储德勇
- 作品数：18 被引量：66H指数：5
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- 芍药苷对小鼠日本血吸虫病肝纤维化信号转导通路的影响
- 本文探讨了芍药苷对小鼠日本血吸虫病肝纤维化信号转导通路的影响。本研究用血吸虫尾蚴感染小鼠，制成血吸虫病肝肉芽肿和纤维化模型，考察了PAE在体内对肝肉芽肿和纤维化以及TGFβ<,1>的影响，然后在体外考察血吸虫可溶性虫卵抗...
- 储德勇
- 关键词：血吸虫病肝纤维化芍药苷中药药理
- 芍药苷对日本血吸虫感染小鼠肝组织免疫病理的影响被引量：28
- 2008年
- 目的观察芍药苷(paeoniflorin)对日本血吸虫病小鼠肝组织免疫病理的影响,探索芍药苷预防血吸虫病肝虫卵肉芽肿和肝纤维化的作用机制。方法日本血吸虫尾蚴感染昆明小鼠,制成肝虫卵肉芽肿和肝纤维化小鼠模型。然后随机分为4组:模型组(A组)(15只),吡喹酮治疗前(B组)、治疗同时(C组)及治疗后(D组)给予芍药苷组(各45只)。其中后3组又各分为低剂量组[芍药苷30mg/(kg·d)×30d]、高剂量组[芍药苷120mg/(kg·d)×30d]及对照组(0.5%羧甲基纤维素钠溶剂2ml×30d)。B组感染后第12天起、C及D组分别于感染后第42及72天起,灌胃芍药苷或0.5%羧甲基纤维素钠溶剂。B、C和D等3组均于感染后第42天起灌胃吡喹酮[500mg/(kg·d)×2d]。感染后第102天处死取血及肝脏。用竞争放射免疫法检测血清透明质酸(HA)含量,苏木素-伊红(HE)及Masson胶原纤维染色观察肝虫卵肉芽肿面积及纤维化程度,用免疫组化技术评价α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β1(TGF-β1)和Ⅰ型胶原(ColⅠ)表达情况。结果B组HA水平,低剂量组及高剂量组均显著低于对照组(F=9.429,P值均<0.01);肉芽肿面积及肝纤维化程度,低剂量组及高剂量组均显著低于对照组(F=862.540、F=29.738,P值均<0.01);α-SMA阳性细胞表达强度(F=12.323,P值均<0.01)、TGF-β1表达强度(F=148.990,P值均<0.01)、ColⅠ含量(F=180.881,P值均<0.01),低剂量组和高剂量组均显著低于对照组。C组及D组各项检测数据与其相应的对照组之间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论吡喹酮治疗前给予芍药苷,能明显降低肝虫卵肉芽肿和肝纤维化程度,减少肝组织TGF-β1、α-SMA的表达。
- 储德勇李丛磊杨枫吴强李静丁向东罗庆礼沈继龙
- 关键词：芍药苷日本血吸虫Α平滑肌肌动蛋白
- 芍药苷对小鼠巨噬细胞产生TGF-β1的影响被引量：14
- 2008年
- 目的探讨芍药苷(paeoniflorin,PAE)对血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)刺激小鼠腹腔巨噬细胞(PMs)产生转化生长因子β1(TGF-β1)的影响。方法研磨法制备SEA,分别加入含有小鼠PMs的培养板、培养瓶及培养皿中,培养24h,ELISA法测定TGF-β1含量,RT-PCR检测PMs内TGF-β1基因的表达,Western blotting检测PMs内TGF-β1蛋白的表达;在含PMs的培养瓶和培养皿中分别加入10mg/LSEA5ml,培养12h,再分别加入不同浓度的PAE(0、7.5、15、30、60及120mg/L),继续培养12h和24h。RT-PCR与蛋白质印迹(Westernblotting)分别检测PAE对SEA刺激的PMs内TGF-β1基因与蛋白的表达。结果10mg/L的SEA可明显刺激PMs产生TGF-β1(235.86±3.43ng/L),PAE呈浓度依赖性地抑制TGF-β1mRNA的表达(r=-0.827,P<0.01)和TGF-β1蛋白的表达(r=-0.952,P<0.01)。结论PAE能抑制SEA刺激的PMs产生TGF-β1。
- 储德勇李丛磊李静罗飞郑美娟吴强罗庆礼沈继龙
- 关键词：芍药苷日本血吸虫转化生长因子Β1巨噬细胞
- 弓形虫棒状体ROP16基因转染RAW264.7的实验研究
- 2015年
- 目的比较目前常用的5种基因导入技术将弓形虫棒状体ROP16基因导入RAW264.7,选择合适的方法提高转染效率。方法以绿色荧光蛋白p EGFP-ROP16融合表达构建质粒,采用Lipofectamine3000、Attractene、FugeneHD转染试剂以及电穿孔转染和慢病毒载体感染RAW264.7,利用荧光显微镜和流式细胞仪观察目的基因的表达、细胞生长状态并分析转染效率,从而确定最佳的基因导入途径。结果上述质粒载体对RAW264.7的转染效率依次为电转法>FugeneHD>Lipofectamine3000>Attractene。但是电转法转染后细胞死亡率较高,细胞贴壁不牢或死亡;而慢病毒感染效率可达61.2%,细胞生长状态佳,显著优于质粒载体(P<0.05)。慢病毒组显著优于4个质粒组(P<0.05)。结论慢病毒感染可将弓形虫棒状体ROP16成功转入RAW264.7,具有较高的转染效率,效果显著优于质粒载体,目的基因在细胞内获得高效表达。为弓形虫ROP16的功能研究提供了重要基础。
- 谢园园徐元宏闻慧琴王书书李源玲储德勇沈继龙
- 关键词：RAW264.7慢病毒感染
- 芍药苷通过IL-13/STAT6信号转导通路抑制成纤维细胞产生胶原被引量：6
- 2011年
- 目的观察芍药苷通过白细胞介素13(IL-13)信号转导通路调控3T3成纤维细胞的细胞激活、增殖和胶原产生。方法分别用不同浓度的芍药苷(200、400、600、800和1 000 mg/L)或重组白介素13(rIL-13,6.25、12.5、50、100和200μg/L),在体外刺激经无血清培养基培养12 h的3T3细胞,同时设空白对照组。培养24 h后,用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测rIL-13和芍药苷对细胞增殖的影响,并根据其结果选择1个适宜的rIL-13刺激浓度。用该浓度rIL-13(100μg/L)刺激无血清培养基培养12 h的3T3细胞12 h后,再分别加入不同浓度的芍药苷(200、400、600、800和1 000 mg/L),继续培养24 h,同时设空白对照组。用CCK-8法检测细胞增殖情况,碱裂解法测定培养上清羟脯氨酸含量。蛋白质印迹(Western blotting)分析α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、白介素13受体α1(IL-13Rα1)和信号转导和转录激活因子6(STAT6)的表达情况。RT-PCR检测细胞Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ)、IL-13Rα1和STAT6的mRNA水平。结果芍药苷能浓度依赖性地抑制3T3细胞增殖(r=-0.980,P<0.01),且各浓度组间差异有统计学意义(F=198.599,P<0.01)。rIL-13能明显促进3T3细胞增殖(r=0.538,P<0.05)。芍药苷(200、400、600、800和1 000mg/L)能浓度依赖性地抑制rIL-13刺激的3T3细胞增殖(1.780±0.177、1.636±0.073、0.965±0.066、0.623±0.037和0.337±0.022,r=-0.971,P<0.01),且各浓度组间差异有统计学意义(F=198.537,P<0.01)。芍药苷还能浓度依赖性地抑制rIL-13刺激的3T3细胞分泌羟脯氨酸(3.030±0.094、2.976±0.047、2.814±0.047、2.652±0.124和2.408±0.124,r=-0.916,P<0.01),且各浓度组间差异有统计学意义(F=13.642,P<0.01)。Western blotting分析结果显示,芍药苷能抑制rIL-13刺激的3T3细胞α-SMA、IL-13Rα1和STAT6蛋白的表达。RT-PCR结果显示,芍药苷能抑制rIL-13刺激的3T3细胞Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、IL-13Rα1和STAT6 mRNA的转录水平。结论芍药苷通过IL-13/STAT6信号转导通路抑制
- 杜明占沈继龙吴强胡向阳储德勇
- 关键词：芍药苷成纤维细胞IL-13
- 人体寄生虫学实验教学改革思考被引量：3
- 2012年
- 人体寄生虫学是医学院校中一门重要的桥梁课程,其中实验教学是该课程的重要环节.鉴于目前传统的人体寄生虫学实验教学中存在的诸多弊端,以及为了满足创新型人才培养、人体寄生虫病诊断和防治、不同专业和学制等的需要,有必要对人体寄生虫学实验教学进行改革.鉴于实验教学中不仅要进行验证性实验,而且还要通过综合性实验、设计性实验、现场教学等教学模式和内容,来打造能符合未来临床实际需要的创新型医学人才.由此,对我们在人体寄生虫学实验教学进行改革的思路和实践报告如下.
- 储德勇沈际佳沈继龙
- 关键词：人体寄生虫学寄生虫病寄生虫感染实验教学改革
- HBV感染对日本血吸虫病患者肝纤维化的影响及Th1/Th2型细胞因子水平的变化被引量：9
- 2007年
- 目的评估慢性日本血吸虫病患者血清中 Th1型[γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)]和 Th2型[白细胞介素(IL)-10、IL-13)]细胞因子水平,探讨晚期肝纤维化易感性与细胞因子水平的关系。方法358例晚期血吸虫病患者,采用 B 超对肝纤维化程度进行分级。随机选取HBsAg 阴性,早期肝纤维化患者39例,晚期肝纤维化患者29例。检测患者血清 IL-10、IL-13、IFN-γ、TNF-α的水平。结果358例患者 HBsAg 阳性率高达23.2%(83/358)。血吸虫病患者合并乙型肝炎感染较未感染者、晚期肝纤维化患者平均发病年龄并未提前,且构成比无明显差异(X^2=0.427,P=0.513)。晚期肝纤维化患者血清 IL-10水平[4.20(1.43～52.07)ng/L]高于早期肝纤维化患者[1.60(1.30～12.14)ng/L,z=-3.907,P<0.01];血清 IL-13水平[21.37(0.56～61.37)ng/L]显-著高于早期肝纤维化患者[12.94(3.37～26.99)ng/L,z=4.653,P<0.01];血清IFN-γ水平[3.12(1.38～66.14)ng/L]与早期肝纤维化患者[5.87(1.33～216.33)ng/L]比较差异无统计学意义(Z=-1.067,P>0.05);血清 TNF-α水平[2.48(0.79～19.86)ng/L]与早期肝纤维化患者血清TNF-α水平[2.28(0.67～15.72)ng/L]差异无统计学意义(Z=-0.112,P>0.05)。结论晚期血吸虫病患者中乙肝感染率高于全国平均水平。晚期肝纤维化的患者血清存在着高水平的 IL-13。
- 贾中伟储德勇王维罗庆礼沈继龙
- 关键词：细胞因子类血吸虫
- 日本血吸虫信号蛋白14-3-3在毕赤酵母菌中的分泌表达及其抗原性分析被引量：6
- 2007年
- 目的在毕赤酵母菌(Pichia pastoris)表达系统中表达日本血吸虫信号蛋白14-3-3(Sj14-3-3),并与原核表达rSj14-3-3比较其抗原性。方法以重组质粒pET28a-rSj14-3-3为模板,PCR扩增Sj14-3-3基因,将特异片段连接到pMD18-T载体,DNA序列分析后,亚克隆目的片段Sj14-3-3至酵母菌分泌表达载体pPICZαB。测序正确后,重组质粒经电转化转染至毕赤酵母菌X-33菌株,经抗生素Zeocin筛选得到高拷贝转化子。经甲醇诱导表达,取诱导上清进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western blotting)分析。用间接ELISA法比较毕赤酵母菌表达的rSj14-3-3和原核表达rSj14-3-3检测血吸虫病患者血清抗体的特异性和敏感性。结果目的基因已在酵母菌基因组中得到整合,PCR扩增得到约1 300 bp的片段。经甲醇诱导,Sj14-3-3表达并分泌到培养上清中。表达产物经SDS-PAGE测定为Mr 35 000。Western blotting结果显示,Mr 35 000蛋白可被Sj14-3-3单克隆抗体识别,表明该真核表达产物具有免疫反应性。间接ELISA检测结果表明,该重组蛋白检测36份急性血吸虫病患者血清rSj14-3-3抗体,阳性率为81%。与12份华支睪吸虫感染者血清未见交叉反应,32份健康人血清假阳性反应率为9.3%。以原核表达的rSj14-3-3为抗原,间接ELISA检测,36份急性血吸虫病患者血清的rSj14-3-3,抗体阳性率为88.9%;与12份华支睪吸虫感染者的交叉反应率为16.7%,32份健康人血清假阳性反应率为12.5%,其差异均无统计学意义(P>0.05)。结论在毕赤酵母菌中成功表达了Sj14-3-3,培养上清中产物丰度较高,且免疫反应性良好。
- 郑美娟李敏王志成罗飞罗庆礼储德勇李丛磊沈继龙
- 关键词：日本血吸虫信号蛋白14-3-3毕赤酵母菌真核表达
- 弓形虫GRA15Ⅱ诱导的CAMs逆转小鼠日本血吸虫病肝纤维化的研究
- 目的:探讨弓形虫多态性致密颗粒蛋白GRA15活化的巨噬细胞CAMs对小鼠日本血吸虫肝纤维化的逆转作用及其机制。方法:从Ⅱ型弓形虫PRU株及Chinese 1型Wh3株中分别提取总RNA扩增GRA15和ROP16编码基因,...
- 谢园园闫珂王书书刘芳储德勇沈继龙
- 关键词：弓形虫血吸虫病肝纤维化
- 文献传递
- IL-13及其受体在血吸虫病肝纤维化中的作用被引量：1
- 2010年
- 血吸虫病肝纤维化是以胶原蛋白为主的细胞外基质（extracellular matrix，ECM）的合成与降解失衡导致胶原过度沉积的结果，其纤维化过程主要是由多条信号转导途径和一系列的细胞因子网络共同调控的。近几年国内外研究发现白细胞介素-13（interleukin-13，IL-13）在血吸虫病肝纤维化形成和发展过程中起着重要作用。白细胞介素-13受体α1（interleukin-13receptor α1，IL-13Rα1）作为IL-13功能受体，在肝星状细胞（hapatic stellate cells，HSC）膜表面起促纤维化作用，而IL-13Rα作为IL-13诱饵受体（decoyreceptor），起抑制纤维化的作用。此外，IL-13还可通过替代激活途径激活巨噬细胞发挥促纤维化作用。总之，IL-13及其受体与血吸虫病肝纤维化关系的研究目前已成为热点之一。该文就IL-13及其受体在血吸虫病肝纤维化中作用的最新研究进展做一综述。
- 杜明占沈继龙吴强胡向阳储德勇
- 关键词：IL-13肝纤维化血吸虫病
