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人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)cDNA的克隆和表达: 为研究人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在治疗神经系统变性疾病中的作用,我们克隆了bFGF的cDNA序列,在添加Kozak序列后, 构建了bFGF的真核表达载体并在猴肾成纤维细胞系COS7中进行体外表达.实验过程为首先...; 于凤山; 关键词：神经系统变性疾病脑胶质瘤碱性成纤维细胞生长因子; 文献传递

人碱性成纤维细胞生长因子基因在COS-7细胞中的表达及活性检测被引量：6: 2000年; 目的获得人碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ），用于治疗神经系统疾病；克隆添加Ｋｏｚａｋ序列的ｂＦＧＦｃＤＮＡ序列，用于真核细胞表达。方法提取国人脑胶质瘤细胞系ＢＴ３２５总ＲＮＡ，ＲＴ－ＰＣＲ法扩增ｂＦＧＦＣＤＮＡ片段，重组于ｐＧＥＭ－３ｚｆ（＋）载体，测序正确后构建表达载体，转染猴肾成纤维细胞系ＣＯＳ－７，ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ检测表达，收集培养上清用ＰＣ－１２进行活性检测。结果ＲＴ－ＰＣＲ扩增到４７３ｂｐ的带有Ｋｏｚａｋ序列的ｃＤＮＡ片段；成功构建了真核表达载体；在ＣＯＳ－７得到了表达，并有一定的生物活性。结论由克隆到的ｂＦＧＦ　ｃＤＮＡ片段构建的真核表达载体能在ＣＯＳ－７中表达、分泌．并具有生物活性。; 于凤山段德义陈立南秦丽华徐群渊姜传涛; 关键词：CDNA克隆 BLOT; 全文增补中

人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)cDNA的克隆被引量：1: 2000年; 为了研究人碱性成纤维细胞生长因子在治疗神经系统疾病中的作用 ,克隆其 c DN A序列 ,并添加 K ozak序列 ,以用于真核细胞表达。本实验提取我国自建的脑胶质瘤细胞系 BT32 5总 RN A,设计上、下游引物用逆转录 PCR法扩增 c DNA片段 ,然后重组于 p GEM- 3zf( + )载体 ,酶切鉴定插入片段正确后测序。结果 :RT- PCR扩增到 4 73bp的带有 K ozak序列的 c DN A片段。显示 :克隆到碱性成纤维细胞生长因子 c DN A片段。; 于凤山段德义孙成三秦丽华徐群渊; 关键词：RT-PCR 神经系统疾病基因克隆

大鼠Fas配体基因的克隆: 2000年; 目的　研究 Fas配体 (Fas ligand,Fas L )在移植免疫方面的作用 ,克隆其编码的全部 c DNA序列 ,并添加 Kozak序列 ,以便在真核细胞高效表达大鼠 Fas L。　方法　从大鼠的睾丸组织中提取总 RNA,设计上、下游引物以 RT- PCR的方法扩增出一 931bp的 DNA片段 ,将这一片段重组于 p BK - RSV载体中 ,酶切鉴定插入片段正确后进行全序列分析。　结果　证实该研究所克隆的 c DNA是编码正确的大鼠 Fas L基因 ,与发表于 Gene Bank上的序列相比 ,完全正确。已构建成用于真核表达的重组质粒 p BK- RSV/r Fas L。　结论　克隆到了编码正确的大鼠Fas L的 c DNA全序列 ,对移植免疫和帕金森病基因治疗的基础研究及临床应用具有重要意义。; 孙成三段德义于凤山于恩华徐群渊; 关键词：基因克隆 DNA FAS配体震颤性麻痹

人GDNF在原代培养的大鼠成纤维细胞中的表达被引量：3: 2001年; 目的　研究人脑胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)在治疗神经系统疾病中的作用 ,克隆其前体蛋白 c DNA序列 ,并用于真核细胞表达。　方法　提取我国自建的脑胶质瘤 BT32 5细胞总 RNA,用逆转录 PCR法扩增 GDNF全长 c DNA并构建其真核表达载体 p CI- neo- GDNF,然后转染原代培养的成纤维细胞 ,免疫组织化学及原位杂交检测 GDNF在细胞中的表达。　结果　从国人脑胶质瘤细胞中扩增到 5 5 8bp的 GDNF全长 c DNA,并在GDNF转基因原代成纤维细胞中检测到重组 GDNF的转录和表达。　结论　克隆到的 GDNF全长 c DNA片段 ,可用于真核细胞表达 ;其转基因细胞脑内移植后应能治疗包括帕金森病在内的神经系统变性疾病。; 段德义杨慧赵春礼于凤山李淑婷鲁强徐群渊; 关键词：胶质细胞源性神经营养因子 GDNF 逆转录-聚合酶链反应 RT-PCR

GDNF在人脑胶质瘤细胞中表达的检测及其cDNA的克隆被引量：1: 2001年; 为研究人脑胶质细胞源性神经营养因子在脑胶质瘤中的表达及其在治疗神经系统疾病中的作用 ,本研究克隆了其前体蛋白及其成熟多肽的 c DNA序列 ,将之用于真核及原核细胞表达。提取我国自建的脑胶质瘤细胞系 BT32 5总 RNA,设计两对引物用逆转录 PCR法扩增上述两种长度的 c DNA片段 ,然后重组于 p GEM-T载体 ,酶切鉴定插入片段正确后测序。结果表明 ,脑胶质瘤细胞中只扩增出 5 5 8bp的胶质细胞源性神经营养因子全长 c DNA片段 ,未见 6 36 bp片段 ;且扩增效率较成熟多肽 c DNA甚低。提示 ,该细胞合成的胶质细胞源性神经营养因子可能还存在不含有信号肽而只能在细胞内潴留的成熟多肽形式。作为自泌性生长因子 ,它可能调节瘤细胞生长等生物学行为 ;同时克隆到的胶质细胞源性神经营养因子全长及其成熟多肽的 c DNA片段。; 段德义孙成三杨有文于凤山张进禄徐群渊; 关键词：胶质细胞源性神经营养因子 DNA序列分析胶质瘤细胞

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于凤山