冯建平
- 作品数：17 被引量：57H指数：5
- 供职机构：中国药品生物制品检定所更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划“九五”国家科技攻关计划国家科技基础条件平台建设计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- STR图谱分析法鉴别人源细胞交叉污染被引量：5
- 2010年
- 目的采用STR图谱分析法鉴别人源细胞交叉污染。方法采用PCR-毛细管电泳分析方法,分别检测人源、猴源及鼠源细胞以及人源细胞交叉污染模型的16个STR位点,分析STR图谱法用于细胞交叉污染检测的可行性。并对来自不同生物制品生产单位的27株生产用细胞及5株组织工程医疗产品用细胞进行STR图谱分析。结果STR图谱分析方法具有人源细胞特异性,猴源细胞及鼠源细胞不产生特征性图谱。此方法可以对形态相似或不相似的人源细胞交叉污染模型进行明确鉴别。采用此方法检测的27株生物制品生产用人源细胞未发现有交叉污染现象,而5株组织工程医疗产品用细胞中,发现有2株为非单个个体的混合细胞。结论STR图谱分析法具有高特异性,可用于人源细胞间交叉污染或细胞个体来源的鉴别。
- 吴瑜冯建平林林吴雪伶孟淑芳王佑春李德富
- 关键词：组织工程产品交叉污染
- 肝细胞肝癌和肝硬化组织中丙型肝炎病毒各区段抗原的检测
- 1998年
- 目的研究丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）在肝细胞肝癌（ＨＣＣ）和肝硬化（ＬＣ）中所起的作用，结合乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）进行分析，并初步探讨ＨＣＶ与ＨＢＶ感染是否有相互促进作用。方法采用ＨＣＶ－Ｃ、Ｅ、ＮＳ３、ＮＳ４区单克隆抗体、ＨＢｓＡｇ多克隆抗体用免疫组化方法检测了５９例ＨＣＣ及３５例ＬＣ组织标本。结果ＨＣＶ阳性反应主要分布在肝细胞及癌细胞的胞浆内，呈细颗粒状。ＨＣＣ中，ＨＣＶ感染率：北京（２９例）为１７２％、沈阳（３０例）为２６７％；沈阳３５例ＬＣ肝组织病人中ＨＣＶ感染率１４３％。各区段单抗单独检测以Ｃ区单抗检测阳性率最高。乙肝表面抗原的检测阳性率：北京ＨＣＣ（２９例）为６３０％，沈阳ＨＣＣ（３０例）为７３３％，沈阳ＬＣ（３５例）为５４３％，均明显高于各自的ＨＣＶ抗原检测阳性率。结论ＨＣＶ在ＨＣＣ、ＬＣ中起一定作用，且Ｃ区抗原可能在ＨＣＣ中表达率较高；ＨＢＶ、ＨＣＶ感染在ＨＣＣ、ＬＣ中无明显相互促进作用。
- 王理富李德富郎淑慧尹红章尹红章李冠群冯建平赖文敏
- 关键词：肝细胞肝癌免疫组化HBSAG
- STR图谱分析方法用于细胞库中人源细胞的鉴别研究
- 目的：采用STR图谱分析的方法，建立本单位细胞库中所有人源细胞的鉴别图谱，并进行细胞交叉污染及细胞误判现状分析的研究。
方法：采用16个位点的STR图谱分析方法，检测本单位细胞库中所有收集保存的及其他单位来源的...
- 吴雪伶冯建平吴瑜樊金萍孟淑芳李德富
- 关键词：细胞鉴别基因序列细胞库
- 文献传递
- 我国生物制品生产用细胞外源因子污染情况检测被引量：13
- 2006年
- 目的 对我国目前生物制品生产用细胞外源因子污染情况进行检测。方法 按照《中国生物制品规程》2000版规定的细胞外源因子检测方法，对我国生物制品生产用细胞进行细菌、真菌、支原体及一般外源病毒污染检测。结果 自2003—2006年3月间共检测了用于生物制品生产用细胞库细胞79株。结果显示，被检测的79株细胞中，支原体污染细胞10株，污染阳性率为12．7％；外源病毒污染细胞5株，污染率为6．3％；这5株外源病毒污染的细胞中，2株293细胞体外接种至人二倍体细胞后，致细胞形态明显异常；2株Vero细胞接种鸡胚后，致鸡胚全部死亡；1株Vero细胞接种乳鼠及成鼠后第7天，致接种动物全部死亡，组织病理学检查结果显示，接种待检细胞组小鼠脑组织有不同程度的病变。结论 目前我国生物制品生产用细胞存在一定程度的外源因子污染。
- 孟淑芳李修兰冯建平林林郎淑惠王佑春李德富
- 关键词：污染
- STR图谱分析方法扩大用于人源细胞的鉴别研究被引量：5
- 2010年
- 目的采用短串联重复序列（STR）图谱分析的方法，建立本所细胞库中所有人源细胞的鉴别图谱，并进行细胞交叉污染及细胞误判现状分析的研究。方法采用16个位点的STR图谱分析方法，检测本所细胞库中所有收集保存的及其他单位来源的共计61株人源细胞，并将STR图谱检测结果与目前国际细胞库公布的数据进行比对，分析细胞的正确性及交叉污染情况。对未检出信号的细胞株，采用同工酶法对细胞的种属进行鉴别。结果被检测的61株细胞中，41株细胞呈现特征性STR图谱，不存在与其他细胞的交叉污染现象，其中36株细胞与ATCC或JCRB保存的同一名称细胞在相应的9个STR位点的数据完全一致，5株细胞均仅在vWA位点与ATCC数据不完全相同，可判定为正确细胞；7株细胞尚无国际可比对数据，但STR图谱特异，可认定为新建细胞。11株细胞（占18．0％）被鉴定为错误的细胞，其中舌癌细胞Tca8113及肝癌细胞HHCC（现更名为FHCC98）的STR图谱数据分别与HeLa及HeLa S3细胞的数据完全一致；2株HuT-102的数据与ATCC的数据完全不同；4株细胞未检测到信号，同工酶结果显示均为鼠源细胞；同时还发现2株细胞为交叉污染细胞。结论细胞误判及细胞交叉污染现象较为严重，正确鉴别细胞，特别是对国内自建细胞重新鉴定，对保证科学研究的可信性及可重复性极为重要。
- 吴雪伶冯建平吴瑜樊金萍孟淑芳李德富
- 关键词：细胞鉴别交叉污染
- PERT-ELISA法用于细胞逆转录病毒检测的再研究
- 2009年
- 目的进一步分析PERT-ELISA法在细胞逆转录病毒检测应用中的意义。方法分析不同细胞培养液及其添加成分对PERT-ELISA法检测结果的影响及检测方法的精密性和检测用试剂的稳定性,将该方法用于不同来源细胞的逆转录酶活性的检测,并通过共培养法对我国金黄地鼠肾细胞中逆转录酶活性是否具有感染性进行初步分析。结果不同细胞培养液及其添加成分逆转录酶活性检测均为阴性,不会影响样本的检测结果。PERT-ELISA法具有良好的试验间精密性及重现性,检测用试剂在保存条件下,至少在1年内可保持稳定。近250株细胞的检测结果显示,含有逆转录病毒颗粒的细胞,无论是否具有感染性,均为逆转录酶活性阳性;除部分人淋巴瘤来源的细胞外,大部分人源细胞为逆转录酶活性阴性;8种91株猴肾来源的细胞包括74株Vero细胞均为逆转录酶活性阴性;而鼠源细胞则大部分为阳性,其中20株CHO来源的细胞均为阳性;3株猪源细胞及1株猫源细胞为阳性,而2株水貂细胞、2株牛源细胞及1株犬源细胞均为阴性。被检测的15株组织工程产品用人源细胞逆转录酶活性均为阴性,而我国不同地区来源的金黄地鼠肾细胞上清中,逆转录酶活性均为阳性。金黄地鼠肾细胞与人2BS细胞共培养后连续传代7次,细胞上清中逆转录酶活性仍为阳性,但随着传代次数的增加呈下降趋势。结论PERT-ELISA法可用于细胞逆转录病毒的检测,但对于阳性细胞,还需要进一步分析其与逆转录病毒或逆转录病毒样颗粒的相关性及是否具有感染性。
- 孟淑芳李秀华林林冯建平李修兰王佑春李德富
- 关键词：细胞逆转录酶活性感染性
- 一例病因不明上肢末梢进行性坏死的病原学诊断
- 1996年
- 于1994年11月15日北京军区总医院收治1例病因不明上肢末梢进行坏死的山东少女,这一病例曾引起社会广泛关注,首都数十名医学专家会诊,并用信息高速公路向国际发布了病情,以求病因诊断和治疗方法。临床专家们曾考虑到:炭疽、深部霉菌感染、血管结缔组织病、免疫缺陷病、食肉菌等10多种诊断意见,因无根据而不能确诊。
- 武仰晶刘维伦尹秋生刘杰张朝元王海英徐建国赖心河傅晓丽杨红梅余秀军吴纪民黄力保吴艳萍刘秉阳魏涛王立兰吕惠贤郎淑惠冯建平范学祥朱荫耕马纪平许淑珍张淑兰靳景画陈湘陈力陈民钧张小江
- 关键词：病原学诊断厌氧菌感染铜绿假单胞菌链球菌病因不明金黄色葡萄球菌
- 鼠细小病毒感染性滴度测定方法的建立及病毒制备被引量：3
- 2009年
- 目的建立鼠细小病毒(MMV)感染性滴度测定方法,并制备高滴度的MMV,为生物制品病毒清除/灭活工艺的验证奠定基础。方法通过分析NB324K细胞接种量、培养时间及病毒吸附时间等参数,建立MMV病毒滴度测定的半数细胞感染剂量法(CCID5)0,并分析其精密性;以A9细胞制备MMV,分析感染复数(MOI)、收获时间及收获样本对病毒滴度的影响,并检测病毒的稳定性。结果NB324K细胞的最佳接种浓度、培养时间及病毒吸附时间分别为5×103个/孔、48h及2h,所建立的检测方法精密性较好;A9细胞沉淀中病毒滴度高于上清,且随病毒MOI值的升高而逐渐增加,在MOI为10时,感染后48h收获,病毒滴度最高。制备的病毒液的平均滴度为8.69CCID50/ml,4℃和37℃保存7d及反复冻融5次,稳定性良好。结论已建立了MMV感染性滴度测定方法,并制备了高滴度的病毒,为以MMV为指示病毒进行病毒清除/灭活工艺验证奠定了基础。
- 孟淑芳林林冯建平李修兰王佑春李德富
- 关键词：感染性滴度
- 重组鼠源性细胞鼠细小病毒(MMV)检测方法的建立及应用
- 目的：建立重组细胞中鼠细小病毒检测的NB324K感染试验及实时荧光定量PCR检测方法，并分别进行了方法学分析。方法：将不同稀释度的MMV悬液分别感染NB324K细胞，通过观察细胞病变和结晶紫染色结果检测NB324K感染法...
- 吴雪伶樊金萍林林冯建平孟淑芳李德富
- 关键词：细小病毒荧光定量PCR重组细胞
- 文献传递
- STR图谱用于生物制品生产用人源细胞鉴别的研究被引量：10
- 2009年
- 目的研究短串联重复序列（STR）图谱鉴别方法在生物制品生产用人源细胞质量控制中的应用。方法采用PCR一毛细管电泳分析方法，分别建立检测9个和16个人STIR位点的方法鉴别人源细胞，并对来自不同生物制品生产单位、不同传代水平的病毒性疫苗生产用人二倍体细胞株及基因治疗制品生产用的293细胞进行STR图谱的检测和比较。结果建立人源细胞株的STR图谱分析方法。13个单位提供的病毒疫苗生产用21株人二倍体细胞中，除1株细胞并非MRC-5细胞外，其他细胞均可认定为本细胞，且未发现交叉污染现象。而8个单位提供的12株基因治疗用293细胞的STIR图谱则存在明显差异，提示该类细胞可能存在来源、基因修饰改造背景不清及传代过程中遗传特性不稳定的因素。结论STR图谱分析灵敏度高、特异性强，可用于生产用人源细胞株／系间的鉴别。
- 孟淑芳吴瑜冯建平吴雪伶王佑春李德富
- 关键词：细胞鉴别人二倍体细胞293细胞
