余春芳
- 作品数：6 被引量：12H指数：3
- 供职机构：湖北医药学院更多>>
- 发文基金：湖北省教育厅科学技术研究项目贵州省农业科学院专项资金项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 亚胺培南对携带bla_(NDM-1)耐药基因的Escherichia coli耐药性及内膜secY、secE和secG转录水平的影响
- 2023年
- 目的探讨亚胺培南(IPM)对bla_(NDM-1)阳性Escherichia coli耐药性及其内膜secY、secE和secG转录水平的影响。方法以重组质粒pET28a(+)-bla_(NDM-1)转化菌株E.coli DH5α-bla_(NDM-1)和E.coli BL21(DE3)-bla_(NDM-1)为研究对象,在梯度浓度增加或撤消IPM暴露下传代培养菌株,检测17种抗生素对IPM暴露菌株的MIC值;SDS-PAGE凝胶电泳检测NDM-1表达;蛋白活性实验检测NDM-1活性;qRT-PCR检测bla_(NDM-1)及内膜secY、secE和secG转录水平。结果12μg/mL和0_(20)μg/mL IPM暴露的E.coli DH5α-bla_(NDM-1)菌株CFZ、CXM、FOX、CRO、CAZ、FEP等头孢类药物的MIC值(≥8μg/mL/≥8μg/mL、≥32μg/mL/≥32μg/mL、≥32μg/mL/≥32μg/mL、≥64μg/mL/=32μg/mL、≥32μg/mL/≥32μg/mL、≥32μg/mL/=8μg/mL)与0μg/mL IPM暴露MIC值(≤2μg/mL、=16μg/mL、≤8μg/mL、≤1μg/mL、≤4μg/mL、≤2μg/mL)相比均显著增高,而IPM和MEM的MIC值与0μg/mL IPM暴露(≤1μg/mL和≤1μg/mL)相比也显著增高(=8μg/mL/=8μg/mL和=4μg/mL/=4μg/mL)。12μg/mL和0_(20)μg/mL IPM暴露的E.coli BL21(DE3)-bla_(NDM-1)菌株FOX、CRO、FEP等头孢类药物的MIC值(≥32μg/mL/≥32μg/mL、≥64μg/mL/≥64μg/mL、=16μg/mL/=16μg/mL)与0μg/mL IPM暴露(≤8μg/mL、≤1μg/mL、≤2μg/mL)相比也均显著增高,而IPM和MEM的MIC值与0μg/mL IPM暴露(≤1μg/mL和≤1μg/mL)相比也均显著增高(≥16μg/mL/≥16μg/mL和≥16μg/mL/≥16μg/mL)。SDS-PAGE显示,随12μg/mL IPM暴露时间的延长,菌株NDM-1水解IPM活性增加。qRT-PCR显示,12μg/mL IPM暴露的E.coli DH5α-bla_(NDM-1)和E.coli BL21(DE3)-bla_(NDM-1)的bla_(NDM-1)、secY、secE和secG转录水平分别上调2.31/2.5、3.05/1.96、2.83/1.24和2.71/1.45倍。结论IPM可使bla_(NDM-1)阳性E.coli由碳青霉烯类敏感变为耐药且保持稳定,细菌内膜SecYEG跨膜通道蛋白参与菌株耐药性调控,这为认识抗生素压力下肠杆菌科细菌耐药性变化及指导临床合理用药提供理论支撑。
- 吴兆猛赵琼吴玲玲王祖华余春芳金志雄
- 关键词：亚胺培南NDM-1SECYEG
- 冠突散囊菌nsdD基因超表达菌株的构建及表型分析被引量：3
- 2017年
- 为了研究冠突散囊菌nsdD基因的功能,本研究将冠突散囊菌nsdD的cDNA置于强启动子三磷酸甘油醛脱氢酶启动子PgpdA下游及色氨酸合成酶C基因终止子TtrpC上游构建nsdD基因超表达载体PURT5750,采用根癌农杆菌介导方法将表达质粒PURT5750转化到冠突散囊菌进行功能验证。结果显示向基因组随机插入外源质粒DNA,随机挑选11个nsd D基因超表达转化子,对nsdD基因超表达转化子菌株培养观察并与野生型菌株相比发现,在5%和17%NaCl培养基中菌落差异不显著,而且仍能产生成熟的有性孢子。本实验为冠突散囊菌有性发育调控机制的研究提供了技术基础。
- 余春芳熊庆李文仿谭玉梅刘永翔刘作易欧琴
- 关键词：冠突散囊菌农杆菌介导
- 耐受碳青霉稀类Klebsiella oxytoca B1645-1携带Amp功能研究
- 2019年
- 目的研究Klebsiella oxytoca B1645-1细菌耐受碳青霉稀类抗生素的机制。方法采用常规方法提取、分离K. oxytoca B1645-1细菌小质粒(<15 kb)(PMDR),电转入Escherichia coli DH5α(BDH),MIC法检测其药物敏感性。PCR法扩增PMDR、BDH耐氨苄西林基因,分析K. oxytoca B1645-1细菌的多重耐药机制。结果 K. oxytoca B1645-1细菌含有15 kb大小的质粒,E. coli DH5α电转入质粒后全部或部分耐受氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、氨苄西林/舒巴坦、头孢吡肟及β-内酰胺酶抑制剂头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦,而对碳青霉烯类药物敏感。基因分析显示,K. oxytoca B1645-1菌株含有的15 kb质粒携带有blaAmp基因。结论 K. oxytoca B1645-1多耐药性是由多耐药质粒协同作用的结果,这为靶点控制耐药菌传播提供了理论依据。
- 吴玲玲王祖华刘纪杨迪冯梓龙余春芳金志雄
- 关键词：碳青霉烯类KLEBSIELLA质粒AMP
- 曲霉生长发育相关基因及分子调控机制的研究进展
- 2016年
- 随着分子生物学,基因组学和生物信息学等的快速发展,近年来模式菌株构巢曲霉和其他曲霉生长发育的相关基因及分子机制研究逐步深入。为曲霉(Aspergillus)生长发育分子生物学研究提供参考,对曲霉的应答环境条件光、营养和渗透压、参与交配过程、信号传导通路、转录因子及其他调节蛋白、内源性生理学过程、有性发育晚期产生子囊孢子过程等7个方面生长发育的相关基因及分子机制的研究进行了综述。
- 余春芳王玉臣谭玉梅刘永翔吴文琴
- 关键词：曲霉基因敲除基因超表达
- 谢瓦氏曲霉间型变种nsdD基因全长克隆及序列分析被引量：6
- 2013年
- 为研究谢瓦氏曲霉间型变种中nsdD基因的结构及其与有性产孢的关系,根据同源克隆及染色体步移技术克隆nsdD的全基因序列,并进行生物信息学分析。结果表明:该序列基因全长为1 773bp,开放阅读框长度为1 293bp,编码430个氨基酸,分子质量为46.659 4KD,理论等电点为9.08。序列同源性分析该基因与土曲霉(Aspergillus terreus)nsdD基因相似度最高为69%,含有1个GATA型锌指保守结构域,与其他曲霉的nsdD蛋白保守域相符。
- 余春芳李孝霞谭玉梅刘永翔刘作易
- 关键词：染色体步移
- 一株解鸟氨酸克雷伯菌的鉴定和碳青霉烯类耐药基因的检测被引量：3
- 2016年
- 目的对来自住院患者血液标本分离出的1株菌株进行鉴定及碳青霉烯类抗生素耐药的基因型分析。方法利用DL-96II细菌测定系统进行菌株B1635-1的初步鉴定及药敏试验;采用PCR法扩增菌株B1635-1的16SrDNA基因序列;应用MEGA 5.0软件构建菌株B1635-1的系统发育树,确定其种属地位;采用PCR法克隆菌株B1635-1的碳青霉烯类耐药基因。结果 DL-96II细菌测定系统初步鉴定菌株B1645-1为解鸟氨酸克雷伯菌,并显示该菌株对除氨曲南以外的几乎所有β-内酰胺类抗生素耐药,对磺胺类、喹诺酮类和氨基糖苷类抗生素也耐药,但对四环素类抗生素敏感。对菌株B1645-1的16SrDNA基因序列的系统发育树分析,最终鉴定该菌为解鸟氨酸克雷伯菌(Klebsiella ornithinolytica)。菌株B1645-1扩增出编码碳青霉烯酶blaNDM-1基因,未扩增出编码碳青霉烯酶blaKPC、blaVIM、blaTME和blaSHV基因。结论首次从湖北医药学院附属东风医院住院患者的血液标本中成功分离获得一株携带blaNDM-1基因解鸟氨酸克雷伯菌株,产NDM-1型碳青霉烯酶是该株解鸟氨酸克雷伯菌耐碳青霉烯类药物的主要原因,为临床鸟氨酸克雷伯菌的感染治疗提供参考依据。鉴于肠杆菌科细菌耐药速率传播更快,警示相关部门应重视并加强对blaNDM-1基因携带菌的监测与筛查。
- 吴文琴石平姜贺邵星丁喆庄小玲余春芳
- 关键词：碳青霉烯类耐药性
