周琳华
- 作品数：10 被引量：53H指数：6
- 供职机构：南方医科大学基础医学院基因工程研究所更多>>
- 发文基金：国家公益性行业科研专项广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程医药卫生农业科学更多>>
- 改良Chelex-100法快速提取转基因农产品DNA被引量：6
- 2011年
- 旨在建立一种从转基因农产品中快速提取DNA的方法。分别采用改良Chelex-100法和常规CTAB法提取转基因大豆GTS40-3-2基因组DNA,测其浓度和纯度,PCR扩增其内源基因(Lectin)、启动子(CaMV35S)和品系特异性序列,对两种方法进行比较和评价,并研究两种方法提取的DNA在-20℃下保存一个月内的检测效果,以及改良Chelex-100法在玉米、小麦和水稻等其他转基因农产品的应用效果。结果表明,改良Chelex-100法能够快速在1.5 h之内从样品中提取DNA,所提取的DNA直接用于PCR扩增反应,产物电泳条带清晰明亮。两种方法提取的DNA在-20℃下保存一个月内的检测效果未见明显差别。该方法在玉米、小麦和水稻等转基因农产品的应用效果稳定。因此,改良Chelex-100法提取的DNA可以作为PCR扩增模板用于转基因农产品检测。该方法具有经济、简便、快速、安全的特点,适合转基因农产品大规模筛选和鉴别。
- 蔡翠霞肖维威康文杰周琳华吴永彬郑远金马文丽
- 关键词：CTAB法DNA提取PCR
- 苏云金芽孢杆菌Cry1A(b)抗虫基因LAMP检测方法的建立与应用被引量：7
- 2012年
- 以转基因玉米MON810为模板,针对Cry1A(b)抗虫基因核酸保守序列设计特异性引物,建立LAMP检测体系。对该体系的可行性、灵敏性、特异性进行分析,并应用于转基因产品的检测。研究结果显示该方法快速简单、灵敏度特异性高、结果可视化,可应用于转基因产品中Cry1A(b)基因的初步筛选。
- 周琳华肖维威吴永彬蔡翠霞康文杰刘唐书马文丽
- 关键词：苏云金芽孢杆菌环介导等温扩增技术
- 一种检测转基因植物成分的重组质粒及其应用
- 本发明涉及一种检测转基因植物成分的重组质粒，该质粒包括载体和基因片段，其特征在于，所述的基因片段由叶绿体RBCL基因的特异性序列、花椰菜花叶病毒35S(CaMV35S)启动子的特异性序列和根农杆菌(NOS)终止子的特异性...
- 肖维威刘唐书周琳华马文丽
- 文献传递
- 植物油DNA的高效提取方法研究被引量：10
- 2014年
- 针对植物油中DNA含量极低、DNA序列片段短、破坏严重的特点,以食用植物油为原料,旨在建立一种从植物油中稳定、高效提取DNA的方法。实验采用硅膜吸附柱法提取植物油基因组DNA,PCR扩增其相应内源基因进行质量鉴定,再针对通用的外源基因CaMV35S启动子进行PCR、LAMP和实时荧光PCR检测对该方法进行评价。结果表明:该方法提取的DNA质量可靠,采用PCR、LAMP和实时荧光PCR技术成功地检测出了植物油中的CaMV35S启动子。因此,硅膜吸附柱法提取的植物油DNA可以作为PCR、LAMP、实时荧光PCR扩增模板用于转基因成分的检测,该方法经济、稳定、安全,为植物油的基因检测奠定了基础。
- 蔡翠霞肖维威吴慧慧周琳华吴永彬耿启斌马文丽
- 关键词：植物油DNA提取转基因检测
- 环介导等温扩增技术及其在病原微生物检测中的应用被引量：3
- 2013年
- 环介导等温扩增(LAMP)技术是近年发展起来的一项新的快速核酸恒温扩增技术,具有高效、快速、特异、易检测、易操作等特点,自面世以来被科学家认为是能替代常规PCR的一项扩增技术,非常适用于现场检测和基层检测。本文就LAMP技术的原理、特点、进展及其在病原微生物检测中的应用进行了简要的概述。
- 肖维威周琳华郑文岭马文丽
- 关键词：环介导等温扩增病原体
- APC11基因真核表达质粒构建及鉴定
- 2010年
- 目的克隆扩增APC11开放阅读框基因片段，构建其真核表达重组质粒，为后续研究其功能做准备。方法按照GenBank中人APC11序列设计引物，以HeLa细胞cDNA为模板，扩增出基因片段。该片段与真核表达载体pEGFP-C1连接，得到的重组质粒经双酶切和测序鉴定后用Western印迹检验表达。结果扩增片段长度为285bp，重组真核表达质粒经双酶切鉴定后测序鉴定正确。Western印迹证实pEGFP—C1-APC11在真核细胞内表达。结论成功克隆了APC11基因并构建了pEGFP—C1-APC11真核表达重组质粒，Western印迹证实其表达良好，对该基因功能的深入研究打下了坚实基础。
- 周琳华郑文岭黄海丽张宝赵蕊马文丽
- LAMP技术检测食品中转基因成分CaMV35S启动子的研究被引量：8
- 2013年
- 目的:建立一种快速检测CaMV35S启动子基因的环介导等温扩增技术检测方法。方法:针对CaMV35S启动子设计4对特异性引物,在链置换酶(Bst酶)作用下,65℃扩增1h。通过对转基因大豆GTS40-3-2等8种转基因标准品的检测,对该方法进行特异性评价。以F3、B3为引物,转基因大豆GTS40-3-2为模板,纯化后的PCR扩增产物与pMD-18T载体连接,构建含有CaMV35s启动子的质粒标准分子。配制7个浓度梯度的标准质粒分子,进行灵敏度分析。同时应用该方法和荧光PCR方法检测35种农产品及其加工品。结果:该方法特异性强,结果可视,检测灵敏度达200copies/μL,35种样品的检测结果与SYBRGreen荧光PCR检测结果一致。结论:建立的LAMP法具有快速,简单,可视化,灵敏度高和特异性强等优点,可应用于转基因产品的初步筛选。
- 肖维威周琳华吴永彬蔡翠霞马文丽刘唐书
- 关键词：花椰菜花叶病毒环介导等温扩增技术转基因食品
- 转基因大豆、玉米、油菜和水稻品系特异性检测质粒标准分子的快速构建及应用被引量：11
- 2011年
- 本文采用重叠延伸PCR技术快速构建了转基因大豆GTS40-3-2、玉米NK603、油菜RT73和水稻TT51-1的4种品系作物的质粒标准分子.经快速PCR鉴定及测序分析验证后,将构建的阳性质粒标准分子应用于实时荧光定量PCR标准曲线的构建,并建立其相应的荧光定量PCR检测体系,同时对该体系的扩增效率、精确度、灵敏度等指标进行了评估.结果显示,建立的实时荧光定量PCR检测体系中,目标序列的扩增效率均在97.434%～101.479%正常范围内(R2≥0.995),定量极限为20 copies,表明我们已成功构建了这4种转基因作物的品系质粒标准分子,并能有效应用于实时荧光定量PCR标准曲线的构建.
- 吴永彬肖维威张宝蔡翠霞康文杰周琳华刘唐书马文丽
- 关键词：转基因重叠延伸PCR实时荧光定量PCR
- 抑菌蛋白Reg3A的表达纯化与功能被引量：1
- 2011年
- 利用原核表达系统表达人源抑菌蛋白Reg3A,经包涵体的复性和纯化获得有体外抑菌功能的活性抑菌蛋白,并对其体外抑菌功能进行初步研究。构建Reg3A原核表达载体PET-32a-Reg3A转化补充稀缺tRNA基因的表达菌株大肠杆菌BL21-Codonplus,阳性重组子采用诱导培养基诱导5h后,采用超声破碎的方法提取包涵体蛋白,经包涵体蛋白的纯化和透析复性后通过Ni-NTA亲和层析交换柱,获得纯度达95%的蛋白质。Western blot鉴定显示在15 kD处有特异性条带。使用纯化后的蛋白进一步进行抑菌圈实验和抑菌活性实验,对获得蛋白的体外抑菌活性进行评估,从而为进一步进行Reg3A蛋白功能的评估及应用奠定基础。
- 高洋郑文岭石嵘彭翼飞周琳华马文丽
- 关键词：包涵体复性抑菌活性
- LAMP法在转基因食品检测中的应用研究
- 转基因食品是利用现代分子生物技术,将生物某些基因转移到其他物种中,通过改造生物的遗产物质,使其在形状、营养物质、消费品质等方面为人们所需要。以转基因生物为直接食品或为原料加工生产的食品就是“转基因食品”。 转基因食品的主...
- 周琳华
- 关键词：环介导等温扩增技术转基因检测
- 文献传递
