刘相冬
- 作品数：11 被引量：7H指数：2
- 供职机构：哈尔滨医科大学公共卫生学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 马传染性贫血病毒基因组部分转录图谱被引量：2
- 2001年
- 以马传贫驴白细胞弱毒和驴强毒分别接种培养细胞和试验动物 ,分别在体外和体内条件下 ,对病毒的各种转录产物进行克隆和序列分析。通过与病毒基因组的序列进行比较 ,用实验的方法绘制出了两株病毒在相应试验条件下的转录图谱 ,确定了各拼接产物的外显子构成以及拼接供体和拼接受体位点的具体位置。发现两种病毒在外显子 3的上游拼接受体位点 (SA2 )的位置与已报道的EIAV毒株均不相同 。
- 刘相冬张宝山孔宪刚王滨有孙成群刘永刚周家喜王凯波刘建华
- 关键词：马传染性贫血病毒病毒基因组
- 编码EIAV核输出因子蛋白Rev的cDNA克隆和序列测定被引量：1
- 2000年
- ＥＩＡＶ在繁殖过程中涉及到多种转录因子的调节，其中Ｒｅｖ蛋白是病毒编码的转录后调节因子，决定了病毒复制由早期到晚期的过渡。Ｒｅｖ是非结构蛋白，由病毒基因组全长转录产物经多次拼接而成。本研究使用ＥＩＡＶ疫苗毒感染驴巨噬细胞培养物，在病毒繁殖早期提取细胞总ＲＮＡ，反转录后使用中国ＥＩＡＶ毒株特异引物扩增病毒基因组拼接产物。将扩增产物克隆后经过核苷酸序列分析，和与基因组全序列的比较，确定了编码Ｒｅｖ蛋白的病毒基因组转录产物的编码序列和拼接位点。
- 张宝山孙成群刘相冬刘永刚周家喜王凯波刘建华孔宪刚
- 关键词：CDNA克隆
- 编码EIAV反式激活蛋白Tat的cDNA克隆和序列测定
- 2000年
- ＥＩＡＶ在繁殖过程中的转录涉及到多种因子的调节，其中ＴＡＴ蛋白是病毒编码的反式激活因子，是病毒复制必须成分。ＴＡＴ是非结构蛋白，由病毒基因组全长转录产物经多次拼接而成。本研究使用ＥＩＡＶ疫苗毒感染驴巨噬细胞培养物，在病毒增殖早期提取细胞总ＲＮＡ，反转录后使用中国ＥＩＡＶ毒株特异引物扩增病毒基因组拼接产物。将扩增产物克隆后经过核苷酸序列分析，和与基因组全序列的比较。确定了编码ＥＩＡＶ反式激活蛋白的转录产物及阅读框架及转录后拼接位点，研究发现至少有两种拼接产物编码ＴＡＴ。
- 张宝山孙成群刘相冬刘永刚周家喜王凯波刘建华孔宪刚
- 马传贫病毒基因组转录图谱的研究
- 2000年
- ＥＩＡＶ和ＨＩＶ－１、ＦＩＶ等病毒均属慢病毒属成员，这些病毒在基因组结构、复制的分子机制、抗原漂移及病毒与宿主的相互作用等方面都十分相似。在慢病毒基因转录过程中，首先形成一个与病毒基因组等长的ｍＲＮＡ，然后经过不同方式的拼接，得到长短不一的ｍＲＮＡ，进而出现核表达不同的蛋白。我们知道，慢病毒的基因表达受多种病毒蛋白及细胞核因子的复杂调控，这一过程的改变往往会影响病毒的致病力和繁殖能力。马传贫白细胞弱毒疫苗是目前唯一成功的慢病毒疫苗，因此比较 ＤＬＡ ＥＩＡＶ的拚接位点及拚接方式与其他毒株的异同，对于揭示 ＤＬＡ ＥＩＡＶ致弱的分子机制是十分必要的。本研究首先鉴定了 ＤＬＡ ＥＩＡＶ和 ＤＡ ＥＩＡＶ的几个拼接位点和几个转录产物，将这些拼接位点与已报道毒株相比较，发现 ＤＬＡ ＥＩＡＶ和 ＤＡＥＩＡＶ外显子３上游拼接位点为新发现的位点信号。同时，Ｒｅｖ的靶序列ＲＲＥ的核苷酸序列差异较大。在本研究试验条件下，未克隆到ＤＬＡＥＩＡＶ的１、２、４外显子拼接产物及ＤＡＥＩＡＶ感染动物细胞的１、４外显子拼接产物，这可能由于样品采集时间及病毒体内外繁殖环境差异造成的假阴性结果，但也有一种可能的情况。
- 刘相冬张宝山孙成群刘永刚周家喜王凯波刘建华孔宪刚
- 关键词：马传贫毒株基因组染色体组
- HIV-1转录后调控机制的实验探讨
- 该实验绘制出DAEIAV和DLAEIAV转录图谱.为进一步比较两毒株由于外显子-3拼接受体位点(SA2)核苷酸序列差异及源于全基因序列差异对mRNA拼接效率的影响,我们利用RT-PCR法,构建三个真核细胞重组表达质粒,并...
- 刘相冬
- 文献传递
- 单周期复制的慢病毒疫苗的研究
- 马传染性贫血病病毒(EIAV)同人免疫缺陷病毒(HIV)都属于反转录病毒科慢病毒属成员。这类病毒在基因组结构、复制的分子机制、抗原漂移及病毒与宿主的相互作用等方面都十分相似。
本研究构建产生了一复制缺陷的重组EIA...
- 刘相冬
- 关键词：免疫缺陷病毒分子克隆免疫预防病毒疫苗
- 文献传递
- 马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒疫苗gag基因的序列测定及分析被引量：4
- 2000年
- 以马传染性贫血病毒 (EIAV)驴白细胞弱毒疫苗株 (DLA)病毒基因组RNA为材料 ,用RT PCR方法扩增出EIAVgag基因 ,经平端连接将其克隆到质粒载体 pUC19中。由于疫苗不是克隆株 ,因此通过 5次单独克隆与测序 ,推导出EIAV DLA gag基因的优势序列。gag基因全长 145 8个碱基 ,编码一 486个氨基酸残基的前体蛋白。与美国EIAVWyoming 136 9株比较 ,核苷酸同源性为 80 % ,氨基酸同源性为 84 47%。其中 ,衣壳蛋白P2 6的主要同源区 (MHR)、核衣壳蛋白P11的两个CCHC型锌指结构及酸性蛋白P9的YXXL基元为高度保守的结构。为进一步研究马传染性贫血病毒弱毒疫苗的致弱机理提供了理论依据。
- 杨威张宝山刘永刚刘胜旺孔宪刚曹殿军刘相冬卢景良刘宝全刘建华
- 关键词：马传染性贫血病毒核苷酸序列
- RBM1基因与无精少精男性不育的关联被引量：1
- 2002年
- 目的 应用分子流行病学手段探索男性不育的病因 ,为开展无精少精不育患者单精子注射技术的种植前遗传学诊断与筛选提供实验依据。方法 用质粒克隆技术对 RBM 1基因进行克隆、测序及 PCR技术检测 RBM 1基因的微小缺失。结果 在 75例男性不育患者中检测出 5例患者存在 RBM 1基因的微小缺失 ,缺失率为 6 .7% ,其中 10例无精症病例有 1例缺失 ,6 5例少精症患者中有 4例缺失。结论 我国正常男子人群中存在 RBM 1基因 。
- 段稳铭张清媛程凤锐刘相冬王滨有
- 关键词：少精液症DNA序列分析不育症
- 逆转录病毒mRNA核输出通道的研究进展
- 2000年
- HIV- 1Rev是一个 RNA核输因子。它通过 Rev ARM与 RNA相结合 ,并且通过 Rev NES与连有Ran GTP的 Crml分子结合 ,然后通过 Crml与特异核孔蛋白的依次作用 ,进而导致未拼接或未完全拼接的病毒RNA转运到核外。在许多病毒和细胞的蛋白中都已鉴定出含有 NES,这些 NES具有共同的序列特征 :L—— X( 2 -3)—— L( I、M、V、F)—— X( 2 - 3)—— L—— X—— L( I) ,但也不能仅凭借序列的同源性就确定 NES功能。要鉴定一段序列在蛋白中是否具有 NES功能 ,主要还要看它是否能介导它所在蛋白的核输出。简单的逆转录病毒不能编码有 Rev同等作用的核 RNA输出因子 ,但它能把细胞的核输出信号 ( CTE)融入到自己的基因组 RNA中 ,从而指导未拼接或未完全拼接的病毒 RNA转运到核外。CTE是目前最易理解的一个病毒 RNA要素 ,它不但可以参与对病毒 m RNA而且还能够直接参与对细胞 m
- 刘相冬王滨有孔宪刚孙成群
- 关键词：逆转录病毒MRNA
- 单周期复制的马传染性贫血病毒重组疫苗的构建
- 2006年
- 目的构建单周期复制的马传染性贫血病毒(EIAV)重组疫苗。方法将感染性EIAV分子克隆WU57囊膜(env)基因敲除,在pGPT中克隆4个拷贝的Mason Pfizer猴病毒组成性RNA转运因子(CTE),构建重组质粒pGPTC;构建另一表达Env蛋白的重组质粒pTEB,并分别与重组质粒pGPT、pGPTC共转染进入293细胞;以Western blot对转染细胞外培养液进行检测以鉴定病毒粒子的产生;通过免疫荧光分析鉴定感染细胞内病毒蛋白的表达。结果pGPTC/pTEB共转染的细胞外培养液中检测到特异性EIAV病毒蛋白,而pGPT/pTEB共转染的细胞外培养液中没有检测到特异性EIAV病毒蛋白。转染细胞产生的病毒粒子EIAVGPTC感染的原代马肾细胞(EK)内检测到病毒蛋白的表达,而用感染细胞产生的病毒粒子再感染EK细胞,则无病毒蛋白表达。结论Rev/RRE对于病毒结构蛋白的表达是必需的;CTE可以替代Rev蛋白功能辅助EIAV结构蛋白的表达;转染的293细胞产生了EIAV病毒粒子并分泌到胞外培养液中;产生的病毒粒子EIAVGPTC是一复制缺陷的活重组病毒。
- 刘相冬王滨有
- 关键词：马传染性贫血病毒感染性分子克隆囊膜基因
