孔艳
- 作品数：31 被引量：62H指数：5
- 供职机构：中国药品生物制品检定所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 中国黄热疫苗减毒株和世界卫生组织黄热疫苗标准株基因全序列分析被引量：5
- 2009年
- 目的研究中国黄热疫苗生产用减毒株与世界卫生组织(WHO)黄热疫苗标准株的基因序列,了解其核苷酸序列变异程度,和与其相关的氨基酸是否发生突变。方法根据基因库(GenBank)中收录的黄热病毒(Yellow Fever Virus,YFV)17D序列设计引物,提取该两株YFV的核酸,逆转录后进行聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)扩增病毒各部分基因片段,PCR产物纯化后直接测序,5'和3'端TA克隆后进行测序,然后进行遗传进化分析。经核苷酸序列测定进行序列比对分析。结果经序列测定后,进行两株YFV的序列比对,并与GenBank中收录的其它相关YFV17D疫苗株和野毒株进行序列比对,发现中国黄热疫苗生产株与WHO黄热疫苗标准株间的核苷酸序列并未发生较大变异,核苷酸和氨基酸的同源性分别约为99%和99%。其重要病毒抗原E蛋白也未发生较大突变,但发现E区与毒力密切相关的173位氨基酸发生回复突变,进一步通过系统发生分析说明两者亲缘关系十分接近。结论传代过程中,中国黄热疫苗株和WHO黄热疫苗标准株在基因水平上除个别外未发生较大改变,其基因组具有一定的稳定性。
- 李静俞永新董关木孔艳安祺杨立宏
- 关键词：黄热病毒突变
- SARS灭活疫苗毒种特性和效力试验方法的研究和建立
- 2006年
- 目的验证SARS灭活疫苗生产用毒种和建立疫苗效力试验方法和评价疫苗有效性的方法和初步标准。方法将SARS灭活疫苗进行系列稀释后免疫小鼠、原液疫苗免疫家兔,用异株病毒作为攻击毒以蚀斑减少法测定血清中和抗体,并与一组SARS病人恢复期血清的中和抗体水平进行比较,初步建立疫苗的效力试验方法和评价标准。结果疫苗以不同稀释度免疫小鼠,能产生随不同稀释度疫苗相应梯度的中和抗体滴度,用原倍疫苗免疫的小鼠血清中和抗体可达495.2;原倍疫苗免疫家兔所产生的中和抗体GMT为55.0～79.9。无论是小鼠或家兔所产生的中和抗体对广东分离的病毒均较北京分离的病毒为高。南北不同区域的SARS病人恢复期血清中和抗体GMT为50.12～54.95,且发现北方人群样本的抗体高于南方人群样本。结论用小鼠和家兔作疫苗的效力试验模型具有较好的敏感性和重复性,且产生的抗体水平较高;选用的攻击病毒对多批用不同毒株生产的疫苗免疫后的动物抗体具有较高的一致性,可用于评价疫苗的效力。
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- 关键词：灭活疫苗中和抗体效力试验
- SARS疫苗质量标准的研究和建立
- 董关木安祺刘文雪杨立宏孔艳王军志舒跃龙俞永新
- 该课题建立了整套人用疫苗质量检定的方法和相应的标准。在国际上首次建立了SARS冠状病毒空斑形成试验和空斑减少中和试验。在疫苗研发用毒种无外源因子污染的验证中，在用普通的常规验证方法无法确证的情况下，用基因芯片辅助检测疫苗...
- 关键词：
- 关键词：非典型肺炎灭活疫苗
- 减毒活疫苗中逆转录酶活性检测被引量：7
- 2003年
- 逆转录酶 (RT)是目前发现的所有逆转录病毒的一个重要标志 ,凡是逆转录病毒均携带逆转录酶 ,逆转录酶活性的测定可以反映出制品中是否有逆转录病毒的污染 ,不受病毒基因序列的影响。采用PCR法进行逆转录酶活性检测方法 ,以整个生活周期中无DNA过程的MS2RNA为模板 ,设计一对引物 ,在逆转录系统中加入待检样品 ,经过RT PCR扩增后 ,放大检测对象物进行观察 ,从而了解制品中是否存在逆转录酶的污染 ,继而间接推测其是否污染逆转录病毒。对不同生物制品厂家生产的减毒活疫苗的逆转录酶活性进行检测 ,发现在一些疫苗里有逆转录酶活性阳性。
- 孔艳李津安祺杨立宏刘文雪董关木
- 关键词：减毒活疫苗逆转录酶酶活性活性测定
- SARS灭活疫苗效力试验的研究和建立
- 自从我国爆发SARS后在我国政府的协调下对SARS的临床和流行病学等的研究取得了巨大的进展。同时由于国际间合作,我们现在已知道SARS传染病是由于一种人类的coronavirus(HCoV)传染所致,现定名为SARS-C...
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- 文献传递
- 一步完成逆转录酶活性检测法
- 目的:建立简单快捷的逆转录酶活性检测方法。方法:在传统逆转录酶活性检测方法的基础上减少试验步骤、优化试验条件、降低反应体系PH值及增加琼脂糖凝胶浓度。结果:通过减少和优化试验方法减少了操作步骤,使检测灵敏度增加的同时也使...
- 孔艳安祺杨立宏董关木俞永新
- 关键词：假阳性
- 文献传递
- 检测单碱基错配-PCR方法的发展
- 1998年
- ＰＣＲ已用于ＤＮＡ诊断。连接酶链反应（ＬｉｇａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ．ＬＣＲ）做为ＰＣＲ方法的补充得到进一步发展。应用热稳定ＤＮＡ连接酶，既能扩增ＤＮＡ，同时也能区分单碱基的替换。当碱基完全互补时，这个连接酶能对两个紧密相邻的寡核苷酸进行共价连接，若连接处发生了一个碱基突变，便不能使两个寡核苷酸有效连接，从而不能扩增产物。
- 孔艳俞永新
- 关键词：DNA诊断PCRLCR
- 肾综合征出血热病毒Z10株在Vero细胞上传代适应和增殖动态被引量：2
- 2000年
- 目的为了肾综合征出血热病毒滴度达到规模化生产要求。方法将肾综合征出血热病毒 Ｚ１０ 株在Ｖｅｒｏ细胞上传代适应，不同时间取样，测定病毒滴度。结果从第２代即可稳定达到高滴度。转瓶培养比静 止培养的病毒峰值出现的更早，第 ４ ｄ即可达到１０８／ｍｌ以上，且可多次收液。结论初步确立了疫苗生产中病毒制 备工艺。
- 姚智慧董关木俞永新孔艳刘文雪安祺
- 关键词：肾综合征出血热病毒VERO细胞传代适应
- 乙型脑炎减毒株SA14-14-2全长cDNA克隆感染性的研究被引量：3
- 2010年
- 目的在获得乙型脑炎病毒(JEV)全长cDNA分子的基础上,建立感染性转录体,获得恢复病毒,为JEV致病机理、疫苗研制及分子病毒学研究提供方法。方法将全长JEV cDNA分子克隆入改造后的pBluescript KS I(I+)载体上,经T7启动子体外转录,在Lipofectamine2000介导下,将转录产物转染入BHK-21细胞,经RT-PCR、测序、间接免疫荧光试验及噬斑试验鉴定恢复病毒。结果转录产物转染BHK-21细胞后,观察到明显的细胞病变;收获恢复病毒,经RT-PCR、测序、间接免疫荧光试验及噬斑试验证实为JEV。结论已建立了JEV全长cDNA克隆经体外转录获得JEV感染性RNA的方法,为JEV分子生物学及疫苗研究等奠定了基础。
- 李静俞永新董关木安祺杨立宏孔艳景川
- 关键词：日本乙型脑炎病毒全长CDNA体外转录
- 肾综合征出血热灭活疫苗毒株84Fli株的M和S基因核苷酸序列分析
- 2009年
- 目的对肾综合征出血热灭活疫苗毒株84Fli株的M和S基因进行核苷酸序列分析,了解该毒种的基因稳定性。方法根据汉坦病毒标准株设计特异的PCR引物,用RT-PCR技术分段扩增疫苗株84FLi株的M和S基因片段,PCR产物纯化后直接测序,并进行遗传进化分析。结果疫苗株84FLi株M基因片段的核苷酸序列与GenBank中收录的HTN型毒株的M基因核苷酸序列的同源性为83.5%～99.9%,而与SEO型毒株的同源性为70.2%～72.0%。其S基因与HTN型毒株的同源性为85.9%～99.6%,与SEO型毒株的同源性为69.4%～70.8%。疫苗株84FLi株的M和S基因的氨基酸序列与GenBank中收录的HTN型汉坦病毒84FLi株M和S基因的氨基酸序列的同源性分别为99.9%和99.5%。从遗传进化树上可以看出,疫苗株84FLi株与GenBank中收录的84FLi株位于一个独立的分支上,与其他HTN型病毒亚型分布于不同分支上,与其他HTN型病毒亚型亲缘关系较远。结论肾综合征出血热灭活疫苗毒株84FLi株M和S基因片段的核苷酸和氨基酸序列未发生较大变异,说明在传代过程中该疫苗株在基因水平上并未发生较大改变。
- 李静孔艳董关木安祺杨立宏周荔葆俞永新
- 关键词：汉坦病毒M基因S基因核苷酸序列
