吴雪伶
- 作品数：33 被引量：54H指数：5
- 供职机构：中国食品药品检定研究院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 重组鼠源性细胞鼠细小病毒(MMV)检测方法的建立及应用
- 目的：建立重组细胞中鼠细小病毒检测的NB324K感染试验及实时荧光定量PCR检测方法,并分别进行了方法学分析.方法：将不同稀释度的MMV悬液分别感染NB324K细胞,通过观察细胞病变和结晶紫染色结果检测NB324K感染法...
- 吴雪伶樊金萍林林冯建平孟淑芳李德富
- 关键词：荧光定量PCR重组细胞
- 以假病毒为基础的人乳头瘤病毒（HPV）中和抗体检测方法和动物感染模型的建立及初步应用
- 人乳头瘤病毒(Human papillomavirus，HPV)的持续感染是引起宫颈癌和生殖器疣的最主要原因，开发、研制HPV预防性疫苗是预防HPV感染的最根本手段。判断预防性疫苗成功与否的关键是其能否诱导有效的体液免疫...
- 吴雪伶
- 关键词：人乳头瘤病毒中和抗体假病毒
- 文献传递
- Q61R和V112A突变的HRAS基因在NIH小鼠体内诱发肿瘤的实验研究被引量：1
- 2019年
- 目的:分析含有HRAS(V112A)基因及其G12C、G13C、Q61R和G12C/G13C/Q61R突变体的质粒DNA在NIH小鼠体内的致癌性。方法:从人结肠癌DiFi细胞中扩增含有V112A突变的HRAS(V112A)基因,采用PCR点突变法在HRAS(V112A)中分别引入G12C[HRAS(V112A/G12C)]、G13C[HRAS(V112A/G13C)]、Q61R[HRAS(V112A/Q61R)]或3位点联合突变[HRAS(V112A/G12C/G13C/Q61R)],将HRAS(V112A)及上述突变基因克隆入真核表达载体pCDNA3.1(+),Western blot确证HRAS(V112A)及各突变体可体外表达后,每种质粒按每只100μg剂量皮内注射6～8周龄雌性NIH小鼠,阴性对照组注射PBS,每组8只小鼠,持续观察小鼠致瘤情况。注射后4个月,取小鼠瘤样组织分别采用PCR和Western blot方法检测病变组织中的HRAS基因及其表达产物。结果:从DiFi细胞中成功扩增出含有V112A突变的HRAS(V112A)基因,并构建4个突变体,体外转染结果表明各HRAS均可在L929细胞中表达。重组质粒注射小鼠后,HRAS(V112A)组有4只小鼠注射后4个月于注射部位出现增生样改变,该病变在1个月后自愈;HRAS(V112A/Q61R)组有1只小鼠于注射后4个月出现明显的瘤样增生。至观察期末,HRAS(V112A/G12C)、HRAS(V112A/G13C)和HRAS(V112A/G12C/G13C/Q61R)组小鼠均未出现可见增生样结节。病变组织的PCR和Western blot检测结果表明HRAS(V112A)组小鼠增生样组织和HRAS(V112A/Q61R)组小鼠肿瘤组织中均有对应的HRAS基因存在和表达。结论:HRAS(V112A)可在NIH小鼠体内导致注射部位皮肤的增生样改变,含有Q61R突变的HRAS(V112A)可在NIH小鼠体内诱导肿瘤形成,含有G12C、G13C及G12C/G13C/Q61R突变的HRAS(V112A)在小鼠体内不会引起明显病变。
- 张峰赵龙樊金萍吴雪伶孟淑芳
- 关键词：HRAS点突变致瘤性
- 生物制品中猪细环病毒污染检测方法的建立和初步应用被引量：3
- 2015年
- 目的：建立生物制品中猪细环病毒（ Torque teno sus virus，TTSuV）污染的检测方法，并进行方法学分析及初步的应用。方法针对TTSuV保守序列设计引物和探针，建立荧光PCR方法，对方法的特异性、线性、精密度、最低检测限等参数进行验证，并对试验样本对检测的干扰性进行分析。利用该方法对猪全血样品、生产用细胞及轮状病毒疫苗样品进行检测，通过建立TTSuV分型检测的PCR方法对阳性样品进行分型。结果荧光PCR法的特异性较好，与不同种属的细小病毒、猴SV40病毒及猪圆环病毒无明显的交叉反应，TTSuV1和TTSuV2荧光PCR分别在109～103拷贝／μl和109～102拷贝／μl范围内线性较好，R2值达到0．993以上，TTSuV1和TTSuV2的最低检测限分别为1×103拷贝／μl和1×102拷贝／μl，试验内和试验间的Ct的精密度CV值均小于7％，试验内病毒拷贝数的CV值小于25％，试验间CV值小于45％。细胞样品成分对病毒检测无明显的干扰性。对20份猪全血样品进行检测，8份为阳性，其中1份为TTSuV1阳性，4份为TTSuV2阳性，3份为TTSuV1／2混合感染。 TTSuV1和TTSuV2型与标准株序列同源性分别为98％～99％和98％。对细胞样品和轮状病毒疫苗进行检测，结果均为阴性。结论成功建立了TTSuV荧光PCR检测法，能够用于生物制品TTSuV污染的检测，进一步提高了生物制品的安全性。
- 吴雪伶赵龙冯建平樊金萍赵翔孟淑芳
- 关键词：荧光PCR细胞
- STR图谱分析法鉴别人源细胞交叉污染被引量：5
- 2010年
- 目的采用STR图谱分析法鉴别人源细胞交叉污染。方法采用PCR-毛细管电泳分析方法,分别检测人源、猴源及鼠源细胞以及人源细胞交叉污染模型的16个STR位点,分析STR图谱法用于细胞交叉污染检测的可行性。并对来自不同生物制品生产单位的27株生产用细胞及5株组织工程医疗产品用细胞进行STR图谱分析。结果STR图谱分析方法具有人源细胞特异性,猴源细胞及鼠源细胞不产生特征性图谱。此方法可以对形态相似或不相似的人源细胞交叉污染模型进行明确鉴别。采用此方法检测的27株生物制品生产用人源细胞未发现有交叉污染现象,而5株组织工程医疗产品用细胞中,发现有2株为非单个个体的混合细胞。结论STR图谱分析法具有高特异性,可用于人源细胞间交叉污染或细胞个体来源的鉴别。
- 吴瑜冯建平林林吴雪伶孟淑芳王佑春李德富
- 关键词：组织工程产品交叉污染
- 双链DNA诱导细胞STING蛋白降解及调节机制研究
- 干扰素基因刺激蛋白（Stimulator of interferon gene，STING）是双链DNA(double-stranded DNA，dsDNA)诱导机体产生天然免疫反应的重要信号转导蛋白，在dsDNA的刺激...
- 吴雪伶
- 关键词：降解机理
- STR图谱分析方法用于细胞库中人源细胞的鉴别研究
- 目的：采用STR图谱分析的方法，建立本单位细胞库中所有人源细胞的鉴别图谱，并进行细胞交叉污染及细胞误判现状分析的研究。
方法：采用16个位点的STR图谱分析方法，检测本单位细胞库中所有收集保存的及其他单位来源的...
- 吴雪伶冯建平吴瑜樊金萍孟淑芳李德富
- 关键词：细胞鉴别基因序列细胞库
- 文献传递
- 组织工程用人源组织操作规范指南
- 本标准规定了人源细胞、组织和以细胞、组织为基础的产品（HCT/Ps）在生产各个环节的要求，包括建立质量体系、设施、细胞及组织采集、加工、产品保存及运输、召回以及供体资质评估等。
本标准适用于组织工程用人源细胞、组织或以...
- 孟淑芳徐丽明吴瑜林林吴雪伶邵安良樊金萍
- 重组鼠源性细胞鼠细小病毒(MMV)检测方法的建立及应用
- 目的：建立重组细胞中鼠细小病毒检测的NB324K感染试验及实时荧光定量PCR检测方法，并分别进行了方法学分析。方法：将不同稀释度的MMV悬液分别感染NB324K细胞，通过观察细胞病变和结晶紫染色结果检测NB324K感染法...
- 吴雪伶樊金萍林林冯建平孟淑芳李德富
- 关键词：细小病毒荧光定量PCR重组细胞
- 文献传递
- 人乳头瘤病毒（HPV）L2肽免疫小鼠诱导的抗体水平与保护作用的关系研究被引量：2
- 2010年
- 目的 检测HPV-58 L2 11～200 AA肽在动物体内对HPV的保护效果,并分析疫苗诱导的抗体滴度或中和抗体滴度与疫苗保护作用之间的对应关系.方法 利用大肠杆菌表达HPV-58L2 11～200 AA肽,纯化目的 蛋白并与铝佐剂吸附后免疫小鼠,利用小鼠HPV-58假病毒感染模型检测不同剂量的免疫原对小鼠的保护作用.通过ELISA和假病毒中和抗体检测方法 检测免疫血清中的总抗体水平和中和抗体水平,分析具有保护作用的抗体或中和抗体滴度.结果 当蛋白免疫剂量为8μg时,能够完全保护小鼠不受HPV假病毒的感染.小鼠免疫血清中的中和抗体水平较低,利用已建立的假病毒中和试验方法 检测不到血清中的中和抗体.而利用ELISA检测血清中的总抗体水平结果 显示,免疫血清中的总抗体水平与疫苗的保护效果之间存在对应关系,当抗体滴度大于等于1：25 000时,小鼠体内检测不到荧光信号,能够保护机体不受假病毒的感染.结论 HPV-58 L2 11～200 AA肽能够保护小鼠不受假病毒的感染,L2 11～200 AA肽具有较好的疫苗发展前景,其引发的总抗体水平可以作为评价保护效果的间接指标.
- 吴雪伶崔俊生孟淑芳李保卫张春涛樊金萍邵荣光王佑春
- 关键词：人乳头瘤病毒假病毒中和抗体
