胞裂解前收获细胞并将其裂解（VLPs-B）,经两次40%的蔗糖垫超速离心,所得的样品经Western blot和间接免疫荧光方法（IFA）检测,以确定VLPs的组分,然后应用免疫电镜观察病毒样颗粒的形态结构。通过考马斯亮蓝染色和Western blot检测,均可检测到分子量约61kD的目的蛋白;通过IFA在重组杆状病毒感染的Sf9细胞中检测到特异性荧光,表明HBoV VP2蛋白得到了表达并具有抗原特异性。纯化后的样品在电镜下可见类似于天然细小病毒B19的直径20nm左右的具有空壳结构的球形颗粒。本研究成功构建了HBoV VP2重组杆状病毒,得到了具有抗原特异性的HBoV VP2蛋白表达并形成了HBoV的VLPs。; 赵林清钱渊丁雅馨朱汝南邓洁王芳孙宇LiYan; 关键词：重组杆状病毒

人副肠孤病毒与儿童脓毒症和中枢神经系统感染的相关性被引量：6: 2014年; 目的了解疑似中枢神经系统（CNS）感染患儿中人副肠孤病毒（HPeV）的感染状况及脓毒症感染的关系.方法回顾性收集2012年因疑似CNS感染而在首都儿科研究所附属儿童医院住院患儿的脑脊液标本.采用针对HPeV基因组相对保守的5＇端非编码区和变异显著的衣壳蛋白基因3和1交界区的通用引物和分型引物,分别对脑脊液标本核酸进行反转录巢式PCR （RT-nPCR）扩增.阳性标本的PCR产物直接进行核苷酸序列测定,与GenBank中的序列进行比对分析并建立系统进化树.对HPeV筛查阳性的脑脊液标本进行肠道病毒（EV）、EB病毒（EBV）和人巨细胞病毒（HCMV）的检测.同时收集HPeV筛查阳性患儿的其他类型标本（包括血清、鼻咽洗液、粪便标本等）进行上述检测.结果 577份脑脊液标本中检测到18份HPeV阳性标本,检出率为3.1％.阳性患儿中男12例,女6例,年龄范围为15 d～14岁,其中3个月以下患儿最多,占7例;其次是3个月～1岁年龄组5例;另有3例阳性患儿＞9岁.对分型成功的10份脑脊液标本中HPeV的序列分析显示7份为HPeV 3型,3份为HPeV 1型.18份HPeV筛查阳性的脑脊液标本中EV、EBV和HCMV检测均为阴性.脑脊液HPeV筛查阳性患儿的其他类型标本中,8份血清标本中检出2份阳性（均为HPeV3）,其中1份与脑脊液标本检出及分型结果一致,而另1份对应脑脊液标本筛查为阳性,但未分出型别;2份粪便标本中检出1份阳性（HPeV1）,但对应脑脊液标本未分出型别.HPeV阳性患儿临床诊断主要是脓毒症（7/18）和CNS感染（4/18）.其中6例（6/8） HPeV3阳性患儿诊断为脓毒症.HPeV3感染多集中于8月份,而HPeV1则集中于1月份.结论 HPeV与北京儿童脓毒症和CNS感染性疾病相关.1岁以下儿童为易感人群.HPeV3型为脑脊液中主要的检出型别.; 罗雷朱汝南赵林清邓洁王芳孙宇宋秦伟丁雅馨钱渊; 关键词：中枢神经系统感染脓毒症儿童

应用xTAG RVP技术分析不同病情程度的儿童急性呼吸道感染病毒病原: 目的：为了解婴幼儿急性呼吸道感染的病毒病原和病情程度的关系。方法：对门诊、住院急性呼吸道感染的患儿进行病毒病原的分析。收集506份门诊、270份普通住院和114份重症住院患儿的临床标本，经分层随机抽样，每组抽取90份，共...; 宋秦伟朱汝南钱渊赵林清邓洁孙宇王芳丁雅馨; 关键词：病毒病原

人呼吸道合胞病毒快速抗原检测方法的床旁检测适用性探讨被引量：15: 2017年; 目的探讨呼吸道合胞病毒（RSV）快速抗原检测方法的临床实用性，为临床选择床旁检测方法提供依据。方法收集2015年1月5日至2月7日首都儿科研究所附属儿童医院临床疑为病毒感染的急性呼吸道感染（ARI）住院患儿呼吸道标本209份，其中包括咽拭子标本78份、鼻咽分泌物标本131份。应用免疫层析方法，对上述标本进行RSV快速抗原检测，应用转录（1iT）-巢式PCR进行RSV核酸检测。对其中的鼻咽分泌物标本，同时应用直接免疫荧光进行RSV抗原检测。统计学分析快速抗原检测方法的灵敏度、特异度及与对照方法间的一致性。结果RSV快速抗原检测方法与直接免疫荧光相比较，在鼻咽分泌物检测中特异度为97．3％，灵敏度为83．9％，两种方法的一致性检验Kappa=0．86；X^2=73．9561，P〈0．01；与RT-巢式PCR相比较，特异度在鼻咽分泌物中为100．0％，咽拭子中为92．0％，灵敏度在鼻咽分泌物中为74．2％，咽拭子中为77．8％，两种方法的一致性检验在鼻咽分泌物中Kappa=0．74，X^2=73．9561，P〈0．01，在咽拭子中Kappa=0．62，X^2=25．2478，P〈0．01。采用RSV快速抗原和RT-巢式PCR检测，咽拭子标本的RSV阳性检出率（21．7％、7．3％）均明显低于鼻咽分泌物标本（78．3％、78．0％）。RSV快速抗原检测方法可床旁、手工操作，整体操作所需时间约为10min。结论RSV快速抗原检测方法与直接免疫荧光及RT-巢式PCR方法相比较，有很好的灵敏度与特异度，RSV快速抗原检测为RSV阳性的标本可确定为阳性，但阴性结果需要进一步经直接免疫荧光及RT-巢式PCR方法确证；对临床诊断为急性呼吸道感染的儿童进行RSV检测时更适合用鼻咽分泌物标本；RSV快速抗原检测方法具有快速、高效、操作方便等特点，适合于床旁检测。; 丁雅馨田润钱渊孙宇邓洁王芳朱汝南赵林清; 关键词：呼吸道合胞病毒床旁检测抗原检测

北京地区鼻病毒在儿童重症下呼吸道感染中作用的研究: 目的：为了解北京地区重症下呼吸道感染儿童中鼻病毒(HRV)的感染状况。方法：2010年9月至2012年11月收集365份重症住院患儿的临床标本,首先应用xTAG RVP FAST呼吸道病毒检测试剂盒检测18种病毒及亚型,...; 宋秦伟朱汝南钱渊赵林清邓洁王芳孙宇丁雅馨; 关键词：呼吸道感染儿童

血清特异性抗体检测在儿童呼吸道病毒感染病原诊断中应用的探讨被引量：39: 2012年; 目的探讨常见呼吸道病毒特异性IgM抗体检测在儿童急性下呼吸道感染（ALRI）病原快速诊断中的实际应用价值。方法2009年3月至2010年9月在首都儿科研究所附属儿童医院就诊患儿207例，符合ALRI诊断标准，采集鼻咽分泌物用直接免疫荧光法（DFA）检测呼吸道合胞病毒（RSV）、腺病毒（ADV）、甲型流感病毒（IFVA）、乙型流感病毒（IFVB）和副流感病毒1、2、3型（PIV1、PIV2、PIV3）7种常见呼吸道病毒抗原，同时收集患儿急性期血清，采用ELISA和间接免疫荧光方法（IFA）分别检测血清中常见呼吸道病毒的特异性IgM。结果DFA、ELISA和IFA检测结果的阳性率分别为67．6％、57．5％和39．6％。ELISA和IFA与DFA检测结果符合率分别为21．7％和31．4％。ELISA和IFA与DFA检出病毒相符的患儿采血时发病天数平均值从高到低依次分别为ADV（12．0d）、PIV2（9．6d）、IFV（9．5d）、RSV（5．3d）和PIV3（15．0d）、ADV（9．2d）、RSV（7．4d）。3岁以下年龄组患儿血清IgM阳性和抗原检测的符合率较高。结论尽管血清IgM抗体检测的结果与抗原检测的结果有差异，但对儿科ALRI的早期快速诊断有一定的应用价值，尤其对于低年龄儿童；另外可以提供呼吸道病毒感染的血清学证据，如与病毒抗原诊断方法联合应用可提高病原确诊率。; 宋秦伟朱汝南邓洁王芳赵林清孙宇丁雅馨钱渊; 关键词：儿童呼吸道感染免疫球蛋白M 抗体

北京脓毒症患儿血清中发现的3型人副肠孤病毒的全基因组序列分析: <正>目的 3型人副肠孤病毒(HPeV3)是近年发现与儿童脓毒症密切相关的一种病原体。HPeV基因组为不分节段的单股正链线性RNA。分析HPeV3地方株基因组序列特征。方法将一名HPeV3核酸检测阳性的脓毒症患儿(BJ-...; 朱汝南罗雷钱渊赵林清邓洁王芳孙宇宋秦伟丁雅馨; 文献传递

北京新发现的人偏肺病毒N蛋白的高效表达及抗原活性初步分析: 背景人偏肺病毒(hMPV)是新近发现的呼吸道感染相关病毒,归属于副黏病毒科肺病毒亚科。呼吸道感染是世界范围内不同年龄阶段的常见疾病,文献显示相当一部分不明原因的呼吸道感染疾病(RTIs)与hMPV相关。近来不同国家和地区...; 曹守春钱渊朱汝南李国华丁雅馨赵林青; 关键词：人偏肺病毒 N蛋白原核表达抗原活性; 文献传递

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