于清洋
- 作品数：8 被引量：16H指数：3
- 供职机构：延边大学农学院动物医学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金吉林省自然科学基金吉林省牧业管理局资助项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 延边白鹅IFN-γ基因的原核表达及其多克隆抗体的制备被引量：3
- 2015年
- 为制备抗延边白鹅IFN-γ蛋白的多克隆抗体,以已制备的pMD-IFN-γ质粒为模板,通过PCR扩增到延边白鹅IFN-γ基因,经TA克隆和BamHⅠ、EcoRⅠ双酶切,将目的基因亚克隆至pGEX-4T-1原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),进行IPTG诱导表达,将经SDS-PAGE及Western blot鉴定正确的重组蛋白用GST标签纯化试剂盒纯化,以纯化的重组蛋白作为抗原,免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体并进行ELISA检测。结果显示,成功构建了原核表达载体p GEXIFN-γ,表达的重组蛋白以包涵体形式存在,分子质量约为43 ku,制备的小鼠抗IFN-γ多克隆抗体效价为1∶16 000。
- 张颖刘恩平陈海迪高旭张立媛于清洋鲁承梁晚枫
- 关键词：IFN-Γ基因原核表达多克隆抗体
- 犬细小病毒YBYJ株的分离鉴定及VP2基因的序列分析被引量：4
- 2014年
- [目的]为分离犬细小病毒（CPV）.[方法]采集疑似CPV感染病死犬的组织病料,用胎猫肾细胞（F81）进行病毒分离,并对分离的病毒进行回归动物试验、间接免疫荧光（IFA）及VP2基因PCR扩增鉴定.[结果]经盲传3代后FS1出现明显细胞病变（CPE）,分离病毒可导致2～3月龄犬出现典型犬细小病毒病（CP）的临床症状和特征性病理变化,通过IFA观察到特异性的绿色荧光,PCR扩增到VP2基因全长为1 755 bp,编码584个氨基酸.它与国内外具有代表性的18株CPVVP2基因的核苷酸同源性为98.0％ ～ 99.8％,氨基酸同源性为96.1％ ～99.8％.[结论]用F81细胞成功分离到1株强毒CPV,命名为YBYJ株.
- 张立媛高旭陈海迪于清洋方爽
- 关键词：犬细小病毒VP2基因
- 鹅细小病毒YBLJ株NS1基因的克隆及生物信息学分析被引量：1
- 2016年
- 为了克隆鹅细小病毒（GPV）NS1基因,并对其进行生物信息学分析,试验参照GenBank发表的GPV全基因组序列（U25749）设计扩增GPV-NS1基因的1对特异引物,经PCR扩增,将克隆的GPV-NS1基因进行TA克隆和转化,对鉴定正确的质粒进行测序,并对测序结果进行生物信息学分析。结果表明：YBLJ株GPV-NS1基因全长1884bp,编码627个氨基酸,与其他11株GPV的NS1基因核苷酸同源性为93.6%～99.9%,氨基酸同源性为96.2%～99.8%;蛋白二级结构中α螺旋占31.42%,β折叠占19.30%,无规则卷曲占49.28%;蛋白三级结构中α螺旋和β折叠占GPV-NS1总蛋白的一半以上的比例。说明GPV-NS1基因和其编码的氨基酸均较保守,尤其氨基酸更为保守,提示NS1蛋白虽然是非结构蛋白,但其对于GPV应该是至关重要的功能蛋白。
- 宋爽高旭于清洋张立媛鲁承
- 关键词：鹅细小病毒NS1基因非结构基因生物信息学
- 表达鹅细小病毒VP3基因重组腺病毒的构建与鉴定被引量：3
- 2014年
- [目的]构建表达鹅细小病毒(GPV)VP3基因的重组腺病毒,为机体免疫试验和免疫效果评价奠定基础。[方法]以重组质粒pc DNA-VP3为模板,以GPV-VP3为目的基因,构建GPV-VP3重组腺病毒载体,通过转染获得能稳定表达GPV-VP3基因的重组腺病毒,通过IFA和Western-blot检测GPV-VP3基因的表达情况。[结果]扩增到的GPV-VP3基因全长为1 605 bp,线性化的重组腺病毒穿梭质粒p CR259-VP3能在QBI-HEK293细胞中瞬时表达GPV-VP3基因,表达蛋白的分子量约为60 Ku。[结论]该重组腺病毒的构建将为GPV新型疫苗研发和后期体内试验奠定基础。
- 陈海迪高旭张颖许应天张立媛于清洋鲁承
- 关键词：鹅细小病毒VP3基因重组腺病毒真核表达
- 犬细小病毒YBYJ株NS1基因的克隆及序列分析被引量：3
- 2015年
- 为了克隆YBYJ株犬细小病毒（CPV）NS1基因，并对其进行序列分析，试验选择GenBank中的CPV—NS1基因（登录号为NC_001539）序列设计1对特异性引物，以延边大学预防兽医学实验室分离的CPVYBYJ株为毒株，经PCR扩增得到NS1基因，将其克隆至pMD18-Tsimple载体，然后进行基因测序和序列分析。结果表明：YBYJ株CPV—NS1基因大小为2007bp，编码668个氨基酸，与国内外其他10株CPV—NS1基因的核苷酸同源性为98．0％-99．7％，氨基酸同源性为96．7％-99．7％。提示CPV—NS1基因变异较小，遗传进化相对稳定。
- 张立媛高旭鲁承梁晚枫李海峰于清洋王振亮董鹏刘超
- 关键词：NS1基因克隆
- 鹅细小病毒VP3基因与鹅γ干扰素基因在重组禽痘病毒中的共表达被引量：3
- 2017年
- 为了构建共表达鹅细小病毒(GPV)VP3基因与鹅IFNγ基因的重组禽痘病毒,本研究将GPV-VP3基因和鹅IFNγ基因克隆到禽痘病毒转移载体中,构建串联基因的禽痘病毒转移载体pSY-GoIFNγ-VP3,采用脂质体法将其转染禽痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞(CEF),经蓝斑法筛选重组病毒,并进行8轮蚀斑纯化,以及PCR鉴定和间接免疫荧光(IFA)分析。结果表明,所获得的重组病毒rFPV-GoIFNγ-VP3能稳定表达外源基因。本研究为进一步开展GPV重组禽痘病毒疫苗的研制奠定了基础。
- 宋爽高旭于清洋鲁承梁晚枫于龙政王妍
- 关键词：鹅细小病毒重组禽痘病毒VP3基因Γ干扰素共表达
- 表达鹅细小病毒VP3基因重组禽痘病毒的构建及其产物反应原性分析
- 鹅细小病毒病(goose parvovirusis，GP)是由鹅细小病毒(goose parvovirus，GPV)感染而引起雏鹅或雏番鸭的一种高接触性急性传染病。GPV基因组编码的结构蛋白主要有VP1、VP2和VP3，...
- 于清洋
- 关键词：鹅细小病毒VP3基因重组禽痘病毒反应原性
- 延边白鹅IFN-α基因的原核表达及其表达产物生物学活性的研究被引量：2
- 2014年
- 以本实验室构建的鹅pMD18-T-IFN-α载体为基础,利用PCR技术扩增得到鹅α干扰素(IFN-α)DNA,经BamHⅠ+SalⅠ双酶切,将其亚克隆到原核表达载体pET-30a上。将构建的重组质粒pET-30aIFN-α转化至大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE、Western-blot分析鉴定;用Ni柱亲和层析纯化目的蛋白,以纯化的重组蛋白作为抗原,免疫家兔制备多克隆抗体并进行鉴定。结果显示,PCR扩增出的鹅α干扰素基因全长576bp;成功构建了原核表达载体pET-30a-IFN-α并得到表达;经SDS-PAGE和Western-blot检测,该蛋白的分子质量约为29ku,以纯化后的重组蛋白为抗原免疫家兔,成功制备了多克隆抗体,血清效价为1∶32。本试验为研究鹅IFN-α的作用机理,开发有效防治鹅疾病的新型制剂奠定了基础。
- 彭永刚陈海迪高旭张颖鲁承张丽媛于清洋宋铭忻
- 关键词：Α干扰素原核表达多克隆抗体
