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表达传染性法氏囊vp2基因的重组马立克病疫苗对SPF鸡和商品鸡的免疫保护试验被引量：1: 2007年; 国内外很多学者都在进行着传染性法氏囊(Infectious bursal disease,IBD)各种基因工程疫苗的研制,IBDV-vp2基因在多种载体中得到表达并取得了较好的保护效力。本实验室已构建了表达IBDV-vp2基因的重组马立克氏病病毒。本研究对该重组马立克氏病病毒疫苗的遗传稳定性以及对SPF鸡和含有母源抗体的商品鸡的免疫保护作用进行了评价。结果表明,103 PFU和104 PFU剂量的重组病毒免疫后对SPF鸡抗传染性法氏囊标准强毒的保护率分别为53%和73%。104 PFU剂量的重组病毒免疫后对含有母源抗体的商品鸡抗传染性法氏囊标准强毒的保护率为87%,结果显示重组疫苗具有一定的应用前景。; 周雪媚李永清佘锐萍章振华王宏俊王德成熊金茂彭开松; 关键词：VP2基因重组马立克氏病病毒免疫保护

表达禽流感病毒M2基因的重组马立克氏病病毒的构建: 禽流感(AvianInfluenza，AI)是由禽流感病毒(AJV)引起的一种高度接触性传染病，几乎所有的野生及家养禽类都可感染，该病经常给养禽业造成严重的经济损失。M2蛋白是禽流感病毒的跨膜蛋白，含有高度保守的抗原表位...; 李永清杨敬周雪媚霍惠玲; 关键词：禽流感病毒重组马立克氏病病毒绿色荧光蛋白多价疫苗真核表达质粒特异性抗体; 文献传递

表达禽流感HA基因的重组马立克氏病病毒的构建被引量：4: 2007年; 本试验首先用RT-PCR方法扩增出H9N2亚型禽流感病的HA基因,大小约1 700 bp,将其克隆到真核表达载体pcDNA中,并将该真核表达载体上的CMV启动子控制的含LacZ和HA基因表达盒克隆入马立克氏病病毒US2基因中,成功的构建了马立克氏病病毒的转移载体。然后,通过脂质体方法转染已感染马立克氏病病毒的鸡胚成纤维细胞(CEF)中,通过蓝斑筛选获得重组病毒。该重组病毒通过PCR方法鉴定证实其基因组中含有完整的HA基因。免疫酶反应和Western-blot证实重组病毒表达了禽流感HA蛋白,表达的HA蛋白具有血凝活性。; 周雪媚霍惠玲佘锐萍李永清冯国民章振华王宏俊; 关键词：禽流感病毒 HA基因重组马立克氏病病毒

禽流感病毒HA1基因在原核系统中表达: 用RT-PCR方法扩增出禽流感(AIV)A/Muscovyduck/Fujian/2/2000(MF00)株部分HA基因,大小约900bp,将其克隆到pMD18–T载体上,并进行了序列的分析。通过BamHⅠ和XholⅠ酶...; 周雪媚李永清章振华霍惠玲张培君佘锐萍; 关键词：禽流感病毒 HA基因原核表达; 文献传递

表达禽流感病毒M2基因的重组马立克氏病病毒的构建被引量：5: 2007年; 将禽流感病毒M2基因克隆于真核表达质粒pIRES-EGFP中,使其位于pCMV启动子的调控下,并与绿色荧光蛋白基因(EGFP)串联后,将上述串联基因插入到含MDV CVI988的非必需区US基因的重组质粒pUS2中,构建带标记的重组质粒,然后将此重组质粒转染感染了MDVCVI988的鸡胚成纤维细胞,利用同源重组的方法,筛选了表达禽流感病毒M2基因的重组病毒MDV1。经PCR、dot blotting,Western blotting等实验的结果表明,禽流感病毒M2基因的确插入到MDV1(CVI988)基因组中并获得表达。重组MDV1免疫1日龄SPF鸡21天后,用ELISA可检测到M2蛋白的特异性抗体。接种了重组病毒rMDV的鸡体内针对H9N2疫苗血凝素的抗体滴度(p<0.05)明显提高,以禽流感病毒AIVA/Chicken/Guangdong/00(H9N2)攻毒后进行病毒重分离试验的结果发现,重组病毒能有效地降低病毒的排出量(p<0.01),说明该重组病毒可以用于防制禽流感的免疫。; 李永清杨敬罗长保周雪媚张莉章振华; 关键词：禽流感病毒马立克氏病病毒

禽流感病毒分离株H5N1非结构蛋白的表达及ELISA检测方法的初步建立: 以H5N1亚型禽流感毒株基因组RNA为模板,利用RT-PCR技术,扩增禽流感病毒分离株(H5N1)的NS1基因,得到的基因片段与T载体连接,重组质粒经BamH Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切后与载体pET32a连接,转化宿主BL...; 霍惠玲李永清周雪媚; 关键词：非结构蛋白 ELISA检测; 文献传递

表达传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因的重组马立克氏病病毒的构建被引量：6: 2005年; In this study,a 1.35 kb DNA fragment encoding the VP2 protein of infectious bursal disease CJ801 isolate was obtained by PCR and the sequence was determined in T vector.The VP2 gene was cloned into the vector of pcDNATM4/His/LacZ,then the expression cassette including the VP2 gene of IBDV and LacZ gene of E.coli controlled by CMV promoter were inserted into US2 gene of MDV CVI988/Rispens to give a transfer vector of pUS2-VP2.The complex of pUS2-VP2 and DOTAP was transfected into MDV infected CEF.The recombinant MDV expressing LacZ gene were selected and purified on 96-well plate by blue plague.The complete VP2 gene inserted into MDV was detected by PCR.Western blot and immunostaining results demonstrated that VP2 protein of IBDV was expressed by recombinant MDV.; 周雪媚李永清张培君王宏俊佘锐萍章振华罗长保; 关键词：传染性法氏囊病病毒 VP2基因

鸡胚接种技术前景展望被引量：4: 2003年; 在不久的将来,能保护鸡只抵抗多数或全部疫病的多价鸡胚接种疫苗以及对鸡胚安全的重组或亚单位疫苗可能会用于家禽生产。新一代的鸡蛋接种机能最大程度地减少疫苗的浪费,因为它只给特定性别的活胚接种疫苗。鸡胚接种技术的发展也会刺激其他养禽业效仿肉鸡养殖业,使鸡胚免疫技术更普及。这种技术的商业化也许会促使其应用扩大到疫苗接种以外的领域,如性别鉴定、免疫增强剂和促生长剂的添加及鸡胚给养。; Jagdev M.SharrnaCathering A.Ricks周雪媚; 关键词：疫苗接种多价疫苗性别鉴定免疫增强剂促生长剂病毒疫苗

共表达鸡传染性法氏囊病毒VP2基因和鸡补体因子C3d基因的真核表达质粒的构建: 2007年; 周雪媚佘锐萍李永清章振华王宏俊王德成熊金茂; 关键词：鸡传染性法氏囊病毒真核表达质粒 VP2基因 D基因共表达细胞免疫应答

表达传染性法氏囊(IBDV)VP2基因的重组马立克氏病毒的构建: 本试验首先用PCR方法扩增出传染性法氏囊病毒(IBDV)株的VP2基因,将其克隆到T载体上,并进行序列分析.然后将其亚克隆到真核表达载体pcDNATM4/His/LacZ中,并将该真核表达载体上的CMV启动子和增强子控制...; 周雪媚李永清陈小玲张培君佘锐萍; 关键词：传染性法氏囊 VP2基因马立克氏病毒; 文献传递

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周雪媚