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人类组织中TRAF3IP3基因表达的检测及转染胚肾HEK293细胞后的亚细胞定位被引量：1: 2013年; 目的克隆TRAF3IP3基因,明确TRAF3IP3在部分人类组织中的表达谱并鉴定其表达产物的亚细胞定位。方法采用实时定量PCR检测TRAF3IP3基因在人体各组织中的表达情况;克隆TRAF3IP3基因开放读码框区(ORF)并构建真核亚细胞定位质粒。转染人胚肾HEK 293细胞,激光共聚焦显微镜观察融合蛋白的亚细胞定位。结果实时定量PCR证实TRAF3IP3基因在被检测的11种组织中均有表达,其中在淋巴结、脾、骨髓、胃和睾丸中的表达水平较高;成功克隆了TRAF3IP3基因ORF区并构建成为荧光定位质粒,激光共聚焦显微镜观察证实TRAF3IP3蛋白主要定位于核膜,在核周呈颗粒状分布。结论 TRAF3IP3基因在淋巴细胞富集的器官呈高表达,可能参与免疫系统的发育、成熟及调控,其表达产物在细胞内主要定位于核膜及核周胞浆。; 王洋王沂余源刘青毛焕熊艳杰张秀军; 关键词：组织表达谱亚细胞定位

人TRAF3IP3基因的克隆及真核表达被引量：1: 2013年; 目的构建人肿瘤坏死因子受体相关因子3相互作用蛋白3(TRAF3IP3)基因真核表达载体,并进行表达检测及鉴定。方法 RT-PCR扩增获得TRAF3IP3开放读码框区基因,双酶切连入真核表达载体pIRES2-EGFP,双酶切和测序鉴定阳性克隆;重组质粒磷酸钙法转染HEK293细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,实时定量PCR和Western blot法鉴定TRAF3IP3基因的表达情况。结果经限制性内切酶酶切鉴定和测序证实,成功构建了TRAF3IP3真核表达质粒,荧光显微镜观察可见转染了重组质粒的HEK293细胞有绿色荧光蛋白的表达,实时定量PCR和Western blot结果证实TRAF3IP3蛋白高水平表达。结论成功构建了pIRES-EGFP-TRAF3IP3真核表达质粒,为TRAF3IP3基因功能的研究奠定了基础。; 王沂张秀军刘青余源慈雅丽王洋; 关键词：真核表达转染 HEK293细胞

人类ZNF434基因的克隆、真核表达和组织表达谱分析: 2013年; 目的:克隆人类ZNF434基因并构建其真核表达质粒,鉴定ZNF434基因的组织表达谱。方法:实时定量PCR检测ZNF434基因在人体10种组织中的表达情况;克隆ZNF434基因的全长开放读码框区并连入真核表达载体pIRES2-EGFP,磷酸钙沉淀法转染HEK293T细胞,荧光显微镜和Western blot鉴定ZNF434蛋白的表达情况。结果:ZNF434基因在检测的人体组织中均有表达,其中骨髓和睾丸表达最高,成功克隆了ZNF434基因并构建了该基因的真核表达质粒ZNF434-pIRES2-EGFP,转染HEK293T细胞可观察到绿色荧光蛋白表达,Western blot可检测出分子量56kDa的Flag-ZNF434融合蛋白表达。结论:明确了人类ZNF434基因的组织表达谱,构建了该基因的真核表达载体,为该基因的进一步研究奠定了基础。; 王洋王沂刘青熊艳杰毛焕刘艳敏张秀军; 关键词：实时定量PCR 组织表达谱真核表达

睾丸组织高表达基因PRKACG对细胞增殖的影响被引量：1: 2012年; 目的研究睾丸组织高表达cAMP依赖蛋白激酶催化亚基γ(protein kinase,cAMP-dependent,catalytic,gamma,PRKACG)基因的功能,观察其对NF-κB信号通路的激活作用和促细胞增殖作用。方法采用双荧光素酶报告基因系统,利用体外培养的293T细胞,分析PRKACG对NF-κB信号通路的激活作用,并观察293T细胞的形态学,通过细胞计数和CCK8观察其对细胞生长和细胞增殖的影响。结果转染PRKACG的293T细胞相对于对照组转染PCMV-Sport 6的细胞体积变大、饱满、触角伸长;CCK8和细胞计数的结果显示,过表达PRKACG的293T的生长速度明显高于对照组Sport 6。结论 PRKACG能够激活293T细胞的NF-κB信号通路,并可促进细胞增殖,提示PRKACG可能是睾丸发育和精子发生过程中的一个功能基因。; 宋亚娟孟雅楠刘青贾孟春张秀军; 关键词：睾丸发育精子发生细胞增殖

蓝氏贾第鞭毛虫α-4贾第素特异性多克隆抗体的制备及免疫电镜定位研究被引量：2: 2012年; 目的制备针对蓝氏贾第鞭毛虫α-4贾第素的特异性抗体,免疫胶体金电镜观察该贾第素的亚细胞定位。方法生物信息学分析并合成α-4贾第素抗原肽,与钥孔血蓝蛋白(KLH)偶联后免疫新西兰白兔,Protein A亲和层析纯化抗血清,采用α-4贾第素重组蛋白和贾第虫滋养体全虫体裂解物通过Western blot验证抗血清结合力和结合特异性,选择高特异性抗体通过免疫胶体金电镜观察α-4贾第素的亚细胞定位。结果筛选出3段可能的抗原肽,合成的抗原肽与KLH偶联后免疫兔得到高效价抗血清,Protein A纯化效果良好;3种纯化抗血清均能与α-4贾第素结合,其中anti-P2具有较高的抗原结合特异性。采用anti-P2进行免疫胶体金电镜,显示α-4贾第素主要定位于鞭毛,胞浆也有少量散在表达。结论制备的α-4贾第素多克隆抗体具有抗原结合特异性。用anti-P2进行免疫胶体金电镜,α-4贾第素主要定位于贾第虫鞭毛。; 王洋王沂杨文思李冀余源沈海娥刘青田喜凤; 关键词：蓝氏贾第鞭毛虫亚细胞定位

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刘青